第 26 卷第 4 期

    2002年 7 月

    南京林业大学学报(自然科学版)

    Journal of Nanjing Forest ry University (Natural Sciences Edition)

    Vol . 26 ,No. 4

    J ul . ,2002

    厚朴组织培养与高产细胞系建立的研究X

    童再康1 ,2

    ,朱玉球2

    ,王章荣1

    (1.南京林业大学 ,江苏 南京 210037 ;2.浙江林学院 ,浙江 临安 311300)

    摘 要:对来自厚朴种源试验林的 10 个不同基因型材料开展组织培养和高产细胞系建立研究 ,结果表明:基本培养基、激素种类与配比、外植体的取材部位等因素对厚朴愈伤组织的诱导率、生长、褐化均有显著影响。B5 + 2 ,42D 4 mg L + NAA 1 mg L 培养基的诱导率达到 100 %;而

    采用B5 +BA 1. 0～2. 0 mg L + NAA 1. 0 mg L 的培养基 ,愈伤组织的增殖率最高 ,褐化率最

    低;140、 54 两个基因型的细胞增殖最快 ,是其它基因型细胞均值的 2. 12 倍;不同的基因型、培

    养基、培养时间所产生愈伤组织细胞的厚朴酚类含量不同 ,以 140 基因型的细胞系在B5 + BA

    2. 0 mg L + NAA 1. 0 mg L 的培养基上培养 60 d为最优。

    关键词:厚朴;组织培养;愈伤组织;细胞培养;厚朴酚;和厚朴酚

    中图分类号:S722 文献标识码:A 文章编号:1000 - 2006 (2002) 04 - 0023 - 04

    Studies on Tissue Culture and the Establ ishment of a High2Yield

    Cell Line of Magnol ia of f icinal is

    TON G Zai2kang1 ,2

    ,ZHU Yu2qiu2

    ,WAN G Zhang2rong1

    (1. Nanjing Forest ry University ,Nanjing 210037 ,China ;2. Zhejiang Forest ry College ,Lin’ an 311300 ,China)

    Abstract :In this paper ,techniques for induction of callus and cell culture in Magnol ia of f icinal is have been

    studied ,with an aim to establish a cell line in which cells proliferated fast and phenol content was high.

    Based on tissue culture and the establishment of a high2yield cell line of 10 genotypes f rom a provenance test

    forest of Magnol ia of f icinal is ,it shows that such factors as basic media ,types and proportions of hormones ,and explant s had a great effect on the induction rate ,growth and browning of the callus. With a medium of

    B5 + 4 mg L 2 ,42D + 1 mg L NAA ,the induction rate reached 100 %. With the medium of B5 + 1. 2 - 2. 0

    mg L BA + 1. 0 mg L NAA ,the callus had a highest proliferation rate and a lowest percentage of brown2

    ing. Cells of the two genotypes , viz. 140 and 54 grew fastest and were 2. 12 times as many as those of other

    genotypes on the average. The content of phenols differed between calluses cultured f rom different genotypes

    and media as well as for a different period of time. The best one was the cell line of the genotype 140 cul2

    tured on the medium of B5 + 2. 0 mg L BA + 1. 0 mg L NAA for 60 days.

    Key words :Magnol ia of f icinal is ; Tissue culture ;Callus ;Cell culture ;Magnolol ;Honokiol

    厚朴( Magnol ia of f icinal is Rehd. et Wils)是我国特有的、常用珍贵中药材厚朴皮、花的原植物 ,分布

    于亚热带地区[1 ,2 ];因其特殊的分类地位和资源的日益枯竭而被列为国家珍稀濒危植物[3 ,4 ]。厚朴药材

    的有效成份主要是酚类物质和生物碱 ,其中 ,厚朴酚(Magnolol)及其异构体和厚朴酚(Honokiol)占绝对

    优势 ,药材品质优劣主要反映在这两种酚类含量差异。20 世纪 70 年代末以来 ,厚朴的人工栽培得到普

    遍重视 ,在湖北、江西、浙江、湖南、四川、河南等省相继建立了较大面积的人工林。但随着厚朴药材利用

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    X 收稿日期:2002 - 04 - 18 修回日期:2002 - 06 - 06

    基金项目:浙江省科委“九五”科研资助项目(961102111)

    作者简介:童再康(1963 - ) ,男,浙江兰溪人,浙江林学院副教授,现为南京林业大学博士生。

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.途径的不断开发 ,不仅野生资源日益减少 ,人工林资源也远远不能满足需求。

    利用现代生物技术 ,试图通过组织培养、细胞培养探讨生产药物有效成分的设想已在红豆杉、人参

    等多种植物上作了研究 ,取得了一些有益的进展[5 ,6 ]。刘贤旺等研究了凹叶厚朴( M. of f icinal is var .

    bi loba (Rehd. ) Wils)的组织培养技术和愈伤组织低温保存技术 ,取得了诱导芽形成愈伤组织的基本培

    养基[7 ,8 ]。笔者利用厚朴种源试验林中厚朴酚类物质含量高的单株材料诱导愈伤组织 ,探讨通过细胞

    培养 ,筛选细胞增殖快、厚朴酚类含量高的细胞系等技术 ,为进一步开展厚朴生物工程技术研究和了解

    厚朴酚类物质合成途径提供基础。

    1 材料与方法

    1. 1 供试外植体

    采自 7 年生厚朴种源林不同厚朴酚、和厚朴酚含量的 10 个单株 ,每株 8～10 个一级侧枝的顶芽用

    作组织培养外植体。

    1. 2 外植体的处理及组培

    1. 2. 1 外植体消毒、接种与培养

    先用洗涤剂清洗、漂净外殖体 ,在无菌条件下用 70 %乙醇消毒 45 s ,再用 0. 1 %升汞溶液浸泡

    10 min ,无菌水冲洗 ......