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编号:10917808
均匀设计法考察影响龙胆苦苷煎出率的因素.PDF
http://www.100md.com 2006年2月23日
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    参见附件(165KB,4页)。

    

    均匀设计法考察影响龙胆苦苷煎出率的因素

    王长虹,王峥涛

    (上海中医药大学中药研究所 ,上海中药标准化研究中心 ,上海 201203)

    摘 要:目的:考察影响药材及方剂中龙胆苦苷(Gentiopicroside ,GPS)水煎出率的因素。方法:用高效液

    相色谱法测定龙胆苦苷的含量 ,应用均匀设计法对影响龙胆苦苷煎出率的因素加水量、 pH值、煎煮时间

    及煎煮次数等进行考察。结果:在加水量 30 倍、溶液 pH值 3. 52、煎煮 3 次、煎煮 25min 的条件下 ,GPS

    的煎出率为99. 53 ± 0. 41 %;龙胆泻肝汤按常规煎药方式煎煮 ,其中的 GPS煎出率达到 93. 87 ±2. 76 %。

    室温水浸龙胆药材0. 5、 1. 5、 3. 0、 6. 0、 12. 0、 24. 0h后 ,浸出液中 GPS的浸出率分别为12. 93 ±0. 57、 12. 31

    ± 0. 62、 9. 77± 0. 62、 3. 21± 0. 81、 4. 23± 0. 29和2. 46 ±0. 58 %。结论:用传统煎煮方法可将龙胆药材及

    龙胆泻肝方中的龙胆苦苷有效地煎出。

    关键词:龙胆苦苷;煎出率;龙胆;均匀设计

    中图分类号:R28412 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2392(2005) 01 - 0009 - 03

    基金项目:上海市科学技术发展基金(02DZ19142)

    收稿日期:2004 - 11 - 23

    作者简介:王长虹(1964 - ) ,男,副教授,副主任药师,博士后。

    龙胆是我国传统常用中药 ,具有清热燥湿、泻肝胆

    火的功效。近年来 ,国内外许多学者从龙胆属植物中

    分离出环烯醚萜背和裂环烯醚萜苷 ,黄酮类 ,山酮类 ,苯并呋喃酮类及酚酸类化合物等[1、 2 ]。龙胆苦苷(Gen2

    tiopicroside ,GPS)为主要生物活性物质 ,其药理研究主

    要包括抗菌、抗炎作用、健胃和保肝利胆等作用[4~9 ]。

    GPS为水溶性成分 ,为了考察传统煎药方式是否能将

    药材及方药中的 GPS有效地煎出 ,为临床用药及 GPS

    的提取分离、加工炮制等提供理论依据 ,笔者用均匀设

    计法考察了影响龙胆水煎液中 GPS煎出率的因素 ,并

    对龙胆泻肝方水煎液及室温下不同时间浸出液中的

    GPS进行测定 ,为龙胆药材的加工炮制提供依据。

    1 实验仪器与材料

    111 实验仪器

    Waters高效液相色谱仪(Waters996 二极管阵列检

    测器 ,Waters 600 四元泵 ,Waters717plus 自动进样器 ,Waters 410 示差检测器及柱温箱 ,Waters 在线脱气机 ,Waters Millennium工作站) ;Diamonsil C18 Colunm(250 ×

    4. 6m ,5 μm.迪马公司) :pH - 3C型酸度计(上海雷磁仪

    器厂) ;

    1. 2 实验材料

    GPS对照品 (上海中药标准化中心提供 ,含量

    > 98. 5 %) ;龙胆碱对照品(上海中药标准化中心提供 ,含量 > 98. 5 %) ;龙胆(购于长春市药材公司 ,经吴立宏

    博士鉴定为关龙胆 Gentiana scabra Bge. ) ;龙胆泻肝方

    (中国药典2001 版一部收载方 ,购于上海中医药大学

    门诊中药房) ;甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其它试剂为

    分析纯。

    2 实验方法与结果

    2. 1 标准溶液的配制

    精密称取干燥恒重的 GPS 对照品 0. 02691g 于

    25ml 量瓶中 ,加甲醇溶解并加至刻度 ,得浓度为

    1. 0764mgP ml的 GPS 对照品储备液备用。精密吸取

    GPS对照品储备液 2. 0ml 于 25ml 量瓶中 ,加甲醇至刻

    度 ,得浓度为86. 112 μgP ml 的 GPS对照品溶液。

    2. 2 含量测定

    参照文献[10 ]

    用高效液相色谱法进行测定。经色

    谱条件及系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶

    为填充剂;甲醇 - 水(28 : 72) 为流动相;检测波长为

    274nm。理论板数按 GPS计算应不低于 3000。GPS在

    0. 086~2. 58 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,标

    准曲线方程为:C(μg) = 6. 8027× 10

    - 7

    A + 0. 0170 ,r = 0.

    99996。

    2. 2. 1 GPS药材含量测定用供试品溶液制备方法的

    考察

    精密称取龙胆药材(粉碎过 40 目) 0. 5g 置于具塞

    锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25ml ,精密称定重量。分别

    超声提取 20、 30、 40min ;室温静置提取 6、 12、 24h ;放至

    室温 ,补足甲醇至原重量;或置于索氏提取器中 ,加入

    甲醇100ml ,分别加热回流提取 1、 2、 4h ,适当浓缩并定

    容至50ml。精密吸取上清液5. 0ml ,置于25ml 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,过滤后进样 10 μl 测定 ,用标准曲

    · 9 · 中医药学报2005年第33卷第1期

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.线法计算药材中 GPS的含量 ,3 种得取方法的含量测

    定结果见表1。

    表1 不同提取方法提取龙胆中龙胆

    苦甙的含量测定结果(g %)

    提取条件 1 2 3 ? x ±s P值

    超声波提取

    20min

    30min

    40min

    5. 389

    5. 607

    5. 945

    5. 459

    5. 680

    5. 792

    5. 509

    5. 658

    4. 936

    5. 452± 0. 06

    5. 648± 0. 04

    5. 830± 0. 10

    0. 0019 < 0. 01

    室温静置提取

    6h

    12h

    24h

    5. 098

    4. 945

    5. 383

    5. 218

    5. 017

    5. 357

    5. 331

    4. 993

    5. 325

    5. 215± 0. 12

    4. 985± 0. 04

    5. 355± 0. 03

    0. 0022 < 0. 01

    索氏回流提取

    1h

    2h

    4h

    5. 325

    5. 271

    5. 233

    5. 564

    5. 276

    5. 142

    5. 323

    5. 603

    5. 268

    5. 404± 0. 14

    5. 384± 0. 19

    5. 215± 0. 06

    0. 2718 > 0. 05

    经用 SAS统计分析软件进行统计学分析表明 ,3

    种提取方法所测含量结果之间无统计学意义

    ( P = 0. 8888 > 0. 05) 。超声波提取方法简便 ,所以确定

    采用超声波处理 45min ,提取龙胆中的 GPS进行含量

    测定 ,测得实验用龙胆药材中 GPS的含量为5. 830 %。

    2. 3 均匀设计法考察影响龙胆水煎液中 GPS提取率

    的因素

    根据一般情况下 ,影响中药水煎提取率的因素 ,确

    定考察的因素为加水量、煎煮液的pH值、煎煮次数和

    煎煮时间 ......

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