收稿日期:2003 - 08 - 28

    作者简介:魏岚(1978 - ) ,女(汉族) ,辽宁沈阳人 ,硕士研究生 ,主要从事中药现代化研究 , Tel : (024) 23843711 -

    3363 ,E - mail :ksbi @mail . sy. ln. cn。

    文章编号: 1006 - 2858 (2004) 02 - 0114 - 04

    不同产地龙胆中龙胆苦苷的含量测定

    魏 岚 ,陈晓辉 ,王晓辉 ,毕开顺

    (沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016)

    摘要: 目的 建立龙胆中龙胆苦苷的 RP2HPLC定量分析方法 ,并对 38 批不同产地的龙胆进行含量

    测定。方法 采用 Diamonsil C18色谱柱(5μm ,200 mm×416 mm i1d1) ,以乙腈2水2醋酸( V∶ V∶ V =

    10∶ 80∶ 1)为流动相 ,流速为110 mL· min - 1

    ,紫外检测波长为270 nm ,柱温为室温 ,内标物为对羟基

    苯甲酸 ( 100 mg· L - 1) 。结果 龙胆苦苷在 1218～15316 mg· L - 1

    质量浓度内线性关系良好

    ( r = 01999 9) ,方法回收率为 9911 % ,RSD为 014 %( n = 9) 。38 批龙胆中龙胆苦苷的含量差异较

    大。结论 该方法可用于质量控制 ,并为不同产地龙胆中龙胆苦苷的含量比较提供了依据。

    关键词: 反相高效液相色谱法; 龙胆; 龙胆苦苷

    中图分类号: R 94 文献标识码: A

    龙胆(Radix Gentianae)为龙胆科植物条叶龙

    胆 ( Gent iana manshurica Kitag. ) 、龙 胆 ( G.

    scabra Bge. ) 、三花龙胆( G. t ri f lora Pall . ) 、坚龙

    胆( G. rigescens Franch. )的干燥根及根茎尚有非

    正品龙胆草龙胆 ( Veronicast rum sibi ricum (L1)

    Hara)的根及根茎和红花龙胆( Gent iana rhodan2

    tha Franch. )的全草。龙胆苦、寒;归肝、胆经;具

    有清热燥湿、泻肝胆火的功效[1 ];主要分布于黑

    龙江、吉林、辽宁、内蒙古 ,浙江、湖南、江西、福建、江苏、广东、新疆也有分布。龙胆苦苷(gentiopi2

    croside , GTP )是龙胆的主要有效成分 ,具有强烈

    苦味活性 ,是龙胆药苦寒的物质基础[2 ]。作者采

    用正交试验设计考察了龙胆中龙胆苦苷的提取工

    艺 ,建立了龙胆中龙胆苦苷的 RP2HPLC 定量分

    析方法 ,并对 38 批不同产地的龙胆进行含量测

    定 ,从而为龙胆的质量研究提供了科学依据。

    1 仪器与试药

    岛津 LC—10A 高效液相色谱仪 ,SPD—10A

    紫外检测器 , N2000 色谱工作站 ,岛津 UV —

    265FW型紫外分光光度仪 , Sartorius BP210S 型

    电子分析天平 ,ZFQ85A型旋转蒸发仪。

    甲醇、乙腈为色谱纯 ,其他试剂为分析纯。

    龙胆样品共 38 批 ,由本校孙启时教授鉴定 ,粉碎过 40 目筛 ,置于干燥阴凉处备用 ,来源情况

    见表 2。龙胆苦苷对照品(770 —200105) ,购于中

    国药品生物制品检定所。

    2 方法

    211 提取工艺的考察

    以龙胆苦苷含量为检测指标,选取溶剂种类、溶剂用量、提取时间、提取次数4 个因素,每个因素

    4个水平,采用L16 (45)正交表进行试验,按“215”条

    制备样品溶液,按“216”条进行测定。综合直观分

    析和方差分析的结果,确定最佳提取工艺为:用 60

    倍于药材量的甲醇回流提取2次,每次2 h。

    212 检测波长的选择

    取龙胆苦苷对照品适量 ,用甲醇配制成质量

    浓度为25 mg· L - 1

    的溶液 ,在 400～200 nm内进

    行紫 外 扫 描 , 结 果 显 示 最 大 吸 收 波 长 为

    26912 nm ,故选择270 nm为检测波长。

    213 对照品溶液的制备

    取龙胆苦苷对照品约 614 mg ,精密称定 ,置

    25 mL量瓶中 ,甲醇超声溶解定容 ,摇匀 ,作为对

    照品贮备溶液。

    214 内标溶液的制备

    取对羟基苯甲酸约 510 mg ,精密称定 ,置

    50 mL量瓶中 ,甲醇超声溶解定容 ,摇匀 ,得到质

    量浓度为100 mg· L - 1

    的内标溶液。

    215 供试品溶液的制备

    取龙胆药材粉末0145 g ,加入27 mL甲醇 ,70 ℃水浴回流 2 次 ,每次2 h ,合并提取液并过滤 ,第 21 卷 第 2 期

    2 0 0 4 年 3 月

    沈 阳 药 科 大 学 学 报

    Journal of Shenyang Pharmaceutical University

    Vol121 No12

    Mar12004 p1114

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.回收溶剂后用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中 ,定容 ,摇匀 ,从中精密吸取015 mL溶液置于10 mL

    量瓶中 ,再精密加入2 mL内标溶液 ,定容并摇匀 ,经微孔滤膜(0145μm)滤过 ,作为样品溶液。

    216 色谱条件

    色谱 柱: Diamonsil C18 ( 5μm , 200 mm ×

    416 mm i1d1) ;流动相:乙腈2水2醋酸( V∶ V∶ V =

    10∶ 80∶ 1) ;流速:110 mL· min - 1;紫外检测波长:

    270 nm;柱温:室温;进样量:10μL ;内标:对羟基

    苯甲酸(ρ= 100 mg· L - 1) 。

    217 系统适用性实验

    在上述色谱条件下 ,各峰的分离度均大于

    115 ,拖尾因子介于 0195～1105 之间 ,理论塔板数

    以龙胆苦苷计算不低于7 000。

    3 结果

    311 线性关系

    从对照品贮备液中精密吸取 015、 110、 210、310、 410、 510、 610 mL ,分别置于10 mL量瓶中,精密

    加入内标溶液2 mL ,用甲醇定容摇匀,制成质量浓

    度依次为 1218、 2516、 5112、 7618、 10214、 12810、15316 mg· L - 1

    的标准溶液 ......