广 西 植 物 Gu i h a i a 1 0(1)：3 9 一l 4 .1 9 9 0

    几种植物原生质体的扫描电镜观察

    何若天 吴丹红

    (广西农学院农学系 )

    李景植

    (朝鲜.沙里院农业大学生物系 )

    摘要 扫描电镜观察表朝， 分离自马铃薯 萱草。甘蔗、术薯和落花生等不同植物和组织的康

    表面扫描图象的差异似与不同种植物有关.与组织源不同更有密切关系.

    原生质体镀膜前，馀布于已镀膜的盖玻片支持物上的原生质体很少或无 凹 陷现象。涂布于巳

    镀膜的双面胶支持物上的原生质体凹陷严重.

    关键词 扫描电镜：原生质体：马铃薯；萱草；甘蔗：术薯：落花生

    扫描电子显微镜检在研究游离原生质体培养过程中胞壁再生过程、形态变化，细胞分裂

    及嗣后的发育过程有重要作用。原生质体由于已脱离了细胞壁. 因而非常脆弱. 给制片操作带

    来一定困难，尤其是高度液泡化的原生质体很易发生瓦解 … 。一个剐游离出来的、处 于 高

    渗 介 质窆 星 建 壁 样的 ? 国 内 尚 罕 见 有 关 报 道 。 本 文 报 道 我 们 对 萤 草 ， 马锋薯，甘蔗，木薯和 落花生等五种植物的原生质体的制备和扫描电镜观察结果。

    材料与方法

    一

    、 曩生晨体的分离 选 取萤草( He me r o c a l l i ， “ a L. ) ，甘蔗 (S a c c l mr u m o ， ， 如· .

    柏r “ m)等健康幼叶.木薯 (Ma . i h o t e ~ c u I e n f a Gr a n t z)幼茎和未成 熟的落花生(Ar a c h i s

    h y p o o a e a L. )种子幼嫩子叶分别经 7 5 乙醇和0 . 1 Hg C1 l 溶液作表面灭菌后用手术刀 横

    切成厚约 1毫米薄 片。马锋薯 ( So l a r i u m t u b e r o s u m)幼叶按同法表面灭菌后.用尖头镊 子

    撕去下表皮。分 Ⅱ 将上述材 料 置 于 由1 . 5 纤维素 酶On o z u k a R一 1 0 .0 . 5 果 胶 酶，以

    0 。 5 mo l L甘露糖醇为渗透压稳定荆所组成的酶液中，于3 0 ℃水浴中 保 温 3～ 5小时 (视不

    同材料而异 )。经2 0 0 目不锈钢丝网过滤和离心 (1 0 0×g)2分钟后 反复用0 . 5 mo l L甘露

    糖醇溶液离心洗涤三遍。最后分剐悬浮于0 . 5 mo l L甘露糖醇溶液或 含O . 5 mo l L甘露糖 醇

    的MS 培养液中保存备用。

    ：，焉生质体样品处理 参照 Fo wk e(1 9 7 5)【 和严学成 (1 9 8 7)【 ‘ 的 方 法稍加修

    改。

    1 ·吸取 1 ml 原生质体悬浮液置1 0 mI 离心管内 (以下 固定和脱水等处理均在离心管内进

    行，更换溶液时用离心法 )。加 k 0 . 5 ml 用MS 培养液 (含0 . 5 mo l L甘露糖醇 )配制的 8%

    荤我院电镜皇钟案亮，谣洵操、陈巧萍等同志在技术上予以热情指导和拍照，特表谢意，维普资讯 http:www.cqvip.com 4 0 广 西 植 物 l O 卷

    戊二醛 (后改用只含0 . 5 mo l L 甘露糖醇的戊=醛溶液亦可 ).轻摇混匀.使戊二醛最后浓

    度为 1 ，室温 (约2 5 ℃ )下静置 2小时。手 摇 离心 ( 1 0 0×g)1分 钟，弃 上清液，再加

    O . 5 ml 3%戊二醛溶液.于室温再静置固定 2小时以求彻底固定原生质骨架结构。

    手摇离心 (1 0 0×g)1分钟.弃 上 清 液，用 MS培养液 (或0 . 0 5 mo l L磷酸盐缓冲液

    p H6 . 8)离心洗涤三遍以清除残留的戊二醛。置泳浴上，加入1 ml ： 预冷 的0 . 0 5 m o l l L磷酸

    盐缓冲液 (p H6 . 8) 换洗 4次，每次间隔为2 0 ~3 0 分钟。

    加人1 ml 用0 . 0 5 mo l L磷酸盐缓冲液 (p H6 . 8)配制的1%锇酸.轻轻摇匀后置冰箱中

    过夜以固定细胞质的细微结构。

    最后在冰浴上用蒸馏水离心洗涤二遍。

    2 .借助离心法，在冰浴上依次用蚰%，5 0 %，6 0 ，7 0 %，8 0 %，9 O % 和 无水乙醇逐

    级脱水，罐级处理1 5 分钟。

    用乙醇 ： 醇酸戊南 (1：1 v)混合液更替无水乙醇. 处理1 5 分钟。最后用醇酸戊南

    替换漏合液处理2 0 分钟。

    3 .用胶头吸管吸取少量已经过上述处理的原生质体均匀地涂布在 已镀白金膜的小片盖

    玻片上1个别植物原生质体直接涂布在已镀白金膜的双面胶片上以资比较。置 HCP · 2型干

    燥器内进行临界点干燥。

    将 已干燥的样品置I B 一 5型离子溅射镀膜仪中在真空度 0 . 1 To r r 下镀膜。

    用J EM- 1 2 0 0 EX型电子显微镜 (日本产 )扫描附件观察并拍照。

    观 察 结 果

    (一 )在所观察的几种植物原生质体中，分离自叶 内细胞的原生质体在光学显微镜下呈

    球形.表面光滑，叶绿体均匀分布在四周表层处，如马铃薯叶内 原 生 质 体 (图版 1：1)

    经固定，脱水和干燥等处理后，在扫描电镜下观察到的叶部原生质体表面不是光滑层，而是

    略垦凹凸不平( 图版 1：2、8，4和 5) 。 有的原生质体局部部位有不同程度内陷( 图版1：

    8和 4小箭头所指 )。其表面突起可能是分布在近质膜的叶绿体所造成。

    来自不同植物和不同部位的叶部原生质体表面扫描图象有差异。倒如马铃薯叶 肉原生质

    体表面较祖糙 (图版 l：2)，萱草叶内原生质体表面稍光滑 (图版 l ：8和 4 )。分离自

    甘蔗梢部内层幼叶叶鞘部位的原生质体.在 光学显微镜下可见 原 生 质 体通常有较发达的液

    泡，缺乏发育完全的叶绿体，在固定、脱水和干燥等处理过程中，质膜容易发生破裂，产生

    许多大小不一 的孔洞 (图版 1：5)。这在 落花生幼嫩子叶原生质体中也有同样现象 (图版

    1： 1 2)。其中甘蔗原生质体由于质膜破裂严重，以致内部胞桉也隐约可见 (图版 1：5箭

    头所指 )。

    (二 )在萱草叶肉原生质体和木薯幼茎原生质体表面还见有一些稀疏的小囊泡状突起，在术薯幼茎原生质体尤为明显.而且大小和形状各异 (图版 1 ：8和 8箭头所指 )。此种泡

    状突起多发生在分离自幼嫩薄壁细胞的原生质体。在扫描电镜下可见此种原生质体表面较光

    滑.但泡状突起较多 (图版 l：8)。分离自较成熟的薄壁细胞的原生质体泡状突起很少见

    果实厚生质体的扫描图象中也见有类似的泡状突 起 ”

    维普资讯 http:www.cqvip.com 1期 何若天等：几种植物原生质体的扫描电镜观察

    对此种泡状突起有两种不同看法。一种认为是 由于质膜育弱区，质膜从弱区外 折 而形成小

    泡’另一种看法认为可能是质膜体 (p l a s ma l e mn l a s o n l e ) ( 引自夏镇澳，1 9 8 1 ，未 发表的油

    印资料 )。考虑到原生质体在高渗透介质中由于质膜收缩而折叠的现象 c “，此 种 球状小泡

    很可能是质膜外折而形成的。Po j n a r等 ( 1 9 6 7)发现分离原 生 质体 耐 所 用酶液的介质不

    同，对质 膜内折和外折的有无和程度影响很大 J 。我们用于分离原生 质 体的酶液介质是相

    同的 而产生小泡突起仅与供分离原生质体用的植物材料和细胞幼嫩程度不同有关.

    (三 )分离自木薯幼茎和落花生幼嫩子叶的原生质体在扫描电镜下同样呈现凹凸不平和

    许多凹陷 ......