!""! 第四卷 第四期 ! #$%&’ ($&’

    〔!"#$ %&’()&( *)$ +(&,)"#"-. / 0"$(1)’2*3’") "4 +1*$’3’")*# 5,’)(6( 0($’&’)(〕

    黄 芩 )*+,-%%./0. 1.0*.%-2303

    4-$/50是一个广布种，从俄罗斯的

    贝加尔到我国秦岭南坡(北纬6789

    :78) 都有分布，跨越了多个气候

    带和土壤带，虽然植株高矮、叶

    被毛茸多少等均有变化，但总体

    上看，叶片和花果形态比较一致，未见记载种下分类单位 [7] 。但我

    们在研究黄芩药材道地性的过程

    中，发现药用部位根因产地不同

    和采收年限不同而出现长短粗细、有无枯心等差别，不同产地药材

    的药效成分黄芩苷含量也不同 [!] 。

    在众多的产地中，一般认为以承

    德地区产的质量最好，被视为黄

    芩的道地药材 [6] 。各产地毒性实

    验比较，河北围场产黄芩在最大

    黄 芩 种 群 遗 传

    多 样 性 初 步 研 究

    "冯学锋## 胡世林 ;中国中医研究院中药研究所 北京 7""<""=

    郭宝林 ;香港浸会大学中药学院 香港=

    李家实 阎玉凝 ;北京中医药大学 北京 7"""!>=

    摘 要：分析中药黄芩道地性与遗传多样性。方法：用随机扩增的?(@多态性分析(A@B?)方

    法，对76个居群C!个黄芩)*+,-%%./0. 1.0*.%-2303和并头黄芩)& 3*$/D0E$%0.样本，进行遗传多样性及黄芩

    居群遗传变异测定。结果：用7’个随机引物，共获得77’个条带，其中多态性条带77!条。黄芩在物

    种水平上的多态性条带比率(BBF)值为>:&:G，居群水平的平均BBF值为’7&>G。黄芩样本A@B?聚

    类分析(HB4I@)没有表现出明显的分支，但显示出与地理位置有关三个类群。分子方差分析

    (@IJ#@)显示，黄芩居群间的遗传变异占总变异的7K&K6G，居群内变异占K7&7
    分子水平上证明黄芩道地性与遗传变异和地理环境有关系，并提出黄芩栽培选种的策略应该是最大

    限度地保持其遗传多样性。

    关键词：黄芩 多态性分析 居群 遗传变异 道地性

    收稿日期!"##"$#%$#&

    #国家自然科学基金重点资助课题：“中药材道地性的系统研究”(($&6><6":"") 。课题负责人：胡世林研究员。

    ##本文联系人：冯学锋，中国中医研究院中药研究所，副研究员，LMN.0%O P,%%QNR&*-0&5$S&*2T U-%O "7"MC’"7’’77 转 !>K6。

    #

    78〔!"#$ %&’()&( *)$ +(&,)"#"-. / 0"$(1)’2*3’") "4 +1*$’3’")*# 5,’)(6( 0($’&’)(〕

    浓度、最大给药体积时，仍不见

    有小鼠死亡，而陕西太白产的黄

    芩则表现出一定毒性(!"#$ 为

    %&’%$( ) *() [+] 。徐昭玺 [#] 观察

    黄芩的开花结果特性后，发现黄

    芩群体内变异类型丰富多样，并

    从中分离出生育期不同的早、中、晚三种类型。迄今只见黄芩属种

    间的,-."识别研究 { /} ，未见有对

    黄芩居群遗传变异的研究报道。

    由此可以预料黄芩是研究种内遗

    传变异和"0-多态性的极好材料，所取得的结果对中药黄芩道地性

    研究，发现和保护黄芩的优良种

    质，将具有重要的理论和实用价

    值。

    一、材料与方法

    1’ 材料

    采集黄芩234567789:8 ;8:3876<=

    >:> ?6@9(:新鲜叶片，置硅胶中快

    速干燥。野生样本采自11个样点

    (居群) ，栽培样本1个样点，作为

    家野对比，每样点取#个植株；又

    采并头黄芩2’ >3@9A:B@7:8 C:>3D’ 6E

    23D98=* %个植株，作为种间对照，共/%个样本(见表1) 。凭证标

    本存中国中医研究院中药研究所

    标本馆(FGGH) 。

    %’ 仪器和试剂

    离心机为I69864>公司生产的

    J:@B4(6 25985@>，.F,仪为.K,LH0

    K!GK,公司生产的?6=6-MN .F,2O>56M P/$$，电泳仪为JHQ<,-"

    公司生产.QRK, .-F &$$，凝胶

    成像系统为北京鼎永科技有限公

    司产品。

    S8T 酶、 A0S.、 随机引物 (上海

    28=(@=) ， KJ (2H?G-) ，"0- 78AA69

    ( 华 美 公 司 ) ， ! < 巯 基 乙 醇

    (GK,FL) ， S9:>碱(?HJFQ) ， K"S-

    (-G,K2FQ) ， 琼脂糖凝胶 (上海

    东海制药厂) ， 其他溶剂为分析纯。

    &’ "0- 提取

    参照文献 { U} 并加以改进，将

    黄芩叶在液氮环境下研磨成细粉

    状。加入已预热的%VFS-J(!—

    巯基乙醇1W) &M7，/#X恒温/$

    分钟，期间振摇几次。取出放置

    至室温，离心取上清液加&M7氯仿Y

    异戊醇(%+Y1) ，离心，重复此步

    骤至界面澄清。取上清液加% ) &体

    积的异丙醇，<%$X冷藏%$分钟，1%$$$ 9’M:=<1离心1#分钟。弃去

    上 清 液 ， 将 沉 淀 晾 干 ， 用 SK

    1$$"7溶解。

    +’ .F,扩增

    反应体系体积为%#"7：模板

    "0- #"7(%’#Z#=() ，1$V,6835:@=

    J4BB69 %’#"7，1$MG A0S. $’#"7，%#MG G(% [

    %"7，AAI%Q 1%’U"7，J2- 1"7，S8T酶$’&"7 (1’#\) ，引物1"7 (1#=() 。先进行引物筛

    选，再将筛选好的引物对所有的

    样本扩增，设不加模板的空白对

    照，每个引物重复%次。

    .F,扩增程序为：预变性：

    P+X ， 1$M:=； 扩 增 循 环 ( +#

    3O376>)： P+X ， 1M:=， &/X ，1M:=，U%X，%M:=；延伸：U%X，1$M:=。

    .F,反应产物用1’#W琼脂糖

    凝胶(含$’#"(’M7<1KJ)电泳，用

    %$$;N "0-作分子量标记，用紫

    外自动成相仪照相。

    #’ 数据处理

    对扩增条带按有或无记录，每一位点有带记为“1”(强带和

    弱带同记) ......