均匀设计法考察影响龙胆苦苷煎出率的因素.PDF
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2006年2月23日
第1页 |
参见附件(165KB,4页)。
均匀设计法考察影响龙胆苦苷煎出率的因素
王长虹,王峥涛
(上海中医药大学中药研究所 ,上海中药标准化研究中心 ,上海 201203)
摘 要:目的:考察影响药材及方剂中龙胆苦苷(Gentiopicroside ,GPS)水煎出率的因素。方法:用高效液
相色谱法测定龙胆苦苷的含量 ,应用均匀设计法对影响龙胆苦苷煎出率的因素加水量、 pH值、煎煮时间
及煎煮次数等进行考察。结果:在加水量 30 倍、溶液 pH值 3. 52、煎煮 3 次、煎煮 25min 的条件下 ,GPS
的煎出率为99. 53 ± 0. 41 %;龙胆泻肝汤按常规煎药方式煎煮 ,其中的 GPS煎出率达到 93. 87 ±2. 76 %。
室温水浸龙胆药材0. 5、 1. 5、 3. 0、 6. 0、 12. 0、 24. 0h后 ,浸出液中 GPS的浸出率分别为12. 93 ±0. 57、 12. 31
± 0. 62、 9. 77± 0. 62、 3. 21± 0. 81、 4. 23± 0. 29和2. 46 ±0. 58 %。结论:用传统煎煮方法可将龙胆药材及
龙胆泻肝方中的龙胆苦苷有效地煎出。
关键词:龙胆苦苷;煎出率;龙胆;均匀设计
中图分类号:R28412 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2392(2005) 01 - 0009 - 03
基金项目:上海市科学技术发展基金(02DZ19142)
收稿日期:2004 - 11 - 23
作者简介:王长虹(1964 - ) ,男,副教授,副主任药师,博士后。
龙胆是我国传统常用中药 ,具有清热燥湿、泻肝胆
火的功效。近年来 ,国内外许多学者从龙胆属植物中
分离出环烯醚萜背和裂环烯醚萜苷 ,黄酮类 ,山酮类 ,苯并呋喃酮类及酚酸类化合物等[1、 2 ]。龙胆苦苷(Gen2
tiopicroside ,GPS)为主要生物活性物质 ,其药理研究主
要包括抗菌、抗炎作用、健胃和保肝利胆等作用[4~9 ]。
GPS为水溶性成分 ,为了考察传统煎药方式是否能将
药材及方药中的 GPS有效地煎出 ,为临床用药及 GPS
的提取分离、加工炮制等提供理论依据 ,笔者用均匀设
计法考察了影响龙胆水煎液中 GPS煎出率的因素 ,并
对龙胆泻肝方水煎液及室温下不同时间浸出液中的
GPS进行测定 ,为龙胆药材的加工炮制提供依据。
1 实验仪器与材料
111 实验仪器
Waters高效液相色谱仪(Waters996 二极管阵列检
测器 ,Waters 600 四元泵 ,Waters717plus 自动进样器 ,Waters 410 示差检测器及柱温箱 ,Waters 在线脱气机 ,Waters Millennium工作站) ;Diamonsil C18 Colunm(250 ×
4. 6m ,5 μm.迪马公司) :pH - 3C型酸度计(上海雷磁仪
器厂) ;
1. 2 实验材料
GPS对照品 (上海中药标准化中心提供 ,含量
> 98. 5 %) ;龙胆碱对照品(上海中药标准化中心提供 ,含量 > 98. 5 %) ;龙胆(购于长春市药材公司 ,经吴立宏
博士鉴定为关龙胆 Gentiana scabra Bge. ) ;龙胆泻肝方
(中国药典2001 版一部收载方 ,购于上海中医药大学
门诊中药房) ;甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其它试剂为
分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 标准溶液的配制
精密称取干燥恒重的 GPS 对照品 0. 02691g 于
25ml 量瓶中 ,加甲醇溶解并加至刻度 ,得浓度为
1. 0764mgP ml的 GPS 对照品储备液备用。精密吸取
GPS对照品储备液 2. 0ml 于 25ml 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,得浓度为86. 112 μgP ml 的 GPS对照品溶液。
2. 2 含量测定
参照文献[10 ]
用高效液相色谱法进行测定。经色
谱条件及系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂;甲醇 - 水(28 : 72) 为流动相;检测波长为
274nm。理论板数按 GPS计算应不低于 3000。GPS在
0. 086~2. 58 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,标
准曲线方程为:C(μg) = 6. 8027× 10
- 7
A + 0. 0170 ,r = 0.
99996。
2. 2. 1 GPS药材含量测定用供试品溶液制备方法的
考察
精密称取龙胆药材(粉碎过 40 目) 0. 5g 置于具塞
锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25ml ,精密称定重量。分别
超声提取 20、 30、 40min ;室温静置提取 6、 12、 24h ;放至
室温 ,补足甲醇至原重量;或置于索氏提取器中 ,加入
甲醇100ml ,分别加热回流提取 1、 2、 4h ,适当浓缩并定
容至50ml。精密吸取上清液5. 0ml ,置于25ml 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,过滤后进样 10 μl 测定 ,用标准曲
· 9 · 中医药学报2005年第33卷第1期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.线法计算药材中 GPS的含量 ,3 种得取方法的含量测
定结果见表1。
表1 不同提取方法提取龙胆中龙胆
苦甙的含量测定结果(g %)
提取条件 1 2 3 ? x ±s P值
超声波提取
20min
30min
40min
5. 389
5. 607
5. 945
5. 459
5. 680
5. 792
5. 509
5. 658
4. 936
5. 452± 0. 06
5. 648± 0. 04
5. 830± 0. 10
0. 0019 < 0. 01
室温静置提取
6h
12h
24h
5. 098
4. 945
5. 383
5. 218
5. 017
5. 357
5. 331
4. 993
5. 325
5. 215± 0. 12
4. 985± 0. 04
5. 355± 0. 03
0. 0022 < 0. 01
索氏回流提取
1h
2h
4h
5. 325
5. 271
5. 233
5. 564
5. 276
5. 142
5. 323
5. 603
5. 268
5. 404± 0. 14
5. 384± 0. 19
5. 215± 0. 06
0. 2718 > 0. 05
经用 SAS统计分析软件进行统计学分析表明 ,3
种提取方法所测含量结果之间无统计学意义
( P = 0. 8888 > 0. 05) 。超声波提取方法简便 ,所以确定
采用超声波处理 45min ,提取龙胆中的 GPS进行含量
测定 ,测得实验用龙胆药材中 GPS的含量为5. 830 %。
2. 3 均匀设计法考察影响龙胆水煎液中 GPS提取率
的因素
根据一般情况下 ,影响中药水煎提取率的因素 ,确
定考察的因素为加水量、煎煮液的pH值、煎煮次数和
煎煮时间 ......
王长虹,王峥涛
(上海中医药大学中药研究所 ,上海中药标准化研究中心 ,上海 201203)
摘 要:目的:考察影响药材及方剂中龙胆苦苷(Gentiopicroside ,GPS)水煎出率的因素。方法:用高效液
相色谱法测定龙胆苦苷的含量 ,应用均匀设计法对影响龙胆苦苷煎出率的因素加水量、 pH值、煎煮时间
及煎煮次数等进行考察。结果:在加水量 30 倍、溶液 pH值 3. 52、煎煮 3 次、煎煮 25min 的条件下 ,GPS
的煎出率为99. 53 ± 0. 41 %;龙胆泻肝汤按常规煎药方式煎煮 ,其中的 GPS煎出率达到 93. 87 ±2. 76 %。
室温水浸龙胆药材0. 5、 1. 5、 3. 0、 6. 0、 12. 0、 24. 0h后 ,浸出液中 GPS的浸出率分别为12. 93 ±0. 57、 12. 31
± 0. 62、 9. 77± 0. 62、 3. 21± 0. 81、 4. 23± 0. 29和2. 46 ±0. 58 %。结论:用传统煎煮方法可将龙胆药材及
龙胆泻肝方中的龙胆苦苷有效地煎出。
关键词:龙胆苦苷;煎出率;龙胆;均匀设计
中图分类号:R28412 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2392(2005) 01 - 0009 - 03
基金项目:上海市科学技术发展基金(02DZ19142)
收稿日期:2004 - 11 - 23
作者简介:王长虹(1964 - ) ,男,副教授,副主任药师,博士后。
龙胆是我国传统常用中药 ,具有清热燥湿、泻肝胆
火的功效。近年来 ,国内外许多学者从龙胆属植物中
分离出环烯醚萜背和裂环烯醚萜苷 ,黄酮类 ,山酮类 ,苯并呋喃酮类及酚酸类化合物等[1、 2 ]。龙胆苦苷(Gen2
tiopicroside ,GPS)为主要生物活性物质 ,其药理研究主
要包括抗菌、抗炎作用、健胃和保肝利胆等作用[4~9 ]。
GPS为水溶性成分 ,为了考察传统煎药方式是否能将
药材及方药中的 GPS有效地煎出 ,为临床用药及 GPS
的提取分离、加工炮制等提供理论依据 ,笔者用均匀设
计法考察了影响龙胆水煎液中 GPS煎出率的因素 ,并
对龙胆泻肝方水煎液及室温下不同时间浸出液中的
GPS进行测定 ,为龙胆药材的加工炮制提供依据。
1 实验仪器与材料
111 实验仪器
Waters高效液相色谱仪(Waters996 二极管阵列检
测器 ,Waters 600 四元泵 ,Waters717plus 自动进样器 ,Waters 410 示差检测器及柱温箱 ,Waters 在线脱气机 ,Waters Millennium工作站) ;Diamonsil C18 Colunm(250 ×
4. 6m ,5 μm.迪马公司) :pH - 3C型酸度计(上海雷磁仪
器厂) ;
1. 2 实验材料
GPS对照品 (上海中药标准化中心提供 ,含量
> 98. 5 %) ;龙胆碱对照品(上海中药标准化中心提供 ,含量 > 98. 5 %) ;龙胆(购于长春市药材公司 ,经吴立宏
博士鉴定为关龙胆 Gentiana scabra Bge. ) ;龙胆泻肝方
(中国药典2001 版一部收载方 ,购于上海中医药大学
门诊中药房) ;甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其它试剂为
分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 标准溶液的配制
精密称取干燥恒重的 GPS 对照品 0. 02691g 于
25ml 量瓶中 ,加甲醇溶解并加至刻度 ,得浓度为
1. 0764mgP ml的 GPS 对照品储备液备用。精密吸取
GPS对照品储备液 2. 0ml 于 25ml 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,得浓度为86. 112 μgP ml 的 GPS对照品溶液。
2. 2 含量测定
参照文献[10 ]
用高效液相色谱法进行测定。经色
谱条件及系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂;甲醇 - 水(28 : 72) 为流动相;检测波长为
274nm。理论板数按 GPS计算应不低于 3000。GPS在
0. 086~2. 58 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,标
准曲线方程为:C(μg) = 6. 8027× 10
- 7
A + 0. 0170 ,r = 0.
99996。
2. 2. 1 GPS药材含量测定用供试品溶液制备方法的
考察
精密称取龙胆药材(粉碎过 40 目) 0. 5g 置于具塞
锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25ml ,精密称定重量。分别
超声提取 20、 30、 40min ;室温静置提取 6、 12、 24h ;放至
室温 ,补足甲醇至原重量;或置于索氏提取器中 ,加入
甲醇100ml ,分别加热回流提取 1、 2、 4h ,适当浓缩并定
容至50ml。精密吸取上清液5. 0ml ,置于25ml 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,过滤后进样 10 μl 测定 ,用标准曲
· 9 · 中医药学报2005年第33卷第1期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.线法计算药材中 GPS的含量 ,3 种得取方法的含量测
定结果见表1。
表1 不同提取方法提取龙胆中龙胆
苦甙的含量测定结果(g %)
提取条件 1 2 3 ? x ±s P值
超声波提取
20min
30min
40min
5. 389
5. 607
5. 945
5. 459
5. 680
5. 792
5. 509
5. 658
4. 936
5. 452± 0. 06
5. 648± 0. 04
5. 830± 0. 10
0. 0019 < 0. 01
室温静置提取
6h
12h
24h
5. 098
4. 945
5. 383
5. 218
5. 017
5. 357
5. 331
4. 993
5. 325
5. 215± 0. 12
4. 985± 0. 04
5. 355± 0. 03
0. 0022 < 0. 01
索氏回流提取
1h
2h
4h
5. 325
5. 271
5. 233
5. 564
5. 276
5. 142
5. 323
5. 603
5. 268
5. 404± 0. 14
5. 384± 0. 19
5. 215± 0. 06
0. 2718 > 0. 05
经用 SAS统计分析软件进行统计学分析表明 ,3
种提取方法所测含量结果之间无统计学意义
( P = 0. 8888 > 0. 05) 。超声波提取方法简便 ,所以确定
采用超声波处理 45min ,提取龙胆中的 GPS进行含量
测定 ,测得实验用龙胆药材中 GPS的含量为5. 830 %。
2. 3 均匀设计法考察影响龙胆水煎液中 GPS提取率
的因素
根据一般情况下 ,影响中药水煎提取率的因素 ,确
定考察的因素为加水量、煎煮液的pH值、煎煮次数和
煎煮时间 ......
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