华山松疱锈病检疫技术的初步研究.pdf
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2006年2月23日
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参见附件(114KB，3页)。
森林病 虫通讯 1 9 9 4年 第 3期
华山松疱锈病检疫技术的初步研究
杨佐盅 金德强 粟安全 乐国富 王兴旺 — — — 一 — — — — — — ～
四川省森林扁虫甜怕检痘总站 成都 6 1 0 0 ~ 1 ) ( m l 川者广元市业 局) ( 四川省南江县国营林场)
l 、 5 7 ；’ 7 、 ， 1摘 要 以人I接种 的华山松 带疫 实生苗和 自然 感病立本 为材料 ， 用植精 显微 化 学方
法从 自配或改。 制的 2 4种染色液配方中， 垃两个发病年度的匆选、 复选及再选试验， 得到j
.
以革胺兰、 番缸花虹、 亮茸、 孔雀石嫜及苯酚品缸等为主要原料的染荆配方。 用它们检测华
山松罹 病组 织 中的松疤 锈病 菌 C r o n a r t i u m r i b i c o l a具有 特异性 强、 分 色性 好、 配方 简单、使用方便、 快速准哺午优点， 便于基屠检疫人员掌握应用
关键词 华山松 疱锈病. 检捌碡 ～ —
华 山凇 疱锈病 C r o n a ~ t i u m r i b i c O l a J . C .
F i s c h e r e x Ra b e n h o r s t 属五针拴疱锈病类 ， 是
华山松的一种毁灭性病害， 国内森林植物检疫
对象。由于该病潜育期长， 病原菌不能人工培
养， 早期诊断难度较大。迄今， 对该病的检疫诊
断方法有症状学和组织染色两类. 其中， 症状诊
断法仅在发病季节适用， 颇受时间限制， 不能满
足植物检疫工作快速、 准确的需要， 常用Gi e m—
s a染剂检测罹病组织中的菌丝体分色性差 ， 特
异性不强， 难于识别， 操作繁杂， 不便推广应用。
本研究从生产实际出发 用植物显徽化学方法
对 自配和改制的 多种染色剂配方和染色方 法进
行反复测试， 综合评定， 汰选出特异性强 分色
性好、 快速准确的疱锈病菌检测方法， 并对疱锈
病 菌的寄生特点及分布范围进行了测定， 为疱
锈病的科学治理和检疫检验提供了理论依据。
一
、材料及方法
1 . 主要试剂及器材 亚甲基兰， 天青 I， 麦
芽糖， Na ： C O ， 水溶性及醇溶性苯胺兰， 乙醇，K2 HP O ， K0H， Z n CI ： ， KI ， I 2 ， Hc I l H? s O‘ ， 番红
花红 T， 碱性品红， 酸性 品红， 苯酚， 单宁酸. 结
晶紫， 龙胆紫， 乳酸 ， 亮绿 S F， 曙红， 苏木精 . 甘
油 ， 甲醇， 甲醛， 孔雀绿， 橙 G， 草酸铵， 水合三氯
乙醛 ， 福尔马林 ， 摄影生物显微镜 ， 分析天平 ， 吸
管 ， 试剂瓶 ， 刀片 ， 蒸馏水等 。
2 . 染色剂 配方设计及筛 选
染色剂配制： 以上列常规试剂及药品配制
出包括迪纳氏染色液“ 。 、 苯胺兰染 液、 番红 花
液、 乳酚兰液， Gi e ms a液等在 内的 1 5种细胞
核、 细胞质、 细胞壁及细胞膜类染色剂 . 与
改铡及自行设计的 9 种染色剂为基础配方。
试验材料： 锈子器盛发期的 5 —6月， 在广
元市天台林场采集罹病华山松树干部锈子器发
生部位的新鲜病皮 ， 经 T AA 固定液处理 2 —
2 4 h r 后备用 。
筛选方法 ： 用试前配制的 2 4种染色剂按切
片一 ( 媒染) 一( 水洗) 一染色一水洗( 或脱水、 脱
色) 一( 浮载剂) 一镜检的程序逐个对带疫材料
作组织染色试验。 1 9 9 2发病年度的多次重复比
较试验 ， 初选 出分 色性好 、 特 异性 强 、 结果 稳定
的配方及操作简单的染色方法， 于 1 9 9 3发病季
节对其灵敏度和准确性作进一步测试验证. 经
综合评定 ， 汰选 出最佳染色剂及染色方法 。
3 . 树体不同部位的带菌情况测定 用筛选
出的优 良染色刺及染色方法检测疱锈病疫区不
同树木、 不同部位的带菌情况。( 1 ) 锈子器发生
区菌丝分布情况。锈子器盛发期. 检测， 2 5 年生
左右的病树干部锈子器发生区及其周围的新鲜
病皮 ( 病斑周围皮层的采集方法是以病斑边缘
为起 点， 横 向切 取 5 c m 宽 ， 1 0 c m 长， 纵 向切 取
·9 ·
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5 c m宽， 2 5 c m长， 深至木质部) 的带菌情况。 ( 2 )
人工接种的 2年生华山松实生苗针叶及茎部组
织的带菌情况。( 3 ) 自然发病立木的干部、 枝部
皮层及针叶组织的带菌情况 ......
华山松疱锈病检疫技术的初步研究
杨佐盅 金德强 粟安全 乐国富 王兴旺 — — — 一 — — — — — — ～
四川省森林扁虫甜怕检痘总站 成都 6 1 0 0 ~ 1 ) ( m l 川者广元市业 局) ( 四川省南江县国营林场)
l 、 5 7 ；’ 7 、 ， 1摘 要 以人I接种 的华山松 带疫 实生苗和 自然 感病立本 为材料 ， 用植精 显微 化 学方
法从 自配或改。 制的 2 4种染色液配方中， 垃两个发病年度的匆选、 复选及再选试验， 得到j
.
以革胺兰、 番缸花虹、 亮茸、 孔雀石嫜及苯酚品缸等为主要原料的染荆配方。 用它们检测华
山松罹 病组 织 中的松疤 锈病 菌 C r o n a r t i u m r i b i c o l a具有 特异性 强、 分 色性 好、 配方 简单、使用方便、 快速准哺午优点， 便于基屠检疫人员掌握应用
关键词 华山松 疱锈病. 检捌碡 ～ —
华 山凇 疱锈病 C r o n a ~ t i u m r i b i c O l a J . C .
F i s c h e r e x Ra b e n h o r s t 属五针拴疱锈病类 ， 是
华山松的一种毁灭性病害， 国内森林植物检疫
对象。由于该病潜育期长， 病原菌不能人工培
养， 早期诊断难度较大。迄今， 对该病的检疫诊
断方法有症状学和组织染色两类. 其中， 症状诊
断法仅在发病季节适用， 颇受时间限制， 不能满
足植物检疫工作快速、 准确的需要， 常用Gi e m—
s a染剂检测罹病组织中的菌丝体分色性差 ， 特
异性不强， 难于识别， 操作繁杂， 不便推广应用。
本研究从生产实际出发 用植物显徽化学方法
对 自配和改制的 多种染色剂配方和染色方 法进
行反复测试， 综合评定， 汰选出特异性强 分色
性好、 快速准确的疱锈病菌检测方法， 并对疱锈
病 菌的寄生特点及分布范围进行了测定， 为疱
锈病的科学治理和检疫检验提供了理论依据。
一
、材料及方法
1 . 主要试剂及器材 亚甲基兰， 天青 I， 麦
芽糖， Na ： C O ， 水溶性及醇溶性苯胺兰， 乙醇，K2 HP O ， K0H， Z n CI ： ， KI ， I 2 ， Hc I l H? s O‘ ， 番红
花红 T， 碱性品红， 酸性 品红， 苯酚， 单宁酸. 结
晶紫， 龙胆紫， 乳酸 ， 亮绿 S F， 曙红， 苏木精 . 甘
油 ， 甲醇， 甲醛， 孔雀绿， 橙 G， 草酸铵， 水合三氯
乙醛 ， 福尔马林 ， 摄影生物显微镜 ， 分析天平 ， 吸
管 ， 试剂瓶 ， 刀片 ， 蒸馏水等 。
2 . 染色剂 配方设计及筛 选
染色剂配制： 以上列常规试剂及药品配制
出包括迪纳氏染色液“ 。 、 苯胺兰染 液、 番红 花
液、 乳酚兰液， Gi e ms a液等在 内的 1 5种细胞
核、 细胞质、 细胞壁及细胞膜类染色剂 . 与
改铡及自行设计的 9 种染色剂为基础配方。
试验材料： 锈子器盛发期的 5 —6月， 在广
元市天台林场采集罹病华山松树干部锈子器发
生部位的新鲜病皮 ， 经 T AA 固定液处理 2 —
2 4 h r 后备用 。
筛选方法 ： 用试前配制的 2 4种染色剂按切
片一 ( 媒染) 一( 水洗) 一染色一水洗( 或脱水、 脱
色) 一( 浮载剂) 一镜检的程序逐个对带疫材料
作组织染色试验。 1 9 9 2发病年度的多次重复比
较试验 ， 初选 出分 色性好 、 特 异性 强 、 结果 稳定
的配方及操作简单的染色方法， 于 1 9 9 3发病季
节对其灵敏度和准确性作进一步测试验证. 经
综合评定 ， 汰选 出最佳染色剂及染色方法 。
3 . 树体不同部位的带菌情况测定 用筛选
出的优 良染色刺及染色方法检测疱锈病疫区不
同树木、 不同部位的带菌情况。( 1 ) 锈子器发生
区菌丝分布情况。锈子器盛发期. 检测， 2 5 年生
左右的病树干部锈子器发生区及其周围的新鲜
病皮 ( 病斑周围皮层的采集方法是以病斑边缘
为起 点， 横 向切 取 5 c m 宽 ， 1 0 c m 长， 纵 向切 取
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5 c m宽， 2 5 c m长， 深至木质部) 的带菌情况。 ( 2 )
人工接种的 2年生华山松实生苗针叶及茎部组
织的带菌情况。( 3 ) 自然发病立木的干部、 枝部
皮层及针叶组织的带菌情况 ......
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