关键词: 牙本质涎磷蛋白;基因克隆;原核表达

    摘 要:目的 克隆人牙本质涎磷蛋白(DSPP)成熟肽编码区基因片段并进行原核表达. 方法 用异硫氰酸胍一步法从人牙乳头组织中抽提总RNA，用Oligo(dt)作引物逆转录合成牙乳头cDNA，然后利用PCR法，从cDNA中扩增出人DSPP成熟肽基因片段(约600bp)，将所得基因片段插入pBluescript质粒载体，转化到大肠杆菌XL1-Blue后挑选阳性克隆，提取重组质粒DNA，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆;将DSPP基因重组入表达载体pGEX-3X中构建表达载体，并在大肠杆菌BL21中进行表达. 结果 酶切图谱和序列分析与国外文献报道一致，DSPP蛋白在大肠杆菌中得到表达. 结论 克隆到人DSPP成熟肽编码区基因片段，并在原核中得到表达，为进一步研究其功能奠定基础.

    Cloning，sequencing and prokaryotic expression of human dentin sailophosphoprotein encoding mature protein

    ZHANG Ying SHI Jun-Nan GU Shu-Ping WANG Ping HAO Jian-Jun FEI Jian

    1 Department of Conservative Dentistry，Stomato-logical College，Fourth Military Medical Universi-ty，Xi'an710033，

    2 Shanghai Institute of Cell Biolo-gy，China Academy of Science，Shanghai200031

    Keywords:human dentin sailophosphoprotein;gene clone;prokaryotic expression

    Abstract:AIM To clone，sequence and prokaryotic express human dentin sailophosphoprotein(DSPP).METHODS In the study ......