野生木香丛生芽诱导因素的研究

    余晓丽

    (南阳师范学院生物系,河南南阳 473061)

    摘要: 用野生木香的带腋芽茎段作外植体进行组织培养 ,试验结果表明:在 5 月份取其茎段的中部作外植

    体 ,70 %酒精表面灭菌5 s ,0. 1 %升汞溶液灭菌8～10 min ,表面灭菌方式效果最好;利于诱导的培养基为MS + 2. 0

    mg L 6 - BA + 0. 1 mg L NAA ,利于继代的培养基为MS + 2. 0 mg L 6 - BA + 0. 05 mg L NAA ,温度 23. 5～24 ℃、光

    照10 h d、光强3 000 lx、蔗糖3 %。

    关键词: 野生木香; 组织培养; 丛生芽

    中图分类号: S6871336 文献标识码: A 文章编号:1002 - 1302(2005) 01 - 0076 - 02

    收稿日期:2004 - 08 - 20

    基金项目:河南省南阳市 2004 年科技攻关项目(编号:200404016)和

    南阳师范学院2003年应用与科技开发项目(编号:nytc200318) 。

    作者简介:余晓丽(1963—) ,女,河南南阳人,副教授,从事植物细胞

    培养研究工作。Tel : (0) 13838721912 ; E - mail :yxll268 @sina. com。

    木香( Rosa banksiae Aiton) ,蔷薇属 ,半常绿攀援

    性灌木 ,攀援高度可达6 m。经长期栽培观察 ,木香

    作砧木 ,其寿命、粗度、抗逆性优于其他砧木。但目

    前木香砧木的取得主要是从山上直接采伐 ,而长久

    如此会耗竭、破坏生态。采用植物组织培养方法可

    以快速繁殖木香 ,既可以保护资源 ,又可以满足市场

    的需要。木香的组织培养国内外未见报道。

    1 外植体的选择和灭菌

    在5～7月选取木香的茎段 ,并对茎段不同部位

    取材(包括茎部的顶部、中部、底部) ;用自来水和洗

    涤剂洗涤 ,无菌水冲洗干净 ,经 70 %酒精处理 5 s

    后 ,用 0. 1 %升汞溶液分别采用 6～8 min、 8～10

    min、 15 min 3 种处理对外植体灭菌 ,然后放入无菌

    水冲洗4次 ,每次10 min ,并轻轻摇动。每种处理20

    个外植体 ,重复3次。灭菌后在无菌操作下 ,切去两

    端已褪色的组织 ,将茎段切成 1. 0～1. 5 cm长的小

    段(两端距芽留有一段距离) ,接入诱导分化培养基

    中 ,每瓶接1个外植体。于接种后 5 d、 11 d、 21 d 后

    观察茎段的污染率、褐化死亡率、存活率等情况 ,比

    较不同表面灭菌方式的灭菌效果 ,筛选最适外植体

    处理方式。

    从表 1 的试验结果可以看出:不同的表面灭菌

    方式 ,其效果是不一样的 ,其中70 %酒精表面灭菌 5

    s后用 0. 1 %升汞溶液灭菌 8～10 min 处理外植体 ,其成活率高达80 % ,污染率10 % ,褐化死亡率10 % ,为3种表面灭菌方式中效果最好的。试验结果还可

    看出 ,取茎段的中部 ,其成活率高于顶部和底部;5

    月份取材比6月份、 7 月份取材成活率高;在 5 月份

    取茎段的中部作外植体 ,成活率高 ,丛生芽分化快 ,增殖多 ,生长快 ,苗势壮。

    表1 不同表面灭菌方式对木香茎段诱导分化的影响

    项 目

    表面灭菌方式

    处理一 处理二 处理三

    接种茎段总数(个) 20 20 20

    污染茎段数(个) 8 2 0

    茎段污染率( %) 40 10 0

    褐化死亡茎段数(个) 1 2 12

    茎段褐化死亡率( %) 5 10 60

    成活茎段数(个) 11 16 4

    茎段成活率( %) 55 80 20

    注:处理一为70 %酒精5 s ,0. 1 %升汞6～8 min ;处理二为70 %

    酒精5 s ,0. 1 %升汞8～10 min ;处理三为70 %酒精5 s ,0. 1 %升汞15

    min。

    2 不同激素配比对诱导分化的影响

    将无菌外植体接入诱导分化的培养基[1 ,2 ]

    (基

    本培养基为MS)上 ,在培养 5 d、 11 d、 21 d 后分别观

    察愈伤组织萌发、丛生苗生长情况 ,试验结果见

    表2。

    由表 2 可以看出 ,以 6 - BA 为 2. 0 mg L、 NAA

    为0. 1 mg L 的组合配方最佳。该组合侧芽 5 d 内

    即开始陆续萌动 ,11 d丛生苗长至0. 1～0. 5 cm ,21

    — 67 — 江苏农业科学 2005年第1期

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.表2 不同激素配比对木香形成丛生苗的影响

    处理

    不同激素配比

    6 - BA

    (mg L)

    NAA

    (mg L)

    平均诱导

    丛生苗数

    (个)

    丛生苗生长势

    1 1. 0 0. 1 3～4. 5 + + + + (一半长愈伤、一半长苗)

    2 1. 5 0. 1 4～5 + + + + + (伴有少量愈伤)

    3 2. 0 0. 1 6. 5 + + + + + + + (偶有愈伤)

    4 2. 5 0. 1 2. 5 + + + (伴有愈伤)

    5 2. 0 0. 5 3～4 + + + (伴有愈伤)

    6 2. 0 1. 0 1. 5 + + (伴有愈伤)

    7 2. 0 0 0 0 (全部为愈伤组织)

    注:每处理30瓶 ,试验重复3次 ,诱导丛生苗个数及丛生苗生长势为 3次

    平均值 ......