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    第 1 9卷 第 4期

    2 0 0 0年 1 1月

    中 国 生 漆

    J o u r r ml o f Ch i n e s e La c q ue r

    V0 1 1 9 No. 4

    No v. 2 0 00

    漆树漆酶 同功酶研 究

    韦建 学 张飞 龙 魏朔 南

    ( 西安 生漆涂 料研究 所 西安 7 1 0 0 6 1)

    关 键 词： 查 塑 查 兰 苎 旦 生 生 移 c 坼 傲

    引言

    车

    漆酶 ( E C. 1 . 1 0. 3. 2 ) 是 一种 广泛 分布 在 较高 等植 物 和 真菌 中 的 兰色 含 铜 氧化酶 一它

    能够 催 化多酚 及多胺 类物 质 氧化 ， 在 生漆 干燥 和成膜 过 程中起 着重要 的催 化 作用 ： 目前

    国外 对漆 酶 的 催化机 理 、 氪基 酸组成 、 稳 态 动力 学 等作 了大 量研 究 工作 ， 并 且将 真菌 漆

    酶 和漆树 漆酶也 作 过 比较 分析 。 但 从 一株 或 同一 品 系的漆 树 中分 离 到 两株 分子 量大 小

    不 同的漆 酶同功 酶 迄 今未见报导 。我 们在作 样 品提 取掾 酶 分析 时 ， 从 同一 株 漆树 中得 l l

    的粗漆酶 经 s e p h a d e x G一1 0 0柱层 析 ( 2 . 5×6 0 e I 1 1 2 ) 分 离得 到 两 种漆 树 漆 酶 同 功 酶 l、 I l 。

    再分 别经 ∞p h a d e x G一2 0 0层析 柱进一 步纯 化 ， 将 纯 化 的漆 酶 同功 酶 I、 Ⅱ分别 测 定其 虽

    适 P H值 、 最适 温 度 、 热稳定 性和 米 氏常数 以及其它 理化性 质进 行 比较分 析

    1 材料与方 法

    1 1生漆 采于云 南镇罐 县肤 盐皮 漆树 。

    1 . 2蛋 自质古量测 定 用 F a l i n酚 试剂 法 。

    1 . 3提取粗漆酶 ， 按 [ 1 ] [ 2 ] 方法改 良， 用丙酮萃取除去漆酚 再经盐溶 、 过滤 、 盐折得

    到 粗制漆 酶 。

    1 . 4漆树漆 酶 的分 离 纯化 。

    将 粗漆 酶经 s e p h a d e x G一1 0 0柱层 析( 2. 5×6 0 c I 1 2 ) 分离 ， 得 到漆 酶 同功酶 I、 Ⅱ 再将

    I、Ⅱ分别经 s e p h a d e X G一2 0 0柱层析 ( 1 . 5×3 0 e ) 纯 化 ， 收 集 、 透 析 后作 为漆 酶 同 功 酶贮

    备 液 。

    1 5漆酶分子 量 测定 ： ‘ 采用凝 胶 柱层析测 定 法 ， 凝胶 柱层 析 连接 桉 酸 蛋 白检测 仪 检

    测 ， 流速 由蠕 动泵调 节 控制 ， 同时 配 自动 部分 收集器 收集 和记 录仪 准确 记录 。

    1 . 6漆酶 的活性 测定 ： 用移 液 管 分别 移 取 2 m 1 0. 1 %漆 酶溶 液 敬 八 两 只 1 c m 比色 皿

    收稿 日期 ： 2 0 o o 一 1 0 —2 8

    维普资讯 http:www.cqvip.com 1 0 2 0 0 0年 1 L月 中国生漆 第 l 9卷

    内 。一 只加 入 1 . 2 ml 缓 冲溶 液 ( 0. 0 2 5 MK H 1 ' O.一N 8 2 HP0 4 ) 作 为 空 白 对 照 ......