关键词: 骨肉瘤;差异表达基因;PCR技术;克隆;序列分析

    摘 要:目的 研究人骨肉瘤组织与正常骨组织之间的差异表达基因，探讨骨肉瘤的基因改变，为建立骨肉瘤的基因诊断方法打下基础. 方法 采用mRNA差异展示技术，应用3条锚定引物和8条随机引物从人骨肉瘤组织与正常骨组织中分离出差异表达基因，对其进行克隆、测序，用打点杂交技术证实其是否为差异表达基因，将筛选出的差异表达基因在GenBank检索进行序列同源性分析. 结果 筛选及克隆出6条差异条带，为ZOL03，ZOL51，1C82，1C74，2A21及2G12，RNA打点杂交证实它们在骨肉瘤中表达，在正常骨组织中不表达.6条差异片段经序列测定，在GenBank数据库中进行序列相似性分析，证实ZOL03，ZOL51同源性极低;1C82，1C74，2A21，2G12同源性较低，此6条片段为新基因序列，ORF finder分析未发现具有开放读框，均属于非编码区序列.其中ZOL03和ZOL51两个序列在GenBank数据库中登录，接受号为BI894276和BI936370. 结论 分离并克隆了人骨肉瘤组织与正常骨组织之间的6条差异表达基因，同源性差，均确认为新基因，可能是骨肉瘤差异表达相关基因.

    Screening of differentially expressed genes in human osteosarcoma tissue

    LI Ding SU Hai-Chuan CHEN Jun YAN Xiao-Jun FAN Qing-Yu

    1 Institute of Genetic Diagnosis of Chinese PLA，Fourth Military Medical University，Xi'an710033，China，

    2 Orthopedics Oncology Institute of Chinese PLA，Tangdu Hospital，Fourth Military Medical University

    Keywords:osteosarcoma;differential expressed gene;PCR;cloning;sequence analysis ......