附子总生物碱含量测定方法比较

    何 军1, 2

    , 祝 林1

    , 奉建芳1

    (1. 上海医药工业研究院药物制剂部, 上海 200437; 2. 四川大学华西药学院, 四川 成都610041)

    摘要: 目的 比较滴定法和紫外分光光度(UV )法在测定附子总生物碱中差异, 探讨适宜附子总生物碱

    的含量测定方法。方法 用两种方法测定相同样品, 比较测定结果差异, 并考察操作步骤对测定结果的影响。

    结果 两种不同的测定方法对附子总生物碱含量测定结果有较大的影响, 滴定法的加样回收率为 97. 7% ,而

    UV 法为 75. 6% ,滴定法测定结果更准确。水分及萃取静置时间对UV 法测定结果有一定影响。结论 附子

    总生物碱含量测定以滴定法(药典法)为宜, 紫外分光光度法用于其测定有待于进一步改进。

    关键词: 附子; 附子总生物碱; 含量测定

    中图分类号: R284. 2 文献标识码:A 文章编号: 100422199 (2003) 0620020203

    中药川乌、草乌、附子等其主要有效成分为总生

    物碱, 虽然含量较低[ 1 ]

    , 但因药理作用强、有一定的

    毒性, 常作为中药的制剂质量控制的指标。2000 版

    中国药典中有关总生物碱的含量测定方法为滴定

    法[ 2 ]

    , 文献中多采用紫外分光光度法[ 3, 4 ]

    , 但哪一种

    方法更灵敏、准确和具有更好的重现性, 文献中并未

    见报道。本文以附子提取物作为样品, 对这两种方法

    用于测定附子总生物碱的含量进行比较研究, 为含

    该类成分的中药制剂的质量控制提供实验依据。

    1 仪器、材料与试剂

    仪器: 7512GW 分光光度计(安捷伦科技上海分

    析仪器有限公司)。

    材料: 乌头碱对照品(中国药品生物制品检定

    所, 批号: 072029807)。制附子(上海雷允上中药饮片

    厂)。所用试剂均为分析纯。

    2 实验方法与结果

    2 . 1 样品溶液制备

    取制附子药材适量, 粉碎成中粉, 加 85%的乙

    醇溶液加热回流2 次。醇提液经回收乙醇、浓缩、调

    pH、过滤后得提取液。提取液经大孔吸附树脂分离

    纯化, 收集 80%醇洗脱液, 经减压浓缩与药材量相

    当后所得溶液作为样品溶液。

    2 . 2 滴定(药典)法测定附子总生物碱含量精密量

    取样品液20. 0 m l蒸干, 残渣以少量水溶解, 置

    分液漏斗中, 以氨水调pH = 10～ 11, 氯仿萃取 5 次

    (10, 10, 10, 8, 8 m l) , 合并氯仿液, 回收氯仿, 水浴挥

    干, 残渣用乙醇 5. 0 m l 溶解, 精密加入硫酸滴定液

    ( 0. 01 mo l? L ) 15 m l、水 15 m l 与甲基红指示液 3

    滴, 用氢氧化钠滴定液(0. 02 mo l? L )滴定至黄色,读取消耗的N aOH 溶液的量, 计算总生物碱的含量

    [每1 m l硫酸滴定液(0. 01 mo l? L )相当于 12. 9 m g

    的乌头碱(C34H47NO 11) ]。

    2 . 2 紫外分光光度(UV )法测定附子总生物碱含

    量[ 4 ]

    2 . 2 . 1 对照品溶液制备 精密称取 12. 0 m g 乌头

    碱对照品于 50 m l 的容量瓶中, 加 1 mo l? L 盐酸溶

    液数滴, 溶解, 加等量 1 mo l? L N aOH 溶液, 用蒸馏

    水定容至刻度, 摇匀, 即得浓度为 0. 24 m g? m l的对

    照品溶液。

    2 . 2 . 2 标准曲线的制备 精密量取乌头碱对照品

    液 0、 0. 35、 0. 40、 0. 50、 0. 80、 1. 00 m l, 分别置于分

    液漏斗中, 各加蒸馏水 3. 00、2. 65、2. 60、2. 50、2. 20、 2. 00m l, 加溴麝香草酚蓝指示液2. 0m l, 邻苯

    二甲酸氢钾2氢氧化钠(pH= 6)缓冲液 5. 0 m l, 加氯

    仿10 m l, 振摇3 m in, 静置1 h, 分取氯仿液, 并加入

    0. 5 g 无水硫酸钠, 放置 0. 5 h, 以第一份为空白, 于

    410 nm 处测定吸收度, 计算回归方程, A = 0. 003 5

    M - 0. 086 9, r= 0. 999 9, 乌头碱含量在84～ 240 Lg

    范围内线性关系良好。

    2 . 2 . 3 样品测定方法 取上柱洗脱液 5. 0 m l 蒸

    干, 残渣以少量水溶解, 置分液漏斗中, 以氨水调pH

    = 10～ 11, 氯仿萃取 5 次(10, 10, 10, 8, 8 m l) , 合并

    氯仿液, 回收氯仿, 水浴挥干, 残渣用少量 1 mo l? L

    盐酸溶解后, 加入等量的 1 mo l? LN aOH 溶液, 用蒸

    馏水定容至25 m l, 摇匀。精密吸取2. 00m l, 按标准

    曲线项下测定总生物碱含量。结果见表2。

    2 . 3 两种测定方法含量测定结果的比较

    取同一样品溶液, 分别用上述两种测定方法各

    — 02 — 现代中药研究与实践 2003 年第 17 卷第 6 期 Research and P ract ice of Ch ineseM edicines

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.测定样品三份。结果见表1。

    表1 两种方法样品溶液中附子总生物碱含量结果

    方法 样品含量测定结果(mg? m l) R SD (à ) P

    滴定法 0 . 6577±0. 0068 1 . 02 < 0 . 01

    UV 法 0 . 2903±0. 0215 7 . 40

    结果表明, 两种不同测定方法所测得的结果相

    差很大(P < 0. 01) , 且滴定法重现性要优于UV 法 ......