大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及GFP转染标记
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王亭忠; 马爱群; 蒋文慧; 徐正云; 席雨涛;
大鼠;骨髓间充质干细胞;培养;绿色荧光蛋白;转染;
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王亭忠; 马爱群; 蒋文慧; 徐正云; 席雨涛;
西安交通大学第一医院心内科教育部环境与疾病相关基因重点实验室; 陕西西安;
【关键词】
大鼠; 骨髓间充质干细胞; 培养; 绿色荧光蛋白; 转染;
【发表年期页】
2005,6; 431-434
【摘要】
目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养方法,检测绿色荧光蛋白基因转染MSCs的瞬时表达及转染效率。方法应用Percoll密度梯度离心法分离大鼠MSCs,贴壁法不断纯化,流式细胞仪检测2代细胞表面CD34、CD71和CD90的表达,然后用pEGFP-N3与Lipofectamine 2000不同浓度比例转染MSCs,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率。结果①原代MSCs多呈纺锤形或梭形,有聚集生长的倾向,多3~5个细胞成为一个集落。传代后,细胞变为形态均一的排列有序的成纤维细胞样,长梭形,胞浆突起较少,胞体轮廓不甚清晰,胞体也相对较大;②GFP转染后24 h即可见绿色荧光蛋白表达,72 h表达最强,此后逐渐减弱,到4周时仍可见少量表达;③转染效率与质粒和脂质体的浓度比例有关,1∶2到1∶3最高。结论利用Percoll密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;GFP转染是一种较好的MSCs标记方法。
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