中 国 药 科 大 学 学 报

    Journal of China Pharmaceutical University 2003 ,34 (6) :534～540

    五种石斛的指纹图谱研究

    张尊建①,王源园 ,李 茜

    (中国药科大学分析测试中心 ,南京 210009)

    【摘 要】 目的:建立密花、马鞭、短棒、鼓槌和金钗等五种石斛的色谱指纹图谱。方法:采用 HPLC UV与

    HPLCMS技术对五种石斛的色谱指纹图谱进行了研究。结果:建立了五种石斛的 HPLC UV指纹图谱 ,并对其中

    三种石斛 HPLCMS指纹图谱中的色谱峰进行了解析 ,共对 15 个谱峰进行了化学成分的初步归属。结论:所建

    立的方法可用于石斛指纹图谱的测定 ,并为其全面质量控制及化学成分研究提供参考。

    【关键词】 石斛;指纹图谱;HPLC UVMS;化学成分

    【中图分类号】 R917 【文献标识码】 A 【文章编号】 100025048 (2003) 0620534207

    石斛为常用中药 ,其药用历史十分悠久 ,历代

    本草均有收载。传统医学认为其具有滋阴清热、益

    胃生津、润肺止咳的功效。现代药理学研究表明 ,石斛具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗血小板凝集

    等作用[3 ]。《中国药典》 (2000 版) 收载了 5 种 ,即

    环草石斛( Dendrobium loddigesii Rolfe1) 、马鞭石斛

    ( Dendrobium f imbriatum Hook1var1 oculatum Hook1) 、黄草石斛( Dendrobium chrysanthum Wall1) 、铁皮石

    斛( Dendrobium candidum Wall1 ex Lindl1)和金钗石

    斛( Dendrobium nobil Lindl1) 。石斛属 ( Dendrobium

    Sw1)植物全世界约有 1000 种 ,广泛分布于亚洲热

    带、亚热带地区及大洋州。我国有 74 个种和 2 个

    变种 ,主产秦岭以南诸省区 ,尤以云南南部为多[4 ]。

    由于石斛属植物来源众多、产地各异 ,商品规

    格极为复杂 ,同名异物与同物异名情况十分严重 ,且市场需求量大又导致新的品种不断出现 ,致使其

    成为目前药典收载的中药材中基源最为混乱的品

    种之一 ,对其鉴别与质量评价历来十分困难。鉴于

    指纹图谱在药材质量评价及辨别真伪方面的优势 ,作者尝试对收集到的五种石斛: 密花石斛

    ( D1 densif lorum Lindl1 ex Wall1) 、马鞭石斛( Dendro2

    bium f imbriatum Hook1var1 oculatum Hook1) 、短棒石

    斛( Dendrobium capillipes Rchb1 f1) 、鼓槌石斛( Den2

    drobium chrysotoxum Lindl1) 、和金钗石斛( Dendrobi2

    um nobil Lindl1)进行了 HPLC UV和 HPLCMS指纹

    图谱的研究 ,以期对石斛质量评价提供一些参考 ,并根据现有石斛化学成分的报道 ,对质谱指纹图谱

    中的色谱峰进行了初步归属。

    1 仪器与试剂

    Shimadzu 2010A LC DADMS系统 ,Agilent 1100

    LC DADMS系统;LCMS Solution及 Chemstation 工

    作站;甲醇、乙腈(Merck 公司 ,色谱纯) ,双蒸水 ,其

    余试剂均为分析纯。五种石斛均采自云南思茅云

    南金陵植物药股份有限公司石斛 GAP 种植基地 ,并经中国药科大学中药学院徐珞珊教授鉴定确认。

    2 方法与结果

    211 供试品的制备

    参照 《中国药典》一部附录药材取样方法 ,取五

    种石斛药材 ,粉碎 ,过40 目筛。

    方法A:取粉末 210 g ,10 %氨水润湿 ,置索氏

    提取器中 ,加氯仿60 ml ,90 ℃水浴回流 4 h ,冷却。

    提取液在90 ℃水浴中挥干 ,冷却 ,加50 %甲醇5 ml

    溶解 ,用 0145μm 微孔滤膜过滤后作为供试品溶

    液。

    方法 B :取粉末 210 g ,置索氏提取器中 ,加氯

    仿60 ml ,90 ℃水浴回流4 h ,冷却。提取液在90 ℃

    水浴中挥干 ,冷却 ,加 50 %甲醇 5 ml 溶解 ,用 0145

    μm微孔滤膜过滤后作为供试品溶液。

    方法 C:取粉末 210 g ,置具塞锥形瓶中 ,加

    10 %氨水1 ml ,拌匀 ,加氯仿 20 ml ,超声 30 min ,静

    置30 min ,过滤 ,取续滤液 510 ml 于离心管中 ,40

    435

    ① 【收稿日期】 2003206210 【3

    通讯作者】 Tel :025283271454

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.℃水浴N2吹干 ,加 50 %甲醇 1 ml 涡旋溶解 2 min ,用0145μm微孔滤膜过滤后作为供试品溶液。

    方法D:取粉末 210 g ,置圆底烧瓶中 ,加 95 %

    乙醇40 ml ,90 ℃水浴回流2 h ,过滤。提取液在 90

    ℃水浴中挥干 ,冷却 ,加 50 %甲醇 5 ml 溶解 ,用

    0145μm微孔滤膜过滤后作为供试品溶液。

    212 色谱条件及测定方法

    色谱柱:Agilent ZORBAX SB2C18柱(250 mm ×

    416 mm , ID ,5μm) ,流速110 ml min ,柱温25 ℃。柱

    后分流014 ml min进质谱仪 ,同时记录总离子流色

    谱图。质谱扫描范围:100～1000 ;进样量:20μl。

    五种石斛样品的具体制备方法、流动相及检测

    波长见表1。

    Tab 11 The sample preparation ,mobile phase and detecting wavelength of

    the different Dendrobium(Shi2Hu)

    Samples

    Preparation

    method

    Mobile

    phase

    λ

    (nm)

    D. densiflorum Lindl . ex Wall . A methanol ,water 300

    Dendrobium fimbriatum

    Hook. var. oculatum Hook.

    C methanol ,water 280

    Dendrobium chrysotoxum Lindl . B acetonitrile ,0105%formic acid 265

    Dendrobium capillipes Rchb.f . A methanol ,011%formic acid 280

    Dendrobium nobil Lindl . D methanol ,0. 1% triethylamine 280

    213 结 果

    五种石斛的 HPLC UV 指纹图谱的比较见图 1

    ～6。

    Fig 1. The HPLC UV(A) and HPLCMS[ ESI ( + ) (B) and ESI ( - ) (C) ]

    fingerprints of D. densif lorum Lindl . ex Wall .

    Fig 2. The HPLC UV(A) and HPLCMS[ ESI ( + ) (B) and ESI ( - ) (C) ]

    fingerprints of Dendrobium f imbriatum Hook. var. oculatum Hook.

    3 讨 论

    311 供试品制备方法与流动相的选择

    经对提取溶媒考察 ,发现氯仿优于其它溶剂

    (除金钗石斛) ,且氯仿索氏提取效率较高 ,故首选

    氯仿为溶剂进行索氏提取制备供试品 ......