薄层扫描法测定喉咽宁口服液中齐墩果酸的含量
作者：张俊雄 黄惠兰 丘桂贤 李东
单位：张俊雄 黄惠兰 丘桂贤(梅州市药品检验所,广东 梅州 514021)；李东(梅州市中医院)
关键词：齐墩果酸；薄层扫描法；成分分析
广东药学院学报000313
摘 要 采用TLC法分离土牛膝中齐墩果酸，供试品在硅胶G薄层板上，以V(环己烷)∶V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)=20∶5∶3为展开剂，显色后，可获得分离清晰的集中斑点，并采用薄层扫描法，建立了一种测定齐墩果酸含量的灵敏、专属性高、可靠的方法。
中图号 R927.2 文献标识码:A
文章编号:1006-8783(2000)03-0204-02
, 百拇医药
喉咽宁口服液是以土牛膝、马兰等四味中药材制成的中药复方制剂。主要用于治疗急性扁桃体炎和急性咽炎，临床疗效好。方中土牛膝为君药、用量大，齐墩果酸为其主要成分之一，其含量测定在药材[1,2]及成药[3]中亦有报导。本文采用TLC法分离土牛膝中齐墩果酸，并采用薄层扫描法，建立了一种灵敏、专属性高、可靠的测定齐墩果酸含量的方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
薄层扫描仪(岛津CS-930型)，定容毛细管(2、3、4、5 μL，美国Drummand公司产)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所提供)，正丁醇、石油醚、氯仿、环己烷、乙酸乙酯等均为AR级试剂，喉咽宁口服液(零陵制药厂)。
1.2 方法与结果
, 百拇医药
1.2.1 扫描波长的选择
取样品测定项下的供试品溶液，去土牛膝阴性空白溶液及齐墩果酸对照品溶液(0.5 mg/ mL)各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，照样品测定项下操作，在370～700 nm范围内进行扫描，得吸收曲线,见图1。样品溶液、对照品溶液在520 nm波长处均有最大吸收，去土牛膝阴性空白液无吸收。故波长选择为λS=520 nm，λR=700 nm，狭缝2 nm×2 nm。
图1 喉咽宁口服液薄层扫描光谱图
A 对照品 B 供试品 C 阴性对照品
2.2 扫描方式
以波长反射法锯齿扫描，λS=520 nm，λR=700 nm，Sx=3，步距=0.5 mm。
, 百拇医药
2.3 线性关系
精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1 mL中含0.5 mg的溶液。精密吸取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，照样品测定项下操作，以点样量为横坐标，以斑点面积积分值为纵坐标，求得回归方程为
Y=10 355.48X-3 999.03，r=0.999 1
结果表明在1.03～4.32 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。
2.4 精密度试验
取同批样品液，点于硅胶G薄层板上，照样品测定下操作。结果见表1。结果表明该实验精密度良好。
表1 精密度试验 A
, 百拇医药
28 244.00
27 207.45
28 850.91
28 323.41
27 989.40
27 662.97
ω/%
0.018 4
0.017 8
0.018 9
0.018 5
0.018 3
, http://www.100md.com
0.018 0
=0.018 3%,RSD=2.11%
2.5 稳定性试验
将显色后薄层板，于室温放置，每隔1 h扫描1次，结果表明3 h内斑点面积积分值基本稳定。
2.6 样品测定
精密量取本品25 mL，置分液漏斗中，加正丁醇提取6次，每次20 mL，合并正丁醇液，减压蒸干，残渣加乙醇30 mL与盐酸3 mL溶解，加热回流1小时后浓缩至无醇味，加水30 mL，转移至分液漏斗中，加石油醚(60～90 ℃)提取6次，每次20 mL，合并石油醚液，蒸干，残留物加无水乙醇微热使溶解，定量转移至5 mL量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[3]试验，吸取供试品溶液3 μL与6 μL，对照品溶液2 μL和4 μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以V(环己烷)∶V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)=20∶5∶8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以φ=10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘5～7 min至斑点清晰(图2)取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照色谱法进行扫描，测得样品中齐墩果酸含量，每批样品均点样3次，3次测定结果见表2。
, 百拇医药
图2 喉咽宁口服液TLC图
1 供试品 2 对照品 3 阴性对照品 A 齐墩果酸
表2 样品测定结果(n=3) 批 号
ω/%
RSD/%/%
980915
0.016 7
2.1
980623
0.015 0
, http://www.100md.com 1.9
980904
0.016 1
1.8
0.0149
980824
0.013 4
2.2
980914
0.013 1
2.1
2.7 加样回收率试验
精密量取已测得含量的样品25 mL，定量加入齐墩果酸对照品，制成供试品溶液，按样品测定项下条件测定，测定结果见表3。表3 加样回收测定 (n=6) NO
, http://www.100md.com
ρ(加入量)/
(μg.mL-1)
ρ(测得量)/
(μg.mL-1)
回收率/%
1
1.539
1.564
101.6
2
1.539
1.567
, 百拇医药
101.8
3
1.539
1.567
101.8
4
9.234
9.432
102.1
5
10.260
10.461
102.0
, 百拇医药
6
4.104
4.273
104.1
平均回收率=102.3%,RSD=0.9%
3 讨论
该制剂成分较复杂，提取是关键。实验中采用正丁醇提取后，酸化，再石油醚提取，使得样品较纯，薄层展开后斑点清晰，界线明显，不拖尾，本法测定喉咽宁口服液中齐墩果酸的含量，结果准确，重复性好，对该口服液的质量控制有实际意义。
参考文献
[1]吕曙光.中药女贞子中齐墩果酸熊果酸的高效液相分析[J].药物分析杂志，1993，13(5)：291.
[2]荣勇.双波长薄层扫描法测定女贞子中齐墩果酸的含量[J].中国中药杂志，1989，14(11)：41.
[3]中国药典(一九九五年版一部)[S].1995.附录35.
(收稿日期 2000-07-04), 百拇医药
单位：张俊雄 黄惠兰 丘桂贤(梅州市药品检验所,广东 梅州 514021)；李东(梅州市中医院)
关键词：齐墩果酸；薄层扫描法；成分分析
广东药学院学报000313
摘 要 采用TLC法分离土牛膝中齐墩果酸，供试品在硅胶G薄层板上，以V(环己烷)∶V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)=20∶5∶3为展开剂，显色后，可获得分离清晰的集中斑点，并采用薄层扫描法，建立了一种测定齐墩果酸含量的灵敏、专属性高、可靠的方法。
中图号 R927.2 文献标识码:A
文章编号:1006-8783(2000)03-0204-02
, 百拇医药
喉咽宁口服液是以土牛膝、马兰等四味中药材制成的中药复方制剂。主要用于治疗急性扁桃体炎和急性咽炎，临床疗效好。方中土牛膝为君药、用量大，齐墩果酸为其主要成分之一，其含量测定在药材[1,2]及成药[3]中亦有报导。本文采用TLC法分离土牛膝中齐墩果酸，并采用薄层扫描法，建立了一种灵敏、专属性高、可靠的测定齐墩果酸含量的方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
薄层扫描仪(岛津CS-930型)，定容毛细管(2、3、4、5 μL，美国Drummand公司产)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所提供)，正丁醇、石油醚、氯仿、环己烷、乙酸乙酯等均为AR级试剂，喉咽宁口服液(零陵制药厂)。
1.2 方法与结果
, 百拇医药
1.2.1 扫描波长的选择
取样品测定项下的供试品溶液，去土牛膝阴性空白溶液及齐墩果酸对照品溶液(0.5 mg/ mL)各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，照样品测定项下操作，在370～700 nm范围内进行扫描，得吸收曲线,见图1。样品溶液、对照品溶液在520 nm波长处均有最大吸收，去土牛膝阴性空白液无吸收。故波长选择为λS=520 nm，λR=700 nm，狭缝2 nm×2 nm。
图1 喉咽宁口服液薄层扫描光谱图
A 对照品 B 供试品 C 阴性对照品
2.2 扫描方式
以波长反射法锯齿扫描，λS=520 nm，λR=700 nm，Sx=3，步距=0.5 mm。
, 百拇医药
2.3 线性关系
精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1 mL中含0.5 mg的溶液。精密吸取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，照样品测定项下操作，以点样量为横坐标，以斑点面积积分值为纵坐标，求得回归方程为
Y=10 355.48X-3 999.03，r=0.999 1
结果表明在1.03～4.32 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。
2.4 精密度试验
取同批样品液，点于硅胶G薄层板上，照样品测定下操作。结果见表1。结果表明该实验精密度良好。
表1 精密度试验 A
, 百拇医药
28 244.00
27 207.45
28 850.91
28 323.41
27 989.40
27 662.97
ω/%
0.018 4
0.017 8
0.018 9
0.018 5
0.018 3
, http://www.100md.com
0.018 0
=0.018 3%,RSD=2.11%2.5 稳定性试验
将显色后薄层板，于室温放置，每隔1 h扫描1次，结果表明3 h内斑点面积积分值基本稳定。
2.6 样品测定
精密量取本品25 mL，置分液漏斗中，加正丁醇提取6次，每次20 mL，合并正丁醇液，减压蒸干，残渣加乙醇30 mL与盐酸3 mL溶解，加热回流1小时后浓缩至无醇味，加水30 mL，转移至分液漏斗中，加石油醚(60～90 ℃)提取6次，每次20 mL，合并石油醚液，蒸干，残留物加无水乙醇微热使溶解，定量转移至5 mL量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[3]试验，吸取供试品溶液3 μL与6 μL，对照品溶液2 μL和4 μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以V(环己烷)∶V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)=20∶5∶8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以φ=10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘5～7 min至斑点清晰(图2)取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照色谱法进行扫描，测得样品中齐墩果酸含量，每批样品均点样3次，3次测定结果见表2。
, 百拇医药
图2 喉咽宁口服液TLC图
1 供试品 2 对照品 3 阴性对照品 A 齐墩果酸
表2 样品测定结果(n=3) 批 号
ω/%
RSD/%
/%980915
0.016 7
2.1
980623
0.015 0
, http://www.100md.com 1.9
980904
0.016 1
1.8
0.0149
980824
0.013 4
2.2
980914
0.013 1
2.1
2.7 加样回收率试验
精密量取已测得含量的样品25 mL，定量加入齐墩果酸对照品，制成供试品溶液，按样品测定项下条件测定，测定结果见表3。表3 加样回收测定 (n=6) NO
, http://www.100md.com
ρ(加入量)/
(μg.mL-1)
ρ(测得量)/
(μg.mL-1)
回收率/%
1
1.539
1.564
101.6
2
1.539
1.567
, 百拇医药
101.8
3
1.539
1.567
101.8
4
9.234
9.432
102.1
5
10.260
10.461
102.0
, 百拇医药
6
4.104
4.273
104.1
平均回收率=102.3%,RSD=0.9%
3 讨论
该制剂成分较复杂，提取是关键。实验中采用正丁醇提取后，酸化，再石油醚提取，使得样品较纯，薄层展开后斑点清晰，界线明显，不拖尾，本法测定喉咽宁口服液中齐墩果酸的含量，结果准确，重复性好，对该口服液的质量控制有实际意义。
参考文献
[1]吕曙光.中药女贞子中齐墩果酸熊果酸的高效液相分析[J].药物分析杂志，1993，13(5)：291.
[2]荣勇.双波长薄层扫描法测定女贞子中齐墩果酸的含量[J].中国中药杂志，1989，14(11)：41.
[3]中国药典(一九九五年版一部)[S].1995.附录35.
(收稿日期 2000-07-04), 百拇医药