双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金黄色葡萄球菌肠毒素B.PDF
http://www.100md.com
李红云 姚咏明 施志国 董宁 于燕 陆连荣 盛志勇
金黄色葡萄球菌,肠毒素,酶联免疫吸附试验
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参见附件(166KB，3页)。
双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金黄色葡萄球菌肠毒素B.PDF
双单抗夹心EL ISA 方法检测血浆及
组织中金黄色葡萄球菌肠毒素B
李红云, 姚咏明, 施志国, 董 宁, 于 燕, 陆连荣, 盛志勇
(解放军第304 医院, 北京 100037)
摘要: 目的 建立一种敏感、快速的酶免疫测定方法, 用于定量检测动物体液及组织中金黄色葡萄球菌(SAU )肠
毒素B (SEB)。方法 采用生物素2链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法, 以SEB 单抗 1D2 为包被抗
体、生物素标记的另一种 SEB 单抗 2D1 为标记抗体进行测定。结果 在 0. 078～ 10. 000 Lg? L 的浓度范围内,SEB 标准品浓度与吸光度值线性关系良好, 相关系数为 r= 0. 9906,平均变异系数为 5. 32%; 正常大鼠、家兔和人
血浆中的平均回收率分别为 96. 43%、 97. 34%和 19. 99% ,正常人尿液中平均回收率为 91. 53%。结论 本法灵
敏度高、准确性好、稳定性强, 而且简便、快速, 适用于动物血浆及组织中微量SEB 的定量测定, 并有一定的临床
应用前景。
关键词: 金黄色葡萄球菌; 肠毒素; 酶联免疫吸附试验
中图分类号: R378. 1+
1 文献标识码: A 文章编号: 100524529 (2002) 0920655203
Enzyme- l inked Immunosorben t Assay for Detect ion of Staphylococca l
En terotox in B in Pla sma and Tissues
L I Hong2 yun, YAO Yong2 m ing, SH I Zh i2 guo, DON G N in, YU Yan, LU L ian2rong, SHEN G Zh i2 yong
(D ep a rtm en t of Imm unology , T raum a R esea rch Cen ter, the 304th H osp ita l
of P eop le′ s L ibera t ion A rmy , B eij ing 100037, Ch ina)
Abstract : OBJECTIVE To establish a two2site monoclonal ant ibody quant itat ive enzyme2linked immuno so rbent
assay (EL ISA ) fo r determ ining p lasma and t issue staphylococcal entero toxin B (SEB ) concent rat ions in rats .
METHODSA monoclonal ant ibody to SEB 1D2w as emp loyed as cap ture ant ibody and ano ther one to SEB 2D1 as
indicato r ant ibody . The sensit ivity of EL ISA w as imp roved by bio t in2st rep tavidin binding system. RESULTS
Calibrat ion curves fo r SEB w ere linear f rom 0. 078210. 000 Lg? L ( r= 0. 9906) , and the mean coeff icient of var ia2
t ion (CV ) w as 5. 32%. In p lasma samp les f rom no rmal rats, rabbits and human vo lunteers, the mean recovery
of SEB w as 96. 43% , 97. 34% and 19. 99% , respect ively, and it w as 91. 53% in human ur inal samp le . CON2
CLUSIONS Th is method is simp le, rap id w ith h igh sensit ivity and stability, w h ich may be suitable fo r quant ita2
t ive measurement of the SEB in bo th p lasma and t issues .
Key words : S tap hy lococcus au reus; Entero toxin; Enzyme2linked immuno so rbent assay
细菌学研究表明可溶性外毒素的产生是革兰阳
性菌(G+
菌)感染的重要标志之一, 在 G+
菌感染性
疾病的发生、发展中具有重要意义。其中金黄色葡萄
球菌(SAU )肠毒素和中毒性休克毒素21 (TSST 21)
因其“超抗原”特性, 以及它们在脓毒症和中毒性休
克综合征中的特殊意义而倍受关注。临床流行病学
调查显示, 1992～ 1993 年间从我院烧伤患者及医务
人员手和鼻腔中分离的1 2 7株SAU 中, 产毒率高
收稿日期: 2001209228 ; 修订日期: 2002205209
基金项目: 国家重点基础发展规划项目
(编号G1999054203)、国家杰出青年科学基金(编号 30125020)、军队杰出中青年人才专项基金(编号 98J 013)
达 91. 6% , 且以同时产生多种类型毒素者居多(同
时产SEB、 SEC 者最为常见) , 其中 90%以上为耐药
菌株。初步提示产肠毒素 SAU 普遍存在于烧伤患
者的创面、呼吸道, 且耐药菌较非耐药菌有更强的毒
力和致病性, 对烧伤后并发 SAU 感染构成潜在的
威胁1。但是, 由于缺乏敏感、快速的肠毒素检测手
段, 对于 SAU 肠毒素在烧伤脓毒症中的变化特点
及其作用机制至今尚缺乏足够的了解2。本实验参
照了梁秀敏等建立的双单抗夹心酶联免疫吸附测定
(EL ISA )方法并对其进行改良, 用于定量检测血浆
及组织匀浆中的微量SEB。
1 材料与方法
1 . 1 试剂与仪器 SEB 标准品购自军事医学科学
· 556 · 中华医院感染学杂志 2002 年第 12 卷第 9 期院五所; 抗 SEB 单抗 1D2 和生物素标记的抗 SEB
单抗 2D1 购自防化研究院四所; 辣根过氧化物酶标
记的链亲素和酶联反应底物2四甲基联苯胺(TMB)
购自华美生物工程公司。酶联检测仪为英国Den ley
公司产品。本实验采用Co star 96 孔联酶板, 实验前
经重铬酸钾洗液浸泡过夜, 双蒸水冼净后烤干待用。
1 . 2 血浆及组织样品的处理 血标本为肝素抗凝
全血, 3 000 r? m in 离心 15 m in, 分离血浆置- 20℃
贮存待测 ......
组织中金黄色葡萄球菌肠毒素B
李红云, 姚咏明, 施志国, 董 宁, 于 燕, 陆连荣, 盛志勇
(解放军第304 医院, 北京 100037)
摘要: 目的 建立一种敏感、快速的酶免疫测定方法, 用于定量检测动物体液及组织中金黄色葡萄球菌(SAU )肠
毒素B (SEB)。方法 采用生物素2链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法, 以SEB 单抗 1D2 为包被抗
体、生物素标记的另一种 SEB 单抗 2D1 为标记抗体进行测定。结果 在 0. 078～ 10. 000 Lg? L 的浓度范围内,SEB 标准品浓度与吸光度值线性关系良好, 相关系数为 r= 0. 9906,平均变异系数为 5. 32%; 正常大鼠、家兔和人
血浆中的平均回收率分别为 96. 43%、 97. 34%和 19. 99% ,正常人尿液中平均回收率为 91. 53%。结论 本法灵
敏度高、准确性好、稳定性强, 而且简便、快速, 适用于动物血浆及组织中微量SEB 的定量测定, 并有一定的临床
应用前景。
关键词: 金黄色葡萄球菌; 肠毒素; 酶联免疫吸附试验
中图分类号: R378. 1+
1 文献标识码: A 文章编号: 100524529 (2002) 0920655203
Enzyme- l inked Immunosorben t Assay for Detect ion of Staphylococca l
En terotox in B in Pla sma and Tissues
L I Hong2 yun, YAO Yong2 m ing, SH I Zh i2 guo, DON G N in, YU Yan, LU L ian2rong, SHEN G Zh i2 yong
(D ep a rtm en t of Imm unology , T raum a R esea rch Cen ter, the 304th H osp ita l
of P eop le′ s L ibera t ion A rmy , B eij ing 100037, Ch ina)
Abstract : OBJECTIVE To establish a two2site monoclonal ant ibody quant itat ive enzyme2linked immuno so rbent
assay (EL ISA ) fo r determ ining p lasma and t issue staphylococcal entero toxin B (SEB ) concent rat ions in rats .
METHODSA monoclonal ant ibody to SEB 1D2w as emp loyed as cap ture ant ibody and ano ther one to SEB 2D1 as
indicato r ant ibody . The sensit ivity of EL ISA w as imp roved by bio t in2st rep tavidin binding system. RESULTS
Calibrat ion curves fo r SEB w ere linear f rom 0. 078210. 000 Lg? L ( r= 0. 9906) , and the mean coeff icient of var ia2
t ion (CV ) w as 5. 32%. In p lasma samp les f rom no rmal rats, rabbits and human vo lunteers, the mean recovery
of SEB w as 96. 43% , 97. 34% and 19. 99% , respect ively, and it w as 91. 53% in human ur inal samp le . CON2
CLUSIONS Th is method is simp le, rap id w ith h igh sensit ivity and stability, w h ich may be suitable fo r quant ita2
t ive measurement of the SEB in bo th p lasma and t issues .
Key words : S tap hy lococcus au reus; Entero toxin; Enzyme2linked immuno so rbent assay
细菌学研究表明可溶性外毒素的产生是革兰阳
性菌(G+
菌)感染的重要标志之一, 在 G+
菌感染性
疾病的发生、发展中具有重要意义。其中金黄色葡萄
球菌(SAU )肠毒素和中毒性休克毒素21 (TSST 21)
因其“超抗原”特性, 以及它们在脓毒症和中毒性休
克综合征中的特殊意义而倍受关注。临床流行病学
调查显示, 1992～ 1993 年间从我院烧伤患者及医务
人员手和鼻腔中分离的1 2 7株SAU 中, 产毒率高
收稿日期: 2001209228 ; 修订日期: 2002205209
基金项目: 国家重点基础发展规划项目
(编号G1999054203)、国家杰出青年科学基金(编号 30125020)、军队杰出中青年人才专项基金(编号 98J 013)
达 91. 6% , 且以同时产生多种类型毒素者居多(同
时产SEB、 SEC 者最为常见) , 其中 90%以上为耐药
菌株。初步提示产肠毒素 SAU 普遍存在于烧伤患
者的创面、呼吸道, 且耐药菌较非耐药菌有更强的毒
力和致病性, 对烧伤后并发 SAU 感染构成潜在的
威胁1。但是, 由于缺乏敏感、快速的肠毒素检测手
段, 对于 SAU 肠毒素在烧伤脓毒症中的变化特点
及其作用机制至今尚缺乏足够的了解2。本实验参
照了梁秀敏等建立的双单抗夹心酶联免疫吸附测定
(EL ISA )方法并对其进行改良, 用于定量检测血浆
及组织匀浆中的微量SEB。
1 材料与方法
1 . 1 试剂与仪器 SEB 标准品购自军事医学科学
· 556 · 中华医院感染学杂志 2002 年第 12 卷第 9 期院五所; 抗 SEB 单抗 1D2 和生物素标记的抗 SEB
单抗 2D1 购自防化研究院四所; 辣根过氧化物酶标
记的链亲素和酶联反应底物2四甲基联苯胺(TMB)
购自华美生物工程公司。酶联检测仪为英国Den ley
公司产品。本实验采用Co star 96 孔联酶板, 实验前
经重铬酸钾洗液浸泡过夜, 双蒸水冼净后烤干待用。
1 . 2 血浆及组织样品的处理 血标本为肝素抗凝
全血, 3 000 r? m in 离心 15 m in, 分离血浆置- 20℃
贮存待测 ......
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