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    4 0 · 植物保护 第 3 1卷第 1期( 2 0 0 5 ) P L ANTP R OTE C TI ON V o 1 . 3 1 No . 1( 2 0 0 5 )

    河北省大豆孢囊线虫分子鉴定及其分布

    张俊立 一， 彭德良 ，， 曹克强2

    ( 1 . 中国农业科学院植物保护研究所，北京 1 0 0 0 9 4 ； 2 . 河北农业大学植物保护学院，河北 保定 0 7 1 0 0 1 )

    摘要 2 0 0 3年， 在河北省邯郸、 邢台、 石家庄、 保定、 秦皇岛、 唐山、 张家口等地采集大豆根际土壤样品6 5份， 应用大

    豆孢囊线虫特异性引物对采集的孢囊线虫进行了分子鉴定， 结果表明从邯郸的永年、 磁县、 峰峰， 邢台的南和、 广宗、清河， 保定的南大园、 西马池、 望都、 定州， 石家庄的栾城、 鹿泉、 平山及石家庄市郊， 秦皇岛的抚宁、 昌黎， 唐山的迁

    西、 迁安、 丰润的大豆和张家口的红云豆上采集的孢囊线虫的孢囊及其二龄幼虫均为大豆孢囊线虫； 卢龙和滦县的

    样品中没有发现大豆孢囊线虫的孢囊及其二龄幼虫， 且孢囊的检出率与二龄幼虫的检出率的趋势一致。

    关键词 植物病理学； 大豆孢囊线虫； 种特异性引物； 分子鉴定

    中图分类号 S 4 3 5 . 6 5 1

    Mo l e c ul a r i de nt i f i c a t i o n a nd di s t r i b ut i o n o f He t e r o de r a gl y c i ne s i n He b e i

    Z HANG J u n - l i 一， P ENG De - l i a n g ， CAO Ke - q i a n g 2

    Ab s t r a c t S i x t y — f i v e s o i l s a mp l e s we r e c o l l e c t e d f r o m r i z h o sp h e r e o f s o y b e a n i n Xi n g t a i ，H a n d a n， B a o d i n g ，S h i j i a z h u a n g ，Qi n g h u a n g d a o ， Ta n g s h a n a n d Z h a n g i i a k o u i n He b e i P r o v i n c e o f C h i n a . Th e mo l e c u l a r d i a g n o s t i c me t h o d wa s u s e d t o

    i d e n t i f y t h e c y s t s a n d j u v e n i l e s o f s o y b e a n c y s t n e ma t o d e u s i n g d u p l e x P C R wi t h s p e c i e s - s p e c i f i c p r i me r( GI y F 1 ) ，a nd a l l

    o f t h e c y s t sf o u n d o n s o y b e a n r o o t we r ei d e n t i f i e da sHe t e r o d e r ag l y c i n e s . Th e c y s t sa ndj u v e n i l e so f s o y b e a n c y s t n e ma t o d e

    we r e f o u n d i n Yo n g n i a n，C i x i a n，F e n g f e n g ，N a n h e ， Gu a n g z o n g ，Qi n g h e ，Na n d a y u a n，X i ma c h i，Wa ng d u ，Di n g z h o u ，L u a n c h e n g ，L u q u a n ，P i n g s h a n，F u r r i n g ，C h a n gl i ，Qi a n x i ，Q i a n a n，F e n g r u n a nd Z h a n g i i a k o u ，b u t n o t f ou nd i n L u l o n g

    a nd I J 】 a n 】 ( i a n o o u n t i e s.

    Ke y wo r d s p h y t o p a t h o l o g y； He t e r o d e r a g l y c i n e s ； s p e c i e s - s p e c i f i c p r i me r ； mo l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n

    大豆孢囊线虫病是全世界大豆产区的重要病

    害之一 ， 1 8 9 9年由俄国人雅切夫斯基等在我国东

    北地区首次发现_ 1 ] ， 在中国、 美国、 俄罗斯远东地

    区、 阿根廷、 巴西、 加拿大、 哥伦比亚、 埃及、 印度尼

    西亚、 日本和韩 国等 国家普遍发生 ， 危害严重。我

    国仅东北 和黄淮海 大豆 产区每 年发生 面积就有

    1 5 0万 h m2以上 ， 受害大豆一般减产 3 0 %～5 0%，严重时甚至绝产_ 2 ] 。大豆是河北省主要油料作物

    之一 ， 全省各地均有种植 ， 1 9 9 3 ～1 9 9 7年种植面积

    扩大到4 8 . 1 万～6 2 . 8 万 h m2 ， 位于小麦、 玉米等粮

    食作物之后， 居第 3位_ 3 ] 。为了控制该病危害， 本

    研究对大豆孢囊线虫在河北省的分布和危害进行

    了调查 。

    孢囊线虫的鉴定耗时耗力， 比较困难。本试验

    采用 S u b b o t o n S . A. _ 4 j 的方法， 用两组引物扩增孢

    囊线虫的 r DNA， 以鉴定分离到的孢囊线虫是否是

    大豆孢囊线虫。第一组引物含有2个通用引物 D3 A

    和 D 3 B， 用于扩增核糖体 2 8 s基因的D3扩展区， 这

    组引物用于证明在样品中存在线虫模板 D NA， 证实

    P C R扩增的成功性， 这组引物的扩增片断可用作对

    照片断， 因为在线虫分类单元中， 2 8 s 基因长度没有

    明显的变异； 第二组引物包括大豆孢囊线虫种特异

    性引物 Gl y F1和一个通 用引物 r DNA 2， 用 于扩增

    I T S 2区的片断和部分 2 8 s 基 因， 用于证明所鉴定的

    孢囊是否是大豆孢囊线虫。

    1 材料和方法

    1 . 1 孢囊线虫的双倍 P CR检测

    1 . 1 . 1 孢囊的准备

    将各地采集到的大豆土壤样品在温室内用塑料

    袋种植大豆( 品种为 L e e 6 8 ) ， 培育新鲜有生活力的

    孢囊。在温室内种植 6 0 d后， 取土放在容量大约为

    收稿日期 ： 2 0 0 4—0 6—1 6 修订日期： 2 0 0 4—0 9—2 9

    基金项目： 国家 8 6 3 课题( 2 0 0 1 A A 2 4 9 0 5 1 ) 和十五国家科技攻关课题( 2 o 0 1 B A 5 0 9 即6 ) 。 通讯作者

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    4 L的塑料桶内 ......