膜荚黄芪愈伤组织诱导培养

    胡海英 , 吴晓玲

    (宁夏大学生命科学学院,宁夏银川 750021)

    摘要: 以黄芪的子叶、 茎段和胚轴为外植体 ,分别接种在不同激素组合的 MS培养基上 ,黑暗条件下培养 ,诱

    导愈伤组织。结果表明 ,下胚轴是最佳外植体 ,在各个配方中其诱导率均达到了 100%。子叶、 茎段诱导愈伤组

    织最适宜的培养基为 MS + 2, 4 - D (1mgL) + 6BA (0 . 5 mgL) +NAA (0 . 5 mgL)。通过筛选实验得出了两种增

    殖培养基 ,即 MS + 2, 4 - D (1 mgL) + 6BA (0 . 5 mgL)和 MS + 2, 4 - D (0 . 5 mgL) ,增殖生长效果明显。

    关键词: 膜荚黄芪; 组织培养; 愈伤组织

    中图分类号: S567123

    +

    9103512 文献标识码: A 文章编号: 1002 - 1302 (2005) 02 - 0097 - 02

    收稿日期: 2004 - 10 - 08

    基金项目:宁夏大学一般基金项目 (编号: 032204)。

    作者简介:胡海英 (1976—) ,女,宁夏,硕士,主要从事植物细胞与组

    织培养技术研究。Tel : ( 0951 ) 8160529; E - mail : haiying . hu@

    163. com。

    膜荚黄芪 [ Astragalus m em branaceus ( f ish . )

    Bge ]为多年生豆科植物 ,其干燥根为常用滋补中药

    材 ,含有活性较强的三萜皂苷、 黄酮类、 多糖类、 氨基

    酸、 微量元素以及棕榈酸、 羽扇豆醇、 β-谷甾醇、 甜

    菜碱等[ 1 ]。黄芪生药或浸膏对实验动物和人均具

    有提高免疫功能 ,调节免疫系统的作用。目前 ,人工

    栽培为黄芪生产的主要途径 ,不仅产量不能满足市

    场需求 ,而且品质也得不到保证。因此 ,利用组织培

    养技术对黄芪进行无性快繁已迫在眉睫。一是利用

    组织培养技术加大黄芪优质无毒种苗的生产 ,二是

    通过细胞大量培养系统进行黄芪有效成分的生产。

    对黄芪愈伤组织培养及有效成分含量分析已有报

    道[ 2 ]

    ,但未见有通过对黄芪的胚轴、 子叶作外植体

    诱导愈伤组织 ,并测定其生长量的调控方面的研究

    报道[ 2, 3 ]。

    1 材料与方法

    111 黄芪无菌苗的培养

    试验材料取自宁夏隆德县药材种子公司 ,挑选

    饱满的黄芪种子 ,用水洗净 ,吸干水 ,置于超净台上 ,用 75%酒精浸泡 40 s,再用 0 . 1%升汞消毒 9 min,无菌水冲洗数次并浸泡 4～5 h,接种到 MS基本培

    养基上 ,在暗中培养。待种子萌发后 ,转入光下培

    养 ,得到无菌苗。培养温度为 ( 25 ±1) ℃,光照 10

    h d,光强 1 000 lx。

    1 . 2 黄芪愈伤组织的诱导与培养

    1 . 2 . 1 培养基的选择与试验设计 基本培养基为

    MS

    [ 4 ]

    培养基 ,其中琼脂 10 gL,蔗糖 30 gL, pH值

    为 5 . 8。选择生长素和细胞分裂素作为激素配比,即 2, 4 -二硝基苯氧乙酸 (2, 4 - D)、 萘乙酸 (NAA)

    和 6 -苄基腺嘌呤 ( 6 - BA) ,设置不同水平的处理

    如表 1所示。

    表 1 诱导黄芪不同外植体愈伤组织的激素组合

    激素种类

    激素水平 (mgL)

    M1 M2 M3 M4

    2, 4 - D 1. 0 1. 0 0. 5 0. 5

    6 - BA 0. 5 0 1. 0 0

    NAA 0. 5 0. 5 0 0

    1 . 2 . 2 试验方法 切取无菌苗子叶、 茎段和胚轴,切段长 0 . 5 cm,接种于愈伤组织诱导培养基上 ......