丹参病毒病病原鉴定研究

    丁远杰1

    , 吴志明2

    , 谢晓亮23

    , 朱水芳3

    , 温春秀2

    , 高必达1X

    (11湖南农业大学植物保护学院, 湖南 长沙 410128; 21河北省农业科学院 药用植物研究中心, 河北 石家庄 050051;

    31国家质检总局植物检疫所, 北京 100029)

    摘 要: 目的 鉴定我国中草药丹参病毒病的病原及其种类。方法 从自然感染引起花叶、矮化、褪绿和斑驳的丹

    参植株上分离病毒病原, 进行生物学接种、电镜观察、双抗体夹心酶联免疫吸附测定、逆转录聚合酶链式反应及基

    因克隆和序列分析。结果 通过指示植物症状、电镜下病毒粒体形状和血清学反应发现病毒分离物与黄瓜花叶病

    毒有较近的亲缘关系, 初步将该病毒分离物鉴定为黄瓜花叶病毒。通过逆转录聚合酶链式反应及基因克隆和序列

    分析, 证明该病毒分离物为一个黄瓜花叶病毒新株系。结论 感染丹参的病毒病原为黄瓜花叶病毒, 这是首次在我

    国中草药丹参上发现黄瓜花叶病毒。

    关键词: 丹参; 黄瓜花叶病毒; 电镜观察; 双抗体夹心酶联免疫吸附测定; 逆转录聚合酶链式反应; 基因克隆; 序列分析

    中图分类号: R282171013 文献标识码:A 文章编号: 0253 2670 (2003) 12 1136 04

    Iden t if ica t ion of pa thogen from Dan shen v irus disea ses in Ch ina

    D IN G Yuan2jie

    1

    , WU Zh i2 m ing

    2

    , X IE Xiao2liang

    2

    , ZHU Shu i2 fang

    3

    , W EN Chun2 x iu

    2

    , GAO B i2 dai

    1

    (11 Co llege of P lant P ro tect ion, Hunan A gr iculture U niversity, Changsha 410128, Ch ina; 21 HerbalM edicine

    Research Center, HebeiA cademy of A gr iculture and Fo rest ry Science, Sh ijiazhuang 050051, Ch ina;

    31 Inst itute of A nimal and P lant Q uarant ine, AQ S IO , Beijing 100029, Ch ina)

    Abstract : Object To iden t ify the viru s disease pathogen s and it s species f rom Dan shen (S a lv ia m il t2

    orrh iz a Bge1) w h ich is an impo r tan t k ind of Ch inese t radit ional and herbal drugs in Ch ina1Methods The

    viru s pathogen sw ere iso lated f rom natu rally infected Dan shen w ith symp tom s ofmo saic, stun t ing, ch lo ro2

    sis and mo t t le, and the iso lates w ere iden t if ied by b io logical inocu lat ion, elect ron m icro scope ob servat ion,doub le2an t ibody sandw ich2 enzym e2linked imm uno so rben t assay (DA S2EL ISA ) , reverse t ran scr ip tase2 po ly2

    m erase chain react ion (RT 2 PCR ) detect ion and gene clon ing and sequence analysis1 Results By the in2

    dicat ive p lan t symp tom s, viru s par t icles size in elect ron m icro scope and sero logical react ion s, the viru s iso2

    late w as found to be very sim ilar to cucum ber mo saic cucum ov irus (CMV ) and it w as iden t if ied as CMV

    p r im ar ily1 RT 2 PCR detect ion, gene clon ing and sequence analysis demon st rated that the iso late w as a new

    CMV iso late1 Conclus ion The viru s disease pathogen infect ing Dan shen w as CMV , th is is the f irst re2

    po r t ing of a new CMV iso late f rom Dan shen in Ch ina1

    Key words: Dan shen (S a lv ia m il torrh iz a Bge . ) ; cucum ber mo saic cucum ov irus (CMV ) ; elect ron m i2

    cro scope ob servat ion; DA S2EL ISAA; RT 2 PCR; gene clon ing; sequence analysis

    丹参S a lv ia m il torrh iz a Bge1 为唇形科鼠尾草

    属多年生草本植物, 以根入药, 别名有红根、大红袍、血参根等, 是我国一种常用大宗中草药, 也是国际上

    开发的热门药材, 主要用于治疗心血管系统疾病。近

    年来在河北安国、山东等地发现, 丹参上有一种病害

    引起丹参退化, 该病田间发病率高, 有些田块高达

    60%～ 80% , 表现为花叶、斑驳、卷叶、黄花、矮化等

    典型症状, 感病植株的根系细小, 药用成分含量降

    低, 严重影响了丹参的产量和质量。为此对本病进行

    了初步研究, 在发病组织中没有发现真菌及细菌病

    原, 判断为病毒病原的可能性较大。我们根据世界上

    已经报道的侵染唇形科植物的病毒种类, 采用指示

    植物、 DA S2 EL ISA、电镜观察及RT 2 PCR 分子检测

    等进行了系统研究, 发现了黄瓜花叶病毒和此病害

    相关, 并且可能为一新株系。

    1 材料与方法

    · 6311 · 中草药 Ch inese T radit ional and HerbalD rugs 第 34 卷第 12 期 2003 年 12 月

    X 收稿日期: 2003204218

    基金项目: 河北省科技攻关项目资助(03220111)

    3 通讯作者 Tel : (0311) 765129 E2 mail :wuzh im ing71@ho tmail1com

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.111 材料: 丹参退化病株经国家质检总局动植物检

    疫所朱水芳博士鉴定, 采自河北省农林科学院药用

    植物研究中心实验基地, 现保存在- 70 ℃冰箱 ......