第 2 0卷第 1期

    20 0 1年 3月

    南 民旌 学 院学报 (自搞科 学版 )

    J o ur n l l of So ut h — Ce n t r a l Uni v e r s i t y l ot Na t i o na l l t i e s ( Na t . Sc 1 .)

    V . 20 N o .1

    Ma r .2 0 0 1

    等 电聚 焦 电泳 法分 离鉴定 生漆 中 同工 酶

    成风桂

    ( 中南 民族 学 院化 学 系)

    陈 玉

    ( 湖 北工 学 院 生翱 工 程 系)

    摘 要 从 中 国湖 北 建始 和利 川 毛 坝生 壤 中 提 取 粗 壤酶 . 应 用 等 电 聚 焦 电 泳 ( I EF) 技 术 分 离 鉴定

    同 工酶 实 验 结 果 表 明 ， 除 了古 有 拖倦 化多 胺 或 多 酚 的 氧化 酶 ( 壤 酶 ) 外 ， 还 有醇 酶 和过 氧 化 酶 .

    氧 化酶 同 工 酶建 始 壤共 有 l 8条 带 、 毛坝 壤 有 l 5条 带 f 醇 酶 同工 酶 建 始 壤 有 2 O条 带 、毛坝 壤 有 l 8

    条 带 I 过 氧化 酶 建始 壤有 l 8条 带 、 毛坝 滚 只 有 6条 带 .并 测定 了各 酶带 的等 电 点 .

    关■ 词 中 国生滚 ； 漆树 壤 酶 ； 氧 化 酶 ； 醇 酶 ； 过 氧化 酶 ； 等 电 聚焦

    中圈分 类 号 Q5 5 4 文 献标 识 码 A 文 章 编号 1 0 0 5 — 3 0 1 8( 2 0 0 1 ) O1 - 0 0 7 8 — 0 5

    我 国是 世界上 生漆 资源最 丰富 的国家之 一 .漆 树酶是 生 漆的 重要组 成 部分 ， 它 的含 量 和

    活性 的高低直 接影 响 生漆 的质量….经过百 多年来 的研究 ， 人 们对 漆树 酶 的分 离提纯 、 对 其 中

    的漆酶 ( 氧化物酶 ) 的组成口 及其催化 作用 以及 提高其 活性 方法 的探讨 _ 5 作 出 了卓有 成效

    的贡献 .然而 迄今为 止 ， 尚未见 生漆液 中还含有 其它多 种 同工酶 的详 细报道 .为 了进一 步 了

    解 漆树 液 中的 酶 的组 成 ， 以 便更 深 入 研 究 各种 同工 酶 在 生 漆 中 的 作用 ， 本 文 应 用等 电 聚 焦

    ( I E P) 技术【 6 成 功地分离 漆液 中的各种 同工酶 ， 获 得 了清浙 的图谱 ， 测定 了各酶 带的等 电点 ， 证

    实 了中国生漆 液 中不 仅含有 多条能 艟化多 酚或多胺 的氧 化酶 带外 ， 还 含有 多种 醇酶 和过 氧化

    物酶 同工酶 带 ， 且 产地 ( 建 始 与利 川 ) 不 同 ， 同工 酶 的种 类及 活性 也有 较大差 9 ， 从而 可 用 I EP

    法鉴定不 同产地的生 漆 .方法 简便 ， 分辨率 和灵敏 度高 ， 并 可望用 于 制各 少量纯 净酶 .

    1 实验 部 分

    1 . 1 样 品、 试 剂和 仪器

    试样 ： 湖北 建 始太 术漆 ( 1 9 9 8年 产) ， 湖北利川 毛坝漆 ( 1 9 9 8年 产) .

    试剂 ： 载体两性 电解质 ( Amp h o l i n e )： p H 3 . 0 ～9 . 5 、 p H 5 ～7、 p H 6 ～9( 北 京军 事医学科 学

    院生产 ) ， p H4 ～ 6 ( 中科 院上海生物化 学研究所 生产) .

    试 剂 ： 丙 烯酰胺 ( Ae r ) 、甲叉双 丙烯酰胺 ( Bi s ) 、 过硫 酸铵 、 四甲基 乙二胺 ( TEMED) 、 磷酸 、氢 氧化钠 、 醋酸一 萘醇 、 联太茴 香胺盐 酸盐 、 固兰 RR盐 、 冰 乙酸、 丙酮、 对苯二 胺等均 分析纯 .

    仪器 ； DYY— I 4稳 流稳压 电泳仅 ( 北京六一 仪器 厂 ) ； p H— s 2型酸度 计 ( 上海 雷磁 分析仪 器

    厂) ； CS 91 0双波 长薄层扫 描仪 ( 日本岛津公 司) ； 平板 电泳槽 (自制 ， 可通冷 却水 ) .

    收藕 日期 2 O 0O 一 1 2 — 0 6

    作者 简 介 成 风桂 ( 1 9 46 ~ ). 女 . 剐 教授 . 中南 民蘸 学 院 化学 系 t 武 汉 · 4 3 0 0 7 4

    维普资讯 http:www.cqvip.com 第 l期 成风 挂 等 ； 等 电聚 焦 电 泳法 分 商鉴 定 生 攘 中同工 酶 79

    1 . 2 实验方法

    1 . 2 . 1 筘 液 的 配 制 一

    ( 1 )Ac r — Bi s混 和 液 ： 称 取 3 0 g Ac r和 0 . 8 g BL s溶 于 水 中 ， 定 窖 至 1 0 0 mL， 在 冰 箱 中

    保 存 .

    ( 2 )1 0 ( 质 量体积 比) 过硫 酸铵溶 液( 在 冰箱 中保存 ， 只 能在 1周 内使 用) .

    ( 3 )电扳液 ： 0 . 5 mo l L 的氢氧化钠 和 1 mo l L的磷 酸液 .

    1 . 2 . 2 电泳 粗 酶 样 品

    粗漆酶的提取参照文献[ 6 ] ， 制成 5 ( 质量体积比) 的水溶液为电泳样品 .

    1 . 2 . 3 制 备 凝 胶 板

    按 贮 液( 1 ) 2 . 5 mL+蒸 馏水 6 . 6 mL+Amp h o l i n e ( 具 体加 入 的不 同 p H 范 围 的量视 分 离

    对象 而定 ) +TEMED 4 O L+过硫 酸 铵液 6 O L， 混 台 均匀 ， 用 注射 器灌 入玻 璃 板槽 具 内， 约

    3 0r ai n内凝 聚 ， 板厚约 0 . 8mm.

    1 . 2 . 4 电 泳

    小 心取下 凝胶 ， 平铺 于 自制平 板槽 上 ， 接通 冷却水 ， 胶 两 端分别 加上 授 有 阳极 和 阴极 电极

    液的滤纸 条 ， 打开 电源 ， 在 1 O O ～ 1 5 0V( 2 5～1 2mA) 下 电泳 3 0mi n， 用 小片 滤纸浸 泡样 品 ， 再

    加于 凝胶上 ， 继续 电泳 ， 在 1 5 O V 下 电泳 1 5 r ai n ......