关键词: 人核糖体蛋白L23;聚合酶链反应;肿瘤;转染

    摘 要:目的 扩增人核糖体蛋白L23(RPL23)编码基因序列，构建其正、反义真核表达载体，分别转染胃癌细胞SGC7901及胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR，以进一步研究RPL23基因与胃癌多药耐药的关系. 方法 按文献报道的RPL23核苷酸序列设计合成PCR引物，利用总RNA抽取试剂盒从人胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR中提取细胞总RNA，反转录合成cDNA，再用PCR方法扩增目的基因序列.PCR产物经DNA序列测定证实后，通过双酶切，将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中，酶切电泳鉴定.采用脂质体介导的方法将pcDNA3.1(+)-RPL23转染SGC7901细胞，pcDNA3.1(+)-anRPL23转染SGC7901/VCR细胞，经G418筛选后，随机挑选细胞克隆.通过斑点杂交检测正、反义转染后RPL23mRNA表达水平的变化. 结果 应用RT-PCR反应扩增获得大小约0.5kb的特异性片段.经DNA序列分析，证实与文献报道的人RPL23编码区序列一致.重组正义真核表达载体pcDNA3.1(+)-RPL23双酶切产生大小约5.4kb，0.5kb的片段;重组反义真核表达载体pcDNA3.1(+)-anRPL23双酶切产生大小约5.4kb，0.5kb的片段，均与预期结果相符.转染细胞经筛选后，随机挑选，扩增了2个细胞克隆，斑点杂交提示反义转染后RPL23mRNA表达水平显著下降，而正义转染后其表达水平明显增加. 结论 成功克隆了人RPL23编码基因序列，并构建了其正、反义真核表达载体.在胃癌细胞系SGC7901及长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR中得到稳定转染细胞株，正义转染细胞中RPL23mRNA表达明显增加，反义转染细胞中表达明显受抑.

    Cloning RPL23encoding gene and transfecting sense，antisense nucleic acid into gastric cancer cell

    ZHAI Hui-Hong SHI Yong-Quan GUO Xin-Nin WANG Xin LAN Mei YANG Li FAN Dai-Ming

    1 Department of Digestive Internal Medicine，Affili-ated Hospital，Ningxia Medical College，Yinchuan750004 ......