第2 0 卷 ， 第4 期

    2 0 0 0年 8月

    光 谱 学 与 光 谱 分 析 S p e c t r o s c o p y a n d S p e c t r a l An a l y s i s V d . 2 0 . N o . 4 . p p 5 7 2 - 5 7 4

    Au ~ , t L s t ，2 0 1 3 0

    l t g 离子与漆树漆酶相互作用的研究

    梁 宏 王光辉 改，广西师范大学化学化丁系.5 4 1 0 0 4 桂林 武汉大学化学学院，4 3 0 0 7 2 武汉

    摘 要 以5 . 6 - 二溴一 2 ， 3二氰基氢醌( D D B Q H2 ) 为底物， 在 p H 4 . 4和( 3 0±0 . 2 ) ℃条件下， 用分光光度法考

    察了卜 离子与漆酶的结合时间对漆酶催化活性的影响。结果表明， 当结合时间短时. } 离子对漆酶的

    催化活性表现为激活作用， 僵随着卜 谚 离子与漆酶结合时间的延长而逐渐转变为抑制作用。与H 离子结

    合后的漆酶的吸收光谱表明， } 离子可能是通过取代漆酶 I型位中的C u ( 1 I ) 而对漆酶的催化活性产生抑

    ， 7 制 作 用 的。

    主题词 漆树漆酶， } 离子 澈活和抑制， 结合位点

    引 言 彳 ， { t； 哇 呷 毛

    生漆是我国重要的自然资源. 有“ 国漆” 之称。但漆酶作

    为生漆的重要成分， 其研究却相对滞后。通过金属离子与酶

    的相互作用是器入理解酶催反应机理的重要途径之一。但由

    于漆酶的底物——二酚类化合物的一级离解大都发生在

    p } 琚. 0以上， 因此很少有关于金属离子与漆酶相互作用的报

    道。作者曾报道 5 ， 6 - 2溴. 2 . 3 - 二氰基氢醌( D D B O H2 ) 的一级

    离解发生在 p } I 4 . 0左右 ， 以它为底物， 发现 F 苷 离子和稀

    土金属离子对漆树漆酶的催化活性有抑制作用. 井提出了可

    能的作用位点和机理 ， 丰富了漆酶催化氧化反应机理的

    研究。最近我们又发现 H 离子对壕酶的催化活性具有罕

    见的竞争性活化作用 。本文在此基础上， 用分光光度法进

    一

    步考察了卜 离子与漆酶的结合时问对漆酶催化氧化反

    应的影响以及 H 离子对漆酶吸收光谱的影响， 探讨了可能

    的作用位点和作用方式。

    1 实 验

    I . I 试剂和仪器

    漆酶的分离纯化及其浓度的测定和底物( 5 ， 6 - 二溴， - 2 . 3 一

    二氰基氢醌 ， 简称 1 ) 1 ) Ⅸ ) 的合成按文献 ： 1 ] 进行 } I 吕 O，N日 N 凸 ， H Ac 和 N a A c均为分析纯试剂。底物溶液用无水乙

    醇配制。将 H 用少量泳乙酸溶解， 蒸发近千. 再用去离子

    水配制成 卜 离子溶液。其余溶液均用去离子水配制。

    实验所用仪器为岛津 r , S V - 2 4 0型紫外L 可见分光光度计。

    1 . 2 } 离子与漆酶混台时间对漆酶催化活性的影响

    1 9 9 9 0 7 - 1 2收.2 0 0 0 . 0 1 4 ) 6接受；广西自然科学基金资助项 目

    蒲楚桥 ，1 9 6 9年生.广西师范太学讲师

    实验在 0 . 1 m o l · L Hi e — N a A c 缓冲液( p H4. 4 ) 和( 3 0 ±

    0 . 2 ) ℃条件下进行。用 0 . 1 n 的卜 L Na NO ~ 溶液维持反应体

    系的离子强度。取一定体积的缓冲液于 1 c r n比色皿中， 加入

    一

    定量的漆酶液和 } 离子溶液， 放置不同时间后， 加入一

    定量的底物溶液( 此时比色皿中的溶液总体积为 3 . o o ±0 . 0 2

    n 1 L) 启动反应。定时追踪反应开始后 3分钟内底物特征吸收

    处( 3 8 9Ⅲ n ) 吸光度值随时问的变化， 求出反应韧速度 。

    1 . 3 } 酵 离子对漆酶吸收光谱的骺响

    取漆酶液 2 . 0 n 1 L， 绘制 8 0 0～2 9 0 n m范围的吸收光谱

    圉 加入一定量的} 离子溶液后， 再定时绘制漆酶的吸收

    光谱图。

    2 结果与讨论

    2 . 1 } 酵 离子与漆酶混台时间对漆酶催化活性的骺响

    由于} 离子有一定的氧化性， 首先在实验条件下观察

    它对 D D B QH 2的氧化情况。发现在 D D 3 0 . I - I ~的浓度为 1 . 1

    ×1 0 。 “ mo l · L ， } 离子浓度大于 1 . 5 ×1 0 r e d· L 时，开始对 D D B ~ Hz 表现出可以观察到的氧化作用。因此在实

    验中严格控制[ D D B Q ] ： [ ] >O . 8 ： 1 。

    我们在文献[ 4] 中已报道 } 离子对 D D B O . H ,的漆酶

    催化氧化反应有活化作用 . 且漆酶的催化活性随 } 离子浓

    度的增大而升高. 如图 I 所示。

    本文研究结果表明， 随着 } 离子与漆酶结合时问的延

    长， } 离子对漆酶催化反应的激括作用逐渐转变为抑制作

    用， 如图2所示：我们已证实 } 离子不会通过影响底物的

    离解状态来实现其活化作用 。结台本文结果， 可认为 }

    离子对漆酶催化活性的活化和抑制作用是} 离子直接与

    维普资讯 http:www.cqvip.com 第 4期 光谱学与光谱分析

    漆酶作用的结果， 这种相互作用与我们曾报道的 F 离子

    和稀土金属离子： 与漆酶的相互作用不同， 并不是瞬时完成

    的， 而是一个渐进的过程，F ig . 1 I n f l u el l c e o f[ ]0 nt h e o x i d a t i o n

    o f D DB QH：c a ~ v z e d b y l a c c a s e

    [ D Ⅸ3 Q ] . 1 _ 1 x1 0 · L ， 】 a c ] ： 2 4×1 0 · L ， L a c

    e a s e w a s i n j e c t e d i n t o t h e c e l l t o i n i t i a t e t b e r e a c t i o n a f t e r DI a n d

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