摘 要 目的: 构建抗mdr1RNA干扰真核表达载体。 方法: 根据Reynolds的设计原则，针对mdr1的序列及二级结构选择了三条靶序列，人工合成三条shRNA序列的编码DNA序列，重组入Pgenesil-1载体中，转化大肠杆菌DH 5α ，碱裂解法提质粒，酶切及测序鉴定。 结果: 用PstI和SalI酶切鉴定质粒Pmdr1sh1、Pmdr1sh2、Pmdr1sh3均符合设计要求，测序证实序列完全正确。 结论: 通过酶切和测序鉴定重组质粒Pmdr1sh1、Pmdr1sh2、Pmdr1sh3插入位点正确，与设计序列一致，预期可用于逆转mdr1所致耐药。

    关键词 mdr1基因;RNA干扰;真核表达载体

    化疗是多种肿瘤治疗的主要方法，然而耐药是化疗失败的常见原因，也是临床亟待解决的问题。多药耐药基因mdr1编码的跨膜糖蛋白P-gp是一个药物外排泵，是化疗耐药的重要机制 [1] ，因而成为研究的热点。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是近年来自然科学界的重要发现，能特异的抑制胞浆mRNA表达，从而下调基因表达，已广泛的用于基因功能及基因治疗研究 [2] 。短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)的发现为RNAi技术的应用提供了更好的方法，shRNA可以利用RNA聚合酶III启动子转录，这使得构建表达RNA干扰的载体，使哺乳动物细胞内基因表达长期沉默成为可能 [3] 。本研究针对mdr1的序列及二级结构设计构建了三条shRNA真核表达载体 ......