加减地黄饮子提取工艺的研究

    谢宁,牛英才,刘殊,关慧波,宋琳

    (黑龙江中医药大学 ,黑龙江 哈尔滨 150040)

    摘 要:目的:优选加减地黄饮子的最佳提取工艺。方法:以浸膏得率和毛蕊花糖苷及石斛总碱的含量

    为指标 ,采用正交试验对水提和醇提过程中的溶剂用量、提取时间、提取次数等因素进行优选研究 ,同时

    采用水蒸气蒸馏法提取挥发油 ,根据收油率考查加水量和提取时间。结果:本方最佳提取工艺为肉苁

    蓉、麦门冬、人参、远志、五味子、山茱萸等用8倍量70 %的乙醇回流提取 3 次 ,每次 2h :生姜、薄荷、石菖

    蒲加10倍量水6h提取挥发油:方中熟地黄、茯苓、巴戟天、石斛、大枣与醇提取后的药渣及挥发油提取

    后药渣一同加16倍的水 ,回流提取3次 ,每次1h :血竭等原粉入药。结论:用正交试验方法优选此方的

    提取工艺是可行的。

    关键词:加减地黄饮子;正交试验;毛蕊花糖苷;高效液相色谱法;制剂研究

    中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2392(2004) 04 - 0026 - 03

    收稿日期:2004 - 07 - 13

    作者简介:谢宁(1957 - ) ,男,教授,医学博士,主要从事中医教学及科研

    工作。

    地黄饮子原出自刘河间的《黄帝素问宣明论方》 ,由熟地黄、巴戟天、山茱萸、肉苁蓉等药组成 ,具有滋肾

    阴、补肾阳、开窍化痰作用 ,用于治疗喑痱证。根据老

    年性痴呆的病机和历代医家的经验及现代药理研究 ,笔者在原方的基础上减去大热温燥的附子和肉桂 ,加

    血竭等。为保证制剂质量及治疗效果 ,用正交设计法

    研究其最佳提取工艺。现对其提取工艺研究报道如

    下。

    1 仪器与药品

    Waters高效液相色谱仪(Waters 600 - 996) ,核酸蛋

    白分析仪(Du ○ R 640 BECKMAN 公司) ,METTEAE240 电

    子分析天平(Switzeerland) ,LDZ24 - 018 离心机(北京医

    用离心机厂) ,毛蕊花糖苷对照品(中国药品生物制品

    检验所1530 - 200202) ,中药材由哈尔滨市松茂药材站

    提供 ,经鉴定为正品。其余所用试剂均为分析纯。

    2 实验部分

    211 工艺设计

    山茱萸所含熊果酸 ,肉苁蓉含毛蕊花糖苷 ,麦门冬

    含皂苷及黄酮橙皮苷 ,远志含皂苷 ,五味子含五味子醇

    甲和五味子乙素等 ,以上药醇溶性较好 ,因此用乙醇回

    流提取。生姜、薄荷、石菖蒲含有挥发油 ,采用水蒸气

    蒸馏法提取。熟地黄、巴戟天、石斛、远志、大枣等中药

    有效成分水溶性较好 ,水煎即能提出主要有效成分 ,且

    达到该方具有的疗效 ,因此采用水煎煮的方法提取。

    212 醇提工艺条件的实验研究

    21211 提取工艺条件的正交安排

    考虑醇提整个环节的主要影响因素 ,选乙醇浓度

    (A) 、乙醇用量(B) 、回流时间(C) 、提取次数(D) 4 因

    素 ,每个因素3水平 ,见表1。选用L9 (34)正交表 ,试验

    安排见表2。

    表1 醇提工艺因素水平表

    水

    平

    因 素

    乙醇浓度

    (A)

    乙醇用量(倍数)

    (B)

    回流时间(h)

    (C)

    提取次数(次)

    (D)

    1 60 % 8 1 1

    2 70 % 10 2 2

    3 80 % 12 3 3

    21212 考查指标的确定及测定

    本方以熟地黄、山茱萸、肉苁蓉、巴戟天为君药 ,其

    中熟地黄和巴戟天水提 ,而山茱萸中所含熊果酸成分

    复杂 ,不易测出 ,故采用肉苁蓉中的毛蕊花糖苷为醇提

    考查指标 ,同时结合浸膏得率综合优选最佳工艺。

    21213 浸膏得率测定

    以正交表安排制得各试验号样品提取液 ,测定其

    总体积(V) ,按公式求得浸膏率。浸膏得率( %) = 干

    浸膏重(g) ×总体积(ml) 取样体积(ml) ×原药材重量

    (g) 。

    21214 毛蕊花糖苷含量的测定[1 ]

    2121411 检测波长的选择 取毛蕊花糖苷稀释于甲

    醇溶液 ,于200～400nm波长处扫描 ,确认其最大吸收

    波长为330nm ,本试验选择330nm为检测波长。

    2121412 流动相选择 分析样品溶液在不同浓度的

    流动相中的色谱行为 ,最后选择分离度满意的流动相

    · 62 · ACMP1August , 2004 ,Vol132 ,No14

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.为乙腈 - 水(20∶ 80) ,流速为1ml min。

    2121413 线性关系考察 精密称取毛蕊花糖苷对照

    品5mg ,置50ml 量瓶中 ,加流动相溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,为对照品溶液。精密吸取对照品溶液 2 ,4 ,6 ,8 ,10 μl ,分别进样 ,按拟定的色谱条件测定 ,以毛蕊花糖

    苷的进样量为横坐标 ,峰面积值为纵坐标 ,绘制标准曲

    线 ,计算回归方程为: Y = 299487X + 1139 , r = 019999。

    表明毛蕊花糖苷在(012～110 μg) 范围内线性关系良

    好。

    2121414 样品含量测定 分别取醇提正交试验号制

    得的醇提液总体积的1 30 (含肉苁蓉生药 015g) ,水浴

    蒸干 ,用甲醇充分溶解 ,并定容至 25ml 容量瓶 ,摇匀 ,作为供试品溶液。吸取上述供试品溶液各 10 μl ,注入

    液相色谱仪 ,依拟定的色谱条件进样分析测定 ,计算即

    得。

    2121415 结果 见表2。

    21215 结果分析

    分别按照浸膏得率、毛蕊花糖苷含量统计分析 ,并

    以综合得分(综合得分 =醇浸出物量最大浸出物量 ×

    015 × 100 +毛蕊花糖苷量最大毛蕊花糖苷量 ×015 ×

    100)作为综合评价指标进行评价。对表 2 中综合指标

    进行方差分析 ,结果列于表 3 ,方差分析可知乙醇用

    量、回流时间对浸膏率和毛蕊花糖苷含量有显著性影

    响( P < 0105) 。而乙醇浓度和提取次数对浸膏率和毛

    蕊花糖苷无显著影响。直观分析可知最优提取方案为

    A2B1G2D3 ,即用8倍量70 %的乙醇每次回流提取 3 次 ,每次2h。

    表2 醇提工艺表头安排及浸膏得率、毛蕊花糖苷含量

    试验号 列 号

    因素表头安排

    实验结果

    浸膏得率 ( %)

    毛蕊花糖苷 (mg每剂复方)

    综合指标

    A B C D

    1 1 1 1 1 18188 1118021 81178

    2 1 2 2 2 18143 1019397 78105

    3 1 3 3 3 19120 912054 74167

    4 2 1 2 3 20153 1614902 100100

    5 2 2 3 1 181035 815457 69183

    6 2 3 1 2 18148 818232 71176

    7 3 1 3 2 19134 1115926 82125

    8 3 2 1 3 15189 719625 62184

    9 3 3 2 1 17112 121087 78134

    均值1 781167 881210 721127 751650

    均值2 801530 701240 841463 771553

    均值3 731677 731923 751783 791170

    极差 61853 171970 121336 31520

    表3 方差分析表

    方差来源 离差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性

    A 521027 2 51320 19

    B 5211390 2 531312 19 3

    C 2841940 2 291135 19 3

    D 91780 2 1100 19

    误差 C 9178 2

    213 水提工艺条件的实验研究

    21311 水提工艺条件的正交安排

    考虑水提整个环节的主要影响因素 ,选加水量

    (A) 、煎煮时间(B)和煎煮次数(C) 3 因素 ,每个因素 3

    水平 ,试验安排见表4 ......