·研究报告·

    川黄柏离体培养及药用成分的抑菌试验研究

    王跃华1 3

    , 徐文俊1

    , 何俊蓉2

    , 朱剑宏1

    , 孙雁霞1

    (11 成都大学 生物工程系 ,四川 成都 610106 ;

    21 四川省农业科学院 生物技术核技术研究所 ,四川 成都 610066)

    [收稿日期] 2004201210

    [基金项目] 成都市科技局重点科技项目[2003 ]12号

    [通讯作者] 3

    王跃华,Tel : (028) 89875174 ,Fax : (028) 83341003 ,E 2mail :tlfor @hotmail1com

    黄柏是芸香科植物黄皮树 Phellodendron chinense Schneid

    及黄柏树 P1 amurense Rchpr除去栓皮的干燥树皮 ,前者习称

    “川黄柏” ,后者习称“关黄柏” ,其主要成分为盐酸小檗碱 ,有

    清热消炎抗腹泻之功效。由于黄柏的主要成分与黄连相同 ,因此常用黄柏来代替黄连提取盐酸小檗碱。

    川黄柏主产于四川、贵州等地 ,关黄柏主产于东北、河北

    等地。大量试验研究表明 ,川黄柏中盐酸小檗碱的含量高于

    关黄柏。但川黄柏是雌雄异株 ,种子变异率大 ,插条难生根 ,故繁殖速度慢 ,而组织培养可以进行川黄柏的快速繁殖。本

    试验主要探索川黄柏愈伤组织的诱导及活性成分的抑菌效

    力大小研究 ,为进一步开发川黄柏药物资源奠定基础。

    1 材料与方法

    111 材料

    材料:川黄柏 C1 phellodendron 采于成都市都江堰虹口

    镇 ,经四川师范大学马丹伟副教授鉴定为芸香科植物黄皮

    树。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌来源于成都大学微生物实

    验室。

    112 方法

    11211 川黄柏离体培养 取川黄柏的叶片、叶柄、茎段和芽

    用自来水冲洗后在011 %升汞溶液中消毒 8～13 min ,再用无

    菌水漂洗3次。然后切成适当大小 ,接种在不同愈伤组织培

    养基上。30 d后将不同外植体产生的愈伤组织转接在不同

    激素配比的不定芽诱导培养基上(见表1) 。所有培养基中蔗

    糖浓度为 2010 g· L - 1

    ,琼脂浓度为 71 0 g· L - 1

    ,pH为 518～

    610 ,培养温度为(25 ±2) ℃,光照强度为 1 500～2 000 lx ,光

    照时间12 h· d - 1。

    11212 川黄柏树皮、叶和愈伤组织中抑菌试验的研究 提

    取川黄柏树皮、叶和愈伤组织中的抑菌成分 ,采用琼脂平板

    扩散法测定其抑菌效力大小。

    2 结果与讨论

    211 川黄柏离体培养

    21111 不同外植体愈伤组织的诱导 取川黄柏的叶片、叶

    柄、茎段和芽4个外植体在MS + 2 ,42D 1 mg· L - 1

    + 62BA 2 mg

    · L - 1

    培养基上进行愈伤组织诱导。每种外植体接种 6 瓶 ,每

    瓶5个。20 d后统计观察结果显示:选用不同外植体的愈伤

    组织诱导率分别是叶片 96 %;叶柄 100 %;茎段 100 %;芽

    100 %。愈伤组织的诱导难易与外植体的分化程度有关 ,一

    般认为植物组织的分化度越低越容易诱导出愈伤组织[1 ]。

    但在此诱导实验中 ,发现川黄柏的叶柄、茎段和芽都能 100 %

    诱导出愈伤组织 ,而且还进一步选用了川黄柏多年生树的茎

    段和一年生幼树茎段进行比较实验 ,结果发现老树的茎段更

    易被诱导出愈伤组织(老树茎段需5 d ,幼树茎段需 8 d) 。此

    为川黄柏外植体在愈伤组织诱导上的特殊方面。

    21112 不同培养基诱导愈伤组织比较 在 MS ,SH和 White

    培养基中分别加入植物激素 2 ,42D 1 mg1L - 1

    和 62BA 2 mg·

    L - 1

    ,以叶柄为外植体 ,在每种培养基上接种 20 瓶 ,每瓶接种

    3个 ,20 d后观察结果显示:其愈伤组织诱导率分别是MS培

    养基100 %;SH培养基100 %;White培养基5 % ......