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编号:10919287
三七真菌部分病原分离培养方法改良初探.PDF
http://www.100md.com 2006年2月23日
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    三七真菌部分病原分离培养方法改良初探

    王 勇 刘云芝 陈昱君 X

    (文山州三七科学技术研究所 , 云南 文山 663000)

    【摘要】 通过对半知菌亚门丝孢纲的三七黑斑病病原Alternaria panax whetz.和三七圆斑病病原 Mycocent ro2

    spora acerina (Hartig)Deighton进行病株孢子接种 ,在较短时间内获得纯化的病原菌 ,从而探索出对半知菌亚门丝

    孢纲病原分生孢子分离纯化的新方法。

    【关键词】 分生孢子;分离;三七黑斑病;圆斑病;病原

    【中图分类号】 S567. 236 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671 - 3303 (2004) 04 - 0377 - 02

    0 引 言

    植物病害是导致农作物减产和限制农业生产发展的一个重要因素 ,每年因病害造成的农业生产损失占 60 %

    以上 ,当植物特别是农作物病害大流行时 ,造成当地的某一农产品绝收。引起植物病害的真菌多达 8 000 余种[1 ]

    ,在植物病害研究中 ,病原菌的分离培养通常采用病部组织培养分离方法。在植物受病原菌危害过程中 ,特别是受

    害中后期常常带有其他腐生菌 ,因此分离提纯工作耗时长 ,分离提纯效果差。我们在研究三七病害过程中 ,通过不

    断探索 ,掌握了孢子接种分离培养三七黑斑病、圆斑病病原技术 ,在较短时间内获得纯化的目标病原菌。

    1 实验材料与方法

    1. 1 选择病征明显的三七黑斑病病株、三七圆斑病病株 ,各 5 批病样

    1. 2 实验设备与方法

    XTL —Ⅱ型照相体视显微镜(江南) ,细竹签尖端直径小于 0. 1 mm。次氯酸钠原液 ,透明胶布 ,NikonE200 型

    显微镜 , PDA培养基。

    传统病原菌分离方法参照《植病研究方法》介绍的 5 %次氯酸钠液和 1 %升汞液表面消毒处理接种[2 ]。

    先用透明胶布在上述两种刚采集并且病征明显的新鲜病株发病部位上轻轻粘起分生孢子 ,然后 ,放置于一滴

    无菌水的载玻片上 ,于10 ×10 倍下镜检有无杂菌。杂菌很少或无杂菌时 ,在无菌室内 XTL —Ⅱ型照相体视显微镜

    下 10 ×1. 0~2. 5 倍 , (选用的倍数可根据分离病原分生孢子的大小而定) ,用预先准备好的细竹签在次氯酸钠原液

    中浸泡 3~5 s后 ,在分生孢子相对集中的部位轻轻挑起病原的分生孢子 ,接入 PDA (马铃薯、葡萄糖培养基)培养

    基的培养皿中 ,每皿接种 5~7 个点。每批病样接种 5 皿。要求每次挑起孢子接种后均沾一下次氯酸钠原液。接

    种好的病原在 20~25 ℃条件培养。2~3 d后观察有无污染。另设传统的病健交界处组织接种作为对照。

    2 结果与分析

    2. 1 接种的污染 采用孢子接种法污染物主要是细菌 ,三种方法的细菌污染率变化不大。但采用植物病组织接

    种方法除细菌外还有其它真菌从接种组织上长出 ,说明植物从发病到出现病征过程中其它真菌和腐生菌也伴随入

    侵 ,导致在接种分离培养时除了目标菌外常常会出现其它真菌 ,给进一步的纯化培养带来了较大的困难 ......

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