植物生理学通讯 第 4 0卷 第 1 期，2 0 0 4 年 2月

    海南粗榧愈伤组织的诱导和培养

    符文英，杜道林 ， 符木均

    1 海南大学农学院， 海口5 7 0 2 2 8 ； 海南师范学院生物系， 海口 5 7 1 1 5 8

    提要 海南粗榧的嫩茎和嫩叶以0 . 1 %升汞消毒 1 2 mi n的效果最好。外植体在MS + 0 . 1 mg L 6 - B A+1 mg 。 L NAA+ 2

    mg · L～ 2 , 4 . D + 3 . 0 %蔗糖+ 0 . 6 %卡拉胶( p H 5 . 8 ) 培养基中能顺利诱导出愈伤组织。液体悬浮和暗培养均有利于愈伤组

    织的增殖.愈伤组织增殖的最佳培养基为MS + 0 . 1 mg · L ‘ K T+ 3 mg · L — NA A+ 3 . 0 %蔗糖( p H 5 . 8 ) 。

    关键词 海南粗榧 愈伤组织； 诱导； 增殖； 组织培养

    Ca l l u s I nd uc t i o n a nd Cul t u r e o f Ce pha l o t a xus ma n ni i

    FU We n — Yi ng‘ ，DU Da o — Li n ，FU Mu — J un‘

    C o l l e g eo fA g r o n o m y , Ha i n a n U n i v e r s i t y , Ha i k o u 5 7 0 2 2 8 ； 2 De p a r t me n t o fB i o l o g y , H a i n a nN o r ma l C o l l e g e ， Ha i k o u5 7 1 1 5 8

    Ab s t r a c t TI l e r e s u l t s s h o we d t h a t ：f 1 ) Y o u n g s t e m a n d y o u n g l e a f o f Ce ph a l o t a x u s ma n n i i we r e s t e r i l i z e d b e s t

    i n 0 . 1 % me r c u r ic c h l o r id e f o r 1 2 mi n ；( 2 ) MS me d i u m+ 0 . 1 mg · I _ 『 6 . BA+1 mg · I _ 『 NAA+ 2 mg · L- 2 ， 4 - D+ 3 . O %

    s u c r o s e + 0 . 6 %c a r r a g e e n a n ( p H 5 . 8 1 c o u l d i n d u c e c a l l i f r o m e x p l a n t s ；( 3 ) L i q u i d s u s p e n s i o n a n d d a r k c u l t u r e s

    we r e a d v a nt a g e o u s t o p r o l i f e r a t i o n o f c a l l u s ；( 4 ) MS me d i u m+ 0 . 1 mg · L KT + 3 mg · Ld NAA+ 3 . 0 %s u c r o s e

    ( p H 5 . 8 ) wa s o p t i mu m f o r p r o l i f e r a t i o n o f c a l l u s .

    Ke y wo r d s Ce ph a l ot a xu s man n i i ；c a l l u s ； i n du c t i o n； p r o l i f e r a t i o n； t i s s u e c u l t u r e

    海南粗榧是国家二级保护濒危植物I l 1 。自上

    世纪7 0年代，人们从其树皮和枝叶中分离出脱氧

    三尖杉酯碱 ( d e o x y h a r r i n g t o n i n e ) 、异三尖杉酯

    碱 ( i s o h a r r i n g t o n i n e ) 、三尖杉酯碱( h a r r i n g .

    t o n i n e ) 和高三尖杉酯碱 ( h o mo h a r r i n g t o n i n e )等

    多种生物碱 ，并经动物肿瘤抑制试验及临床应

    用，证实对各类白血病及恶性淋巴病有很好疗

    效I 3 , 4 ] 。以后，海南粗榧资源破坏严重。由于该

    树种生长缓慢，自然资源有限，很难满足 日益增

    长的临床需求。因此，对海南粗榧进行细胞培

    养，让其产生有用的次级代谢产物，以解决其资

    源保护和开发利用的矛盾很有必要。

    用细胞培养生产药用成分的工业化研究始于上

    世纪5 0年代，已有许多成功的先例 I 5 删。人们对

    三尖杉科其他树种组织培养和生物碱分析曾有过报

    道I 9 ~ 1 2 ] 。但尚未见到海南粗榧细胞培养的有关报

    道。自1 9 9 4年以来，我们开展了海南粗榧细胞培

    养、快速繁殖和生物生态学的研究I H 们 ，试图通

    过海南粗榧的细胞培养提取有效抗癌次生代谢产

    物。本文是这方面工作的继续。

    材料与方法

    海南粗榧 ( C e p h a l o t a x u s ma n n i i )采 自中国

    热带农业科学院热带植物园。取其嫩树皮、茎、叶为外植体。采用MS基本培养基，在不同培养

    阶段添加NAA ( 单位：mg · L ～，下同) 、2 , 4 一 D、6 . B A和KT等。固体培养基用0 . 6 %卡拉胶固化，3 . 0 %蔗糖，p H 5 . 8 。培养温度为( 2 5±3 ) ℃。采

    用固体和液体悬浮振荡两种培养方式。光培养以

    日光灯为光源，连续照光 1 0 ～1 2 h · d 一，光照度

    为 1 0 0 0 1 5 0 0 l x ；暗培养在暗中进行。外植体

    在流水中冲洗后，放在新洁尔灭溶液中浸洗 1 0

    mi n ，以蒸馏水洗净；于无菌条件下用 7 0 %酒精

    擦拭表面，再用7 0 %酒精浸泡 1 mi n ；最后在

    0 . 1 %升汞中消毒，消毒时间分别为 1 0 、1 2 、1 5

    和 2 0 mi n，用无菌水冲洗 3 ～4次后接种。培养

    7 d后统计污染率和观察外植体长势 ......