LN硝基精氨酸甲酯对失神经骨骼肌细胞凋亡的影响
【关键词】 LN硝基精氨酸甲酯；失神经骨骼肌；凋亡
0引言
周围神经损伤后，失神经肌肉萎缩非常严重，在很大程度上影响了周围神经损伤修复后的功能恢复，因而如何预防或延缓肌萎缩是临床康复医学急需解决的问题. 运动神经元与其靶器官-骨骼肌之间存在相互的营养联系，周围神经损伤后联系中断，运动神经元发生退变死亡，骨骼肌则发生萎缩纤维化. 我们通过靶肌肉注射LNAME检测肌细胞调亡，并探讨细胞凋亡在失神经支配骨骼肌萎缩中可能发挥的作用.
1材料和方法
1.1材料24只SD大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供)雌雄不限，体质量约200 g，随机分为实验组和对照组，每组12只. LNAME(购自Sigma公司)；TUNEL检测凋亡试剂(购自美国Boehringer Mannheim公司)；电子分析天平；TJTY300型图像分析仪.
1.2方法
1.2.1建立臂丛神经损伤模型用10 g/L戊巴比妥钠(30 mg/kg,ip)麻醉后，按文献[1]报道建立臂丛神经损伤模型. 术后多次电生理检测神经肌肉动作电位幅值，证明手术侧肱二头肌始终处于去神经支配状态. 术后实验组肱二头肌多点注射LNAME,总剂量为10 mg/(kg·d)，共10 d；对照组用同样方法注射同等剂量的生理盐水. 术后5 wk测量各指标.
1.2.2臂围与肌肉质量测定在双侧上臂中点测量一次臂围，健侧臂围减去去神经侧臂围得出臂围差. 处死大鼠，自起止点完全切取肱二头肌，迅速置分析天平上称取质量.
1.2.3TUNEL法检测肌细胞凋亡率取上述肱二头肌中段部分用40 g/L的甲醛液固定，常规石蜡包埋切片. 采用TUNEL法检测肌细胞凋亡率，利用图像分析系统在每张切片上随机选取10个视野，计数10个视野的阳性细胞百分率，取其平均数. 统计学分析：所有数据用统计学软件SPSS 12.0处理，计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验，P<0.05为有显著性差别.
2结果
2.1臂围差的比较LNAME治疗组大鼠与对照组比较臂围的减少有明显缓解(P<0.05,表1).
2.2肱二头肌质量的比较LNAME治疗组较对照组有明显提高(P<0.05,表1).
2.3肱二头肌细胞凋亡的比较通过TUNEL法检测实验组和对照组肌肉内细胞凋亡情况，发现对照组细胞凋亡率明显高于实验组(P<0.05,表1).
表1两组各指标结果比较(略)
3讨论
骨骼肌萎缩与肌细胞发生凋亡有关，Always等[2]研究表明Id基因家族在细胞凋亡引起的骨骼肌萎缩中起关键作用；刘京升等[3]发现慢性脊髓压迫的大鼠骨骼肌细胞存在凋亡现象；Jejurikar等[4]发现肌肉除神经支配增加了肌卫星细胞对凋亡的敏感性，这也可能是骨骼肌发生萎缩的一个原因. Stangel等[5]通过在骨骼肌细胞培养液中加入不同浓度的硝普钠(SNAP, NO的供体),结果发现NO对培养的肌细胞有诱导凋亡的作用，并呈剂量依赖性. LNAME是一氧化氮合酶(NOS)竞争性抑制剂，它能有效的抑制NOS的产生，减少NO的合成，从而可能间接的抑制了NO对骨骼肌细胞的毒性作用，减少了肌细胞凋亡的发生率. 本实验通过靶肌肉注射LNAME抑制失神经肌萎缩，结果表明其能降低肌细胞凋亡的发生，较好地缓解骨骼肌失神经后的萎缩，同时证实了失神经肌肉存在凋亡现象并取得了与上述其他学者一致的结论. 但如何从细胞凋亡角度更好地防治骨骼肌的萎缩尚有待进一步研究.
【参考文献】
[1] 王敏，黄象艳，李震,等. 胰岛素生长因子Ⅰ对臂丛神经损伤后骨骼肌细胞凋亡的影响[J].中国矫形外科杂志，2003,11(19，20):1371-1373.
[2] Alway SE, Martyn JK, Ouyang J,et al. Id2 expression during apoptosis and satellite cell activation in unloaded and loaded quail skeletal muscles[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2003,284(2): 540-549.
[3] 刘京升，孙正义，董晓丽. 鼠慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞的凋亡[J].第四军医大学学报，2003,24(3):235-237.
[4] Jejurikar SS, Marcelo CL, Kuzon WM Jr. Skeletal muscle denervation increases satellite cell susceptibility to apoptosis[J]. Plast Reconstr Surg, 2002,110(1):160-168.
[5] Stangel M,Zettl UK,Mix E,et al. H2O2 and nitric oxidemediated oxidative stress induce apoptosis in rat skeletal muscle myoblasts[J].J Neuropathol Exp Neurol,1996,55:36-43.
编辑何扬举
(华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科，湖北 武汉 430022), 百拇医药(王全震，王发斌，洪光祥,康皓)
0引言
周围神经损伤后，失神经肌肉萎缩非常严重，在很大程度上影响了周围神经损伤修复后的功能恢复，因而如何预防或延缓肌萎缩是临床康复医学急需解决的问题. 运动神经元与其靶器官-骨骼肌之间存在相互的营养联系，周围神经损伤后联系中断，运动神经元发生退变死亡，骨骼肌则发生萎缩纤维化. 我们通过靶肌肉注射LNAME检测肌细胞调亡，并探讨细胞凋亡在失神经支配骨骼肌萎缩中可能发挥的作用.
1材料和方法
1.1材料24只SD大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供)雌雄不限，体质量约200 g，随机分为实验组和对照组，每组12只. LNAME(购自Sigma公司)；TUNEL检测凋亡试剂(购自美国Boehringer Mannheim公司)；电子分析天平；TJTY300型图像分析仪.
1.2方法
1.2.1建立臂丛神经损伤模型用10 g/L戊巴比妥钠(30 mg/kg,ip)麻醉后，按文献[1]报道建立臂丛神经损伤模型. 术后多次电生理检测神经肌肉动作电位幅值，证明手术侧肱二头肌始终处于去神经支配状态. 术后实验组肱二头肌多点注射LNAME,总剂量为10 mg/(kg·d)，共10 d；对照组用同样方法注射同等剂量的生理盐水. 术后5 wk测量各指标.
1.2.2臂围与肌肉质量测定在双侧上臂中点测量一次臂围，健侧臂围减去去神经侧臂围得出臂围差. 处死大鼠，自起止点完全切取肱二头肌，迅速置分析天平上称取质量.
1.2.3TUNEL法检测肌细胞凋亡率取上述肱二头肌中段部分用40 g/L的甲醛液固定，常规石蜡包埋切片. 采用TUNEL法检测肌细胞凋亡率，利用图像分析系统在每张切片上随机选取10个视野，计数10个视野的阳性细胞百分率，取其平均数. 统计学分析：所有数据用统计学软件SPSS 12.0处理，计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验，P<0.05为有显著性差别.
2结果
2.1臂围差的比较LNAME治疗组大鼠与对照组比较臂围的减少有明显缓解(P<0.05,表1).
2.2肱二头肌质量的比较LNAME治疗组较对照组有明显提高(P<0.05,表1).
2.3肱二头肌细胞凋亡的比较通过TUNEL法检测实验组和对照组肌肉内细胞凋亡情况，发现对照组细胞凋亡率明显高于实验组(P<0.05,表1).
表1两组各指标结果比较(略)
3讨论
骨骼肌萎缩与肌细胞发生凋亡有关，Always等[2]研究表明Id基因家族在细胞凋亡引起的骨骼肌萎缩中起关键作用；刘京升等[3]发现慢性脊髓压迫的大鼠骨骼肌细胞存在凋亡现象；Jejurikar等[4]发现肌肉除神经支配增加了肌卫星细胞对凋亡的敏感性，这也可能是骨骼肌发生萎缩的一个原因. Stangel等[5]通过在骨骼肌细胞培养液中加入不同浓度的硝普钠(SNAP, NO的供体),结果发现NO对培养的肌细胞有诱导凋亡的作用，并呈剂量依赖性. LNAME是一氧化氮合酶(NOS)竞争性抑制剂，它能有效的抑制NOS的产生，减少NO的合成，从而可能间接的抑制了NO对骨骼肌细胞的毒性作用，减少了肌细胞凋亡的发生率. 本实验通过靶肌肉注射LNAME抑制失神经肌萎缩，结果表明其能降低肌细胞凋亡的发生，较好地缓解骨骼肌失神经后的萎缩，同时证实了失神经肌肉存在凋亡现象并取得了与上述其他学者一致的结论. 但如何从细胞凋亡角度更好地防治骨骼肌的萎缩尚有待进一步研究.
【参考文献】
[1] 王敏，黄象艳，李震,等. 胰岛素生长因子Ⅰ对臂丛神经损伤后骨骼肌细胞凋亡的影响[J].中国矫形外科杂志，2003,11(19，20):1371-1373.
[2] Alway SE, Martyn JK, Ouyang J,et al. Id2 expression during apoptosis and satellite cell activation in unloaded and loaded quail skeletal muscles[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2003,284(2): 540-549.
[3] 刘京升，孙正义，董晓丽. 鼠慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞的凋亡[J].第四军医大学学报，2003,24(3):235-237.
[4] Jejurikar SS, Marcelo CL, Kuzon WM Jr. Skeletal muscle denervation increases satellite cell susceptibility to apoptosis[J]. Plast Reconstr Surg, 2002,110(1):160-168.
[5] Stangel M,Zettl UK,Mix E,et al. H2O2 and nitric oxidemediated oxidative stress induce apoptosis in rat skeletal muscle myoblasts[J].J Neuropathol Exp Neurol,1996,55:36-43.
编辑何扬举
(华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科，湖北 武汉 430022), 百拇医药(王全震，王发斌，洪光祥,康皓)