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编号:10976659
nestin蛋白的克隆表达、抗体制备及免疫组化分析
http://www.100md.com 《南方医科大学学报》 2006年第2期
nestin,,nestin;分子克隆;原核表达;抗体;免疫组织化学摘要目的,在原核系统中克隆表达并纯化nestin蛋白,制备特异性nestin抗体,用于研究nestin在中枢神经系统发育中的生
     关键词:nestin;分子克隆;原核表达;抗体;免疫组织化学

    摘要:目的 在原核系统中克隆表达并纯化nestin蛋白,制备特异性nestin抗体,用于研究nestin在中枢神经系统发育中的生物学特性,探索神经发育及再生规律。方法 采用RT-PCR方法由人神经干细胞中获取nestin cDNA,与原核表达载体pQE30连接,构建重组载体pQE30-nestin。测序后,将重组质粒转入大肠杆菌M15,IPTG诱导表达His融合蛋白。Ni-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定。用此蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。Western Blot、ELISA和免疫组织化学分析鉴定获取的抗血清。结果 成功由人神经干细胞中克隆nestin cDNA片段。IPTG诱导重组质粒pQE30-nestin表达出一相对分子质量约25 000的His融合蛋白并被Ni-NTA成功纯化,Western Blot 证明其确为nestin蛋白。动物免疫后,经Western blot、ELISA和免疫组化鉴定,获得的抗血清可特异性结合重组nestin蛋白、发育期人及大鼠脑内的nestin蛋白。 结论 获得了重组人nestin蛋白,制备的抗血清不仅可识别重组nestin蛋白,亦可识别人及大鼠脑组织内的nestin蛋白。

    Gene cloning, expression, and antibody preparation of nestin with immunohistochemical analysis

    CHEN Xin-lin1, 2, LIU Yong1, 2, XIAO Xin-li1, 2, ZHANG Jin1, 2, Lv Hai-xia3, ZHANG Peng-bo1, 3, LIU Jian-xin1, 2, ZHAO Jian-jun1, 2

    1Research Center for Neuroscience, 2Key Laboratory of Environment and Genes Related to Diseases of Ministry of Education, Medical School of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China; 3Second Hospital, Medical School of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710004, China ......

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