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    物生理学通讯,2003 ,39(3) :294 - 298.

    野葛细胞培养及其生长特性的研究 陈刚 ,刘慧丽 ,李玲3

    ,张春荣 (华南师范大学生命科学学院 ,广东省植物发育生物工程重点实验室 ,广东 广州 510631)

    摘要:目的:以野葛不同器官来源的外植体为材料诱导愈伤组织 ,建立起悬浮细胞培养体系 ,研究愈伤组织及悬浮细胞的生

    长特性。方法:采用细胞生长测定、细胞培养物中有效成分含量测定及细胞的观察。结果:野葛细胞培养过程中异黄酮及葛根素

    含量随细胞生长逐渐积累 ,在细胞生长静止期含量最高 ,次生代谢物与细胞生长呈负相关。不同来源的愈伤组织以根愈伤组织

    中异黄酮及葛根素含量最高 ,其中总异黄酮含量为:47. 60 mgP g Dw、葛根素含量为:3. 30mgP g Dw ,其次叶、茎、子叶 ,悬浮细胞中含

    量最低。不同愈伤组织的细胞及悬浮细胞在生长过程中细胞形态有差异。

    关键词:野葛;愈伤组织;细胞悬浮培养;异黄酮;葛根素

    中图分类号:Q81311 +

    1 文献标识码:A 文章编号:1004 - 311X(2004) 05 - 0081 - 03

    Studies on Cell Culture of Pueraria Lobata (Willd) and

    Characteristics of Cell’ s Growth

    CHEN Gang ,LIU Hui - li ,LI Ling

    3

    ,ZHANG Chun - rong

    (Guangdong Provincial Key Lab of Biotechnology for Plant Development ,College of Life Science ,South China Normal University ,Guangzhou 510631 ,P1R1China)

    Abstract :Objective :Calli were induced from explants of different organs of Pueraria lobata (Willd. ) Ohwi and suspension cell culture was estab 2

    lished. Methods :the cell research was carry out by growth test ,determination of effective constituents in cell culture ,and cell observation.Results

    and conclusion :Studies on the characteristics of cultured cell indicated that an inverse relationship between growth and secondary metabolite pro 2

    duction since the highest levels of secondary compounds were reached during the stationary phase. Contents of isoflavones in calli from different or 2

    gans are different ,maximum content was found in callus from root ,followed by callus from leave ,stem and cotyledon ,lowest content was found in

    suspension cell . Shape of cell from different callus or suspension cell during different growth phase was diverse.

    Key words : Pueraria lobatacallus tissue ;suspension cell culture ;isoflavones puerarin

    收稿日期:2004 - 03 - 01 ;修回日期:2004 - 05 - 18

    基金项目:广东省科技项目(C11703)和教育部优秀青年教师项目资助

    作者简介:陈刚(1974 - ) ,男,博士,博士后,研究方向为植物细胞工

    程,E - mail : chengang970258 @sohu. com; 3 通讯作者:李玲(1958 - ) ,女,教授,博士,博士生导师,研究方向为植物细胞工程和生理学,E -

    mail :liab @scnu. edu. cn。

    野葛 , Pueraria lobata (Willd. ) Ohwi ,豆科植物 ,其干燥根

    ———葛根为我国传统中药 ,其主要功效为清热解表、生津止

    渴、醒脾解酒等。葛根的现代研究发现葛根中的有效药用成

    分主要是异黄酮类化合物 ,如葛根素、大豆甙、大豆甙元等 ,其

    中尤以葛根素最为重要 ,在临床上是治疗心血管疾病的良药 ,对治疗心绞痛、促进大脑及冠状动脉血液、改善微循环、降低

    血压、降血脂等有重要作用[1 - 3 ]。野葛的研究目前集中于其药

    理活性或次生代谢物的合成途径方面[4 ,5 ]

    ,而对野葛细胞培养

    的详细研究报导较少。作者建立了野葛细胞培养体系[6 ,7 ]

    并

    初步研究提高异黄酮类生产的条件研究[8 ]。本文探讨野葛细

    胞培养的生长特性 ,以期为提高悬浮培养细胞技术获得高产

    量药用成分打下基础。

    1 材料与方法 1. 1 材料

    1. 1. 1 植物材料:野葛( Pueraria lobata (Willd. ) Ohwi) ,采自华

    南师范大学校园内。

    1. 1. 2 试剂:蔗糖、戊二醛、 2 ,4 - D、 NAA、 KT均为分析纯 ,葛

    根素购自中国药品生物制品检定所。

    1. 1. 3 主要仪器:岛津 UV - 2100 紫外 - 可见分光光度计、Beckman公司高效液相色谱、 System Gold Model 紫外检测器、KYKYAmray扫描电镜等。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 愈伤组织的诱导及悬浮细胞系的建立方法:

    按照前文方法[6 ]

    分别诱导野葛的子叶、叶、茎、根形成愈

    伤组织 ,建立子叶悬浮细胞系。挑选淡黄色疏松易碎的愈伤

    组织 ,以B5 + 2 ,4 - D1 + NAA1 + KT0. 5 + 0. 2 %水解酪蛋白液体

    培养基 ,在旋转式摇床上培养 ,转速 120～140 rP min ,振幅 2～

    4cm。悬浮细胞生长稳定后每次以 1. 5gFWP 50mlP 瓶接种量继

    代培养 ,每7d继代1次 ......