第29卷

    2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第7期

    785～787

    人血清白蛋白亲和毛细管电泳法

    分离马来酸曲美布汀对映体

    余丽宁 李发美3

    (沈阳药科大学分析化学教研室 ,沈阳 110016)

    摘 要 以人血清白蛋白(HSA)为手性选择剂 ,采用亲和毛细管电泳法分离马来酸曲美布汀对映体。

    以50 mmol L NaH2PO4 (pH 5. 55)为运行缓冲液 ,以含 500μmol L HSA的运行缓冲液为分离缓冲液 ,利用

    部分灌注技术消除高浓度人血清白蛋白对被分析物检测的干扰 ,灌注分离缓冲液时间为 160 s。在此条

    件下 ,马来酸曲美布汀两对映体的分离度为1. 2。

    关键词 亲和毛细管电泳法 ,马来酸曲美布汀 ,手性分离

    2000208210收稿;2000212220接受

    1 引 言

    高效毛细管电泳(HPCE)具有高效、快速、设备简单和分离模式多的特点。用 HPCE分离对映体时 ,可选择的手性选择剂多 ,而且可以通过改变手性选择剂的浓度、缓冲液的pH和离子强度、加入有机改

    性剂等方法极为方便地改变对映体分离体系的选择性和分离效率。因此 ,HPCE在药物对映体的分离

    研究中应用日益广泛。

    马来酸曲美布汀是具有独特的双向调节作用的新型胃功能调节剂。其分子中含有一个手性中心

    (见图1) ,目前临床使用的是外消旋体 ,因此马来酸曲美布汀的手性分离对深入研究其对映异构体的药

    理作用和药效具有重要意义。Tanaka 等采用α 12酸性糖蛋白〔 1〕、牛血清白蛋白〔 2〕 或磺丁基β 2环糊精〔 3〕 为

    手性选择剂 ,在聚酰胺涂渍柱上拆分马来酸曲美布汀对映体。使用的聚酰胺涂渍柱价格昂贵 ,不适于广

    泛使用。本文采用人血清白蛋白为手性选择剂 ,在石英毛细管空柱上成功拆分马来酸曲美布汀对映体。

    q CH3O

    CH3O

    CH3O

    COOCH2 C

    3

    CH2CH3

    q

    N

    CH3

    CH3

    ·‖ CHCOOH

    CHCOOH

    图1 马来酸曲美布汀的结构式

    Table 1 Structure of trimebutine maleate

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂

    毛细管电泳仪包括:GDY 230kV型毛细管电泳高压电源仪(山东大学化学院)和 Spectra2100 可变波长

    检测器(Spectra2Physics , USA)改装成毛细管电泳检测器。江申色谱工作站(大连江申分离科学技术公

    司) ,石英毛细管(河北永年光导纤维厂) ,内径75μm ,总长度为50 cm ,有效长度为40 cm。

    马来酸曲美布汀对照品(含量为99. 7 %)由本校药剂教研室提供。磷酸二氢钠、氢氧化钠均为分析

    纯试剂。人血清白蛋白(HSA) (购于上海生物制品研究所和 Sigma 公司) 。

    2. 2 实验方法称取适量磷酸二氢钠溶于重蒸馏水中,配制浓度为 50 mmol L 的运行缓冲液;精密称取 34. 5 mg人

    血清白蛋白(HSA)溶于 0. 5 mL 运行缓冲液中 ,逐步稀释成 HSA 浓度为 600μmol L , 500μmol L , 400

    μmol L , 300μmol L 和200μmol L 的分离缓冲液。

    运行缓冲液和样品溶液(溶于运行缓冲液)在使用前经0. 45μm滤膜滤过并超声脱气。先将毛细管

    进样(正极)端插入分离缓冲液中 ,虹吸灌注160s ,进出口液面高度差25 cm ,使分离缓冲液灌注填充一段

    毛细管。再将毛细管进样端插入样品管 ,虹吸进样10 s ,然后将毛细管两端插入运行缓冲液中加电压进

    行分析。分离电压为9. 0 kV ;检测波长为214 nm;柱温为室温。

    每次开机后 ,依次用1 mol L 氢氧化钠溶液及重蒸馏水冲洗毛细管2 min ,2次进样之间先用缓冲液

    清洗毛细管1 min ,将残余的分离缓冲液抽出 ,再依次用 1 mol L 氢氧化钠溶液、重蒸馏水和运行缓冲液

    冲洗毛细管各1 min ......