气相色谱电子捕获检测法测定人尿中

    氟硝西泮的代谢物72氨基氟硝西泮

    邢丽梅3 1

    谭家镒1

    李发美2

    姜兆林1

    1

    (中国刑事警察学院法医系 ,沈阳 110035) 2

    (沈阳药科大学 ,沈阳 110015)

    摘 要 采用气相色谱电子捕获检测法测定人尿中氟硝西泮的代谢物72氨基氟硝西泮。测定时尿中加

    入内标72氨基硝西泮 ,用β 2葡萄糖醛酸苷酶水解及碱性液液萃取 ,再用七氟丁酸酐衍生化。尿中 72氨基

    氟硝西泮提取率为96. 8 %;回收率为98. 6± 3. 4 %(平均值 ±SD) ;检出限为 1. 2μgP L ,对口服治疗量氟硝

    西泮的人尿进行检测 ,可检出服药后60 h尿中的72氨基氟硝西泮。

    关键词 氟硝西泮 ,72氨基氟硝西泮 ,氟代酰基衍生化 ,人尿 ,气相色谱法

    2000209228收稿;2001201210接受

    1 引 言

    氟硝西泮(flunitrazepam ,以下简称 FLNZ)是麻醉后犯罪案件中常用的药物 ,为确定案件的性质 ,常需

    进行受害人血、尿等体液中药物或其代谢物的检测。

    人口服 FLNZ 后 ,血、尿中原体及血中代谢物浓度都很低 ,只有尿中 72氨基氟硝西泮 ( 72

    aminoflunitrazepam ,以下简称72AFLNZ)有较高的浓度〔 1〕。已报道的血、尿中 72AFLNZ的检测方法有高效

    液相色谱法〔 1 ,2〕、非衍生化气相色谱氮磷检测法〔 3〕、非衍生化气相色谱2质谱联用法( GCP MS)

    〔 4〕和由

    Elsohly等报道的七氟丁酰衍生化 GCP MS法〔 5〕,本文报道尿中72AFLNZ七氟丁酰衍生化气相色谱电子捕

    获检测法。并用该法对口服治疗量 FLNZ的人尿进行了测定 ,结果表明该法适合麻醉后犯罪案件的检

    测需要。

    2 实验部分

    2. 1 主要仪器与试剂

    HP6890气相色谱仪 ,电子捕获检测器检测 ,HP化学工作站处理数据 ,HP25 30 m×0. 32 mmi . d.毛细

    柱(膜厚0. 1μm) 。不分流进样(阀关闭时间0. 75 min) ,进样量 1μ L。进样口温度 280 ℃,柱温 200 ℃(1

    min)

    20℃ P min

    280 ℃(10 min) ,载气高纯氮(2. 5 mLP min) ,尾吹高纯氮(60 mLP min) 。

    72AFLNZ、 72氨基硝西泮(72ANITZ ,内标) (Hoffmann2 La Roche公司友好赠送) ,分别用甲醇配制成 100

    mgP L 储备液 ,临用时用甲醇稀释成 10 mgP L 和 1 mgP L 的工作标准液。七氟丁酸酐(HFBA) :购自美国

    Supleco 公司。 β 2葡萄糖醛酸苷酶:购自美国 Sigma 公司 ,临用时加水配制成10000单位P mL 溶液。42吡咯

    基吡啶(42 pyrolidinopyridine) :酰化催化剂 ,购自美国 Acros 公司 ,配成 1 gP L 的苯溶液。苯、异戊醇:分析

    纯 ,二次蒸馏后使用。pH 10. 8缓冲液:无水碳酸钠 53. 0 g ,碳酸氢钠 42. 0 g ,加水溶解至 500 mL。pH

    418缓冲液:无水乙酸钠41. 0 g ,加水溶解 ,加入 36 %乙酸 83. 3 mL ,加水至 500 mL。未注明的试剂均为

    分析纯 ,实验用水为二次蒸馏水。

    2. 2 生物试样

    服药人3名(1、 2、 3号) ,1号为 22 岁男性 ,2 号为 35 岁女性 ,3 号为 57 岁男性。各口服 FLNZ 1 mg ,临服药前收集尿液(空白尿) ,服药后定时连续收集尿液至60 h ,每份取10 mL ,置冰箱储存 ,供检测。

    2. 3 酶解、萃取及衍生化

    取尿液1 mL 加内标100 ng ,加pH 418缓冲液50μ L ,加酶溶液20μ L ,于37 ℃酶解14 h。冷至室温 ,第29卷

    2001年8月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第8期

    919～921加pH 10. 8缓冲液0. 5 mL ,加苯2异戊醇(98. 5∶ 1. 5) 5 mL ,涡旋2 min ,3000 rpm离心6 min ,分取有机相 ,于

    110 ℃甘油浴中浓缩至0. 5 mL ,加催化剂溶液 10μ L ,加 HFBA 10μ L ,室温(20～24 ℃)放置 30 min ,加pH

    10. 8的缓冲液1 mL ,涡旋30 sec ,3000 rpm离心6 min ,分取有机相 ,于 110 ℃甘油浴中浓缩至 0. 1 mL ,供

    分析用。

    2. 4 工作曲线绘制

    用空白尿及72AFLNZ、 72ANITZ工作标准液配制 72AFLNZ浓度依次为 0、 10、 20、 40、 80、 120、 160、 200

    μgP L ,72ANITZ浓度均为100μgP L 的标准系列尿液 ,进行酶解、提取、衍生化 ,取样测定 ......