樟树总DNA提取技术的研究.PDF
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2006年2月23日
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参见附件(94KB，4页)。
樟树总DNA提取技术的研究
潘晓华 ,黄儒珠 ,朱锦懋
(福建师范大学生物工程学院 ,福建 福州 350007)
摘要: 比较了常规的 CTAB法与改进的 CTAB法对樟树总 DNA提取的结果。在常规的 CTAB法基础上 ,采取先破碎细胞
收集细胞核 ,将存在于细胞质中的大量影响DNA提取质量的多酚等次生代谢物除去后 ,再加核裂解液释放 DNA ,经分离
纯化 ,提得的 DNA 通过 A260 A280比值的测定及电泳 ,限制性内切酶消化 ,PCR扩增 ,结果表明 ,用改进的 CTAB 法提取的
DNA纯度和完整性均优于常规的 CTAB法。
关键词: 樟树;DNA提取;方法
中图分类号: S792123011 文献标识码: A 文章编号: 1002 - 7351 (2004) 01 - 0031 - 03
Study on Total DNA Extraction from Cinnamomun Camphora
PAN Xiao 2hua , HUANG Ru 2zhu, ZHU Jin2mao
( Bioengineering College , Fuj ian Normal University , Fuzhou 350007 , China)
Abstract :A comparative study on total DNA ext raction f rom Cinnamomun Camphora which is rich secondary metabolites. Based
on the conventional CTAB methods ,an efficient procedure was developed. The major improvement included elimination a lot of sec 2
ondary metabolites such as polyphenols etc ,and collection of nuclei before f ree DNA. Then CTAB 2 f ree buffer was added to ext ract
total DNA. The results f rom ratios of A260 and A280 ,elect rophoresis ,digestion with rest riction endonucleases and PCR amplification
suggested that the modified CTAB methods produce high quality DNA compared with conventional CTAB methods.
Key words :Cinnamomun Camphora ;DNA ext raction ;method
樟树( Cinnamomun Camphora (L. ) Presl)是中国特有的珍贵经济树种 ,也是园林绿化树种 ,主要分布
于海南、台湾、福建、江西、广东、广西、湖北、湖南、四川、重庆、云南、贵州、浙江等省[1 ]。樟树的良种选育、人工林培育、抑菌化合物的分离纯化、抗病机理的研究以及樟油的提取与成分分析等 ,已有较深入的研究。
从分子水平上对樟树的基因资源及遗传基础进行研究是樟树研究的一个重要侧面 ,而获取高质量的总
DNA是开展分子生物学研究的基础。由于樟树含有大量多糖及次生代谢物质 ,给 DNA 的提取带来一定
的难度。笔者就樟树DNA提取技术进行探索 ,旨在寻找一种较佳的途径以获取高质量的总DNA ,为樟树
的分子生物学研究提供参考。
1 材料与方法
111 试验材料
供试樟树叶片采自福建师范大学生物工程学院。
112 DNA提取
11211 常规的 CTAB 法 用手术剪剪取樟树嫩叶 012g ,置研钵中 ,加少量石英砂及 1 mL 65 ℃预热的 3
×CTAB 裂解液[100 mmol· L - 1
Tris (pH810) ,25 mmol· L - 1
EDTA ,115 mol· L - 1
NaCl ,310 % CTAB ]
[2 ]
,迅速研磨 ,再加 1 mL 裂解液 ,分装于 2 个 115 mL 离心管中 ,65 ℃水浴裂解 60 min。10 000 rpm 离心 10
min ,取上清 ,加入等体积的酚 - 氯仿(体积比为 1∶ 1) ,缓慢混合至上清呈乳状。10 000 rpm 离心 10 min ,小心将上清移至新的离心管中 ,加等体积的氯仿 - 异戊醇(体积比为 24∶ 1) ,缓慢混合。10 000 rpm 离心
10 min ,取上清,置干净离心管中,加2倍体积预先冰冷的无水乙醇,轻轻转动离心管,可见絮状沉淀。10 000
收稿日期: 2003 - 09 - 18
基金项目: 福建省自然科学基金资助项目(B0110013)
作者简介: 潘晓华(1979 - ) ,女 ,福建泉州人 ,福建师大生物工程学院在读硕士生 ,从事植物生理生态学研究。
第 31卷 第 1 期
2 0 0 4 年 3 月
福 建 林 业 科 技 Jour of Fujian Forest ry Sci and Tech
Vol131 No11
Mar1 , 2 0 0 4
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.rpm离心 2 min ,弃去上清 ,沉淀用 75 %乙醇洗 2 次 ,无水乙醇洗 1 次 ,自然风干后将其溶于 250μL 高盐
TE溶液[1 mol· L - 1
NaCl ,10 mmol· L - 1
Tris (pH810) ,1mmol· L - 1
EDTA]中。10 000 rpm 离心 10 min ,小
心将上清移至另一离心管中 ,加 2 倍体积预先冰冷的无水乙醇 ,轻轻转动离心管 ,可见透明絮状沉淀。
10 000 rpm离心 2 min ,弃去上清 ,沉淀用 75 %乙醇洗 2 次 ,无水乙醇洗 1 次 ,自然风干后溶于 300μL TE
溶液 ,置 - 20 ℃冰箱保存备用 ......
潘晓华 ,黄儒珠 ,朱锦懋
(福建师范大学生物工程学院 ,福建 福州 350007)
摘要: 比较了常规的 CTAB法与改进的 CTAB法对樟树总 DNA提取的结果。在常规的 CTAB法基础上 ,采取先破碎细胞
收集细胞核 ,将存在于细胞质中的大量影响DNA提取质量的多酚等次生代谢物除去后 ,再加核裂解液释放 DNA ,经分离
纯化 ,提得的 DNA 通过 A260 A280比值的测定及电泳 ,限制性内切酶消化 ,PCR扩增 ,结果表明 ,用改进的 CTAB 法提取的
DNA纯度和完整性均优于常规的 CTAB法。
关键词: 樟树;DNA提取;方法
中图分类号: S792123011 文献标识码: A 文章编号: 1002 - 7351 (2004) 01 - 0031 - 03
Study on Total DNA Extraction from Cinnamomun Camphora
PAN Xiao 2hua , HUANG Ru 2zhu, ZHU Jin2mao
( Bioengineering College , Fuj ian Normal University , Fuzhou 350007 , China)
Abstract :A comparative study on total DNA ext raction f rom Cinnamomun Camphora which is rich secondary metabolites. Based
on the conventional CTAB methods ,an efficient procedure was developed. The major improvement included elimination a lot of sec 2
ondary metabolites such as polyphenols etc ,and collection of nuclei before f ree DNA. Then CTAB 2 f ree buffer was added to ext ract
total DNA. The results f rom ratios of A260 and A280 ,elect rophoresis ,digestion with rest riction endonucleases and PCR amplification
suggested that the modified CTAB methods produce high quality DNA compared with conventional CTAB methods.
Key words :Cinnamomun Camphora ;DNA ext raction ;method
樟树( Cinnamomun Camphora (L. ) Presl)是中国特有的珍贵经济树种 ,也是园林绿化树种 ,主要分布
于海南、台湾、福建、江西、广东、广西、湖北、湖南、四川、重庆、云南、贵州、浙江等省[1 ]。樟树的良种选育、人工林培育、抑菌化合物的分离纯化、抗病机理的研究以及樟油的提取与成分分析等 ,已有较深入的研究。
从分子水平上对樟树的基因资源及遗传基础进行研究是樟树研究的一个重要侧面 ,而获取高质量的总
DNA是开展分子生物学研究的基础。由于樟树含有大量多糖及次生代谢物质 ,给 DNA 的提取带来一定
的难度。笔者就樟树DNA提取技术进行探索 ,旨在寻找一种较佳的途径以获取高质量的总DNA ,为樟树
的分子生物学研究提供参考。
1 材料与方法
111 试验材料
供试樟树叶片采自福建师范大学生物工程学院。
112 DNA提取
11211 常规的 CTAB 法 用手术剪剪取樟树嫩叶 012g ,置研钵中 ,加少量石英砂及 1 mL 65 ℃预热的 3
×CTAB 裂解液[100 mmol· L - 1
Tris (pH810) ,25 mmol· L - 1
EDTA ,115 mol· L - 1
NaCl ,310 % CTAB ]
[2 ]
,迅速研磨 ,再加 1 mL 裂解液 ,分装于 2 个 115 mL 离心管中 ,65 ℃水浴裂解 60 min。10 000 rpm 离心 10
min ,取上清 ,加入等体积的酚 - 氯仿(体积比为 1∶ 1) ,缓慢混合至上清呈乳状。10 000 rpm 离心 10 min ,小心将上清移至新的离心管中 ,加等体积的氯仿 - 异戊醇(体积比为 24∶ 1) ,缓慢混合。10 000 rpm 离心
10 min ,取上清,置干净离心管中,加2倍体积预先冰冷的无水乙醇,轻轻转动离心管,可见絮状沉淀。10 000
收稿日期: 2003 - 09 - 18
基金项目: 福建省自然科学基金资助项目(B0110013)
作者简介: 潘晓华(1979 - ) ,女 ,福建泉州人 ,福建师大生物工程学院在读硕士生 ,从事植物生理生态学研究。
第 31卷 第 1 期
2 0 0 4 年 3 月
福 建 林 业 科 技 Jour of Fujian Forest ry Sci and Tech
Vol131 No11
Mar1 , 2 0 0 4
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.rpm离心 2 min ,弃去上清 ,沉淀用 75 %乙醇洗 2 次 ,无水乙醇洗 1 次 ,自然风干后将其溶于 250μL 高盐
TE溶液[1 mol· L - 1
NaCl ,10 mmol· L - 1
Tris (pH810) ,1mmol· L - 1
EDTA]中。10 000 rpm 离心 10 min ,小
心将上清移至另一离心管中 ,加 2 倍体积预先冰冷的无水乙醇 ,轻轻转动离心管 ,可见透明絮状沉淀。
10 000 rpm离心 2 min ,弃去上清 ,沉淀用 75 %乙醇洗 2 次 ,无水乙醇洗 1 次 ,自然风干后溶于 300μL TE
溶液 ,置 - 20 ℃冰箱保存备用 ......
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