美味牛肝菌液体深层培养工艺条件的探索X

    张华山 许剑秋

    (湖北工学院生物工程系 武昌 430068)

    摘要 对美味牛肝菌液体深层培养的工艺条件进行探索, 得出其最佳摇瓶条件为: 温度 24～ 28 ℃, 种龄 3 天, 接

    种量 10% ,振荡转速为 150 r? m in, 培养时间为 5 天, 在最佳工艺条件下菌丝体干重可达 24. 8 g? L。

    关键词 美味牛肝菌 深层培养 菌丝

    深层培养是近代大规模生产微生物产品的

    基本方法[ 1 ]。它能在短期内获得大量的产品, 且

    又可以从发酵醪中得到多糖, 氨基酸等有用的

    代谢产物。采用深层发酵法生产的食用菌菌丝

    的营养成分无论蛋白质、氨基酸还是维生素含

    量均类似于子实体, 有的甚至超过了农业栽培

    的子实体, 而且也不需要怀疑其安全性[ 2 ]。

    美味牛肝菌属于担子菌纲伞菌目、牛肝菌

    科牛肝菌属。据报道[ 3, 4 ]

    , 美味牛肝菌含有二十

    多种氨基酸、多种维生素和矿物质、多糖, 具有

    协调内分泌, 神经系统, 提高人体免疫力以及显

    著的抗癌作用, 由于其优良的食疗保健作用, 国

    际市场对该菌的需求不断增加。但美味牛肝菌

    的传统生产方法是固体栽培, 这种方法周期长、占地面积大, 又受季节和原料限制, 从而使其不

    能得到充分的利用。本文旨在通过美味牛肝菌

    摇瓶液体深层培养工艺条件的探索, 为开发利

    用美味牛肝菌提供科学依据。

    1 材料与方法

    1. 1 实验材料

    1. 1. 1 菌种: A ccc 50559 (B. edu lis Bu ll . ex

    F r . ) 从中国农科院微生物菌种保藏中心

    (A ccc)获得

    1. 1. 2 培养基 PDA 培养基; 种子培养基:

    玉米粉 4. 0%、葡萄糖 1. 5%、黄豆粉 1. 0%、蛋

    白胨 2. 0%、酵母粉 2. 0%、 M gSO 4·7H2O 1.

    5%、 KH2PO 4 2. 0%; 发酵培养基: 玉米粉 5.

    0%、糖蜜1. 5%、黄豆粉 2. 0%、花生油

    1. 0%、酵母粉 2. 0%、 M gSO 4·7H2O 1. 5%、KH2PO 42. 0%。

    1. 2 分析方法

    培养液中菌丝含量的测定: 取待测发酵液,过滤, 用水冲洗至洗液不再带有发酵液颜色为

    止, 在 60 ℃恒温箱中烘干至恒重, 在干燥器中

    冷却到常温, 称重。

    菌球大小的测定: 在培养皿中取30 个以上

    菌球排成一列, 测量其总长度。菌球平均直径

    (mm? 个) = 菌球总长度(mm )? 菌球数(个)。

    pH 值的测定: 采用国产雷磁 25 型酸度计

    法。

    2 结果与讨论

    食用药用菌丝的深层培养沿用了传统的发

    酵生产工艺, 即经种子的不断扩大培养, 进入发

    酵罐[ 5 ]

    , 在食用菌的深层培养中, 相关的因子除

    培养基组成外, 还有pH 值, 温度、通风量、接种

    量等培养条件。

    使用 500 mL 三角瓶, 装发酵培养基 150

    mL , 接种后于摇床上进行培养, 对培养温度, 振

    荡转速, 接种量, 种龄及生长周期等参数进行探

    索。

    · 32 · 氨基酸和生物资源

    Am ino A cids Bio t ic Resources 1999, 21 (3) : 23～25

    X 收稿日期: 1999—04—20

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.2. 1 培养温度的确定

    接种 10%培养 3 天的菌丝球, 于 150 r?

    m in 摇床上振荡培养 5 天, 分别在 4 个温度

    (22℃. 24℃. 26℃. 28℃)下进行试验, 结果见表

    1。

    表 1 不同温度下摇床培养菌丝得率

    Table 1 Yeild of themycelia grow n at var ied temper2

    ture

    试验号 温 度? ℃

    22 24 26 28

    1 18 . 9 20 . 2 21 . 1 18 . 5

    2 21 . 7 21 . 1 20 . 8 21 . 4

    3 19 . 8 20 . 8 19 . 3 20 . 7

    4 20 . 6 19 . 1 24 . 9 19 . 7

    5 20 . 3 23 . 6 22 . 4 22 . 0

    6 19 . 7 23 . 2 23 . 8 18 . 6

    7 22 . 1 21 . 9 19 . 8 23 . 4

    8 22 . 7 21 . 9 19 . 8 23 . 4

    9 20 . 6 19 . 8 21 . 5 19 . 8

    平均 20 . 7 20 . 9 21 . 6 21 . 0

    结果表明, 在 22～ 28 ℃范围内, 美味牛肝

    菌生长无明显差异, 以26 ℃左右最适宜 ......