高效液相色谱法测定癣立净涂膜剂中苦参碱的含量
摘 要 目的：建立HPLC法测定癣立净涂膜剂中苦参碱的含量。方法：采用中性氧化铝柱层分离提取，HPLC法测定色谱条件以HP ODS Hypersil柱为固定相，ψ(乙腈∶001 mol/L磷酸水溶液∶无水乙醇)=8∶1∶1为流动相，检测波长205 nm,流速08 mL/min，柱温∶室温。结果：在079～395μg范围内有良好的线性关系，平均回收率为9921%(n=5),RSD=1.21%。结论：本方法简便，准确，重现性好，可作为本品的质量控制方法。
关键词 癣立净涂膜剂；苦参碱；高效液相色谱法
癣立净涂膜剂是由苦参、黄柏、土荆皮等药提取分离有效部位，与适宜的成膜材料配制而成的中药复方涂膜剂。具有清热燥湿、杀菌止痒之功效。该药经临床85例应用疗效可靠，总有效率达9383%，有关制备和临床应用情况另文发表[1]。方中苦参为君药，为确保制剂质量，建立了苦参碱的HPLC含量测定法，该法简便，准确，灵敏度高。
1 仪器与试药
11 仪器
HP-1100高效液相色谱议，DAD检测器(二极管阵列检测器)，四元梯度泵，HP-chemistation数据处理系统(美国惠普公司)，100Syringe滤过器(022μm，德国)。
12 药品与试剂
苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：0805-9908)，癣立净涂膜剂(自制)，乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
21 色谱条件
HP ODS Hypersil柱(4 cm×25 cm,5μm)；流动相：ψ(乙腈∶001mol/L磷酸水溶液∶无水乙醇)=8∶1∶1；柱温室温，流速08 mL/min，检测波长205 nm，理论塔板数按苦参碱峰计算不低于1500。在以上色谱条件下，苦参碱色谱峰保留时间约为85 min,空白在此无干扰。
22 标准曲线的制备
精密称取苦参碱对照品适量，加ψ(乙腈∶无水乙醇)=8∶1制成0395 mg/mL的溶液。精密称取此溶液2、4、6、8、10μL进样，得峰面积(y)与对照品进样量(x)回归方程为：y=53360.16+5508.45,r=0.9998。表明苦参碱在079～395μg之间呈良好的线性关系。
23 供试品溶液、阴性对照溶液的制备
精密吸取癣立净涂膜剂5 mL，水浴挥干，加蒸馏水适量混悬，加2 mL氨水，用氯仿萃取3次(10 mL,5 mL,5 mL)，合并氯仿液，通过氧化铝柱(1 cm×9 cm，填充中性氧化铝5 cm长)，先用10 mL氯仿洗脱，再用10 mLψ(氯仿∶甲醇)=7∶3洗脱。合并洗脱液，挥出溶剂，残留物用ψ(乙腈∶无水乙醇)8∶1溶解并定容至5 mL，作为供品溶液。另取缺苦参的阴性模拟制剂5 mL，同法制成阴性对照溶液。
24 精密度和重现性试验
准确吸取对照品溶液6μL，重复进样6次，RSD为085%；取同一批样品，分别于不同时间，由不同操作者测定，RSD为235%。
25 稳定性试验
精密吸取新配制的供试品溶液，每1d进样一次，依法测定，结果RSD为143%(n=6)，表明供试品溶液制备后6h内基本稳定。
26 回收率试验
在缺苦参阴性模拟制剂中，分别加入一定量的苦参碱对照品，照供试品溶液制备方法操作，得阴性加样液。吸取10μL进样，测定，计算回收率，结果见表1。
表1 回收率试验序号 (略)
27 样品含量测定
自动进样供试品溶液10μL，按上述条件测定样品中苦参碱的峰面积，计算含量，结果见表2。
表2 样品中苦参碱的含量测定编号 (略)
3 讨论
31 本品为中药复方制剂，药物成分复杂，根据文献[2，3]采用中性氧化铝柱层析，可除去大量杂质，结果色谱清晰，无杂质干扰。
32 根据以上样品含量测定结果，暂定本品每1 mL含苦参碱不得少于025 mg。
参考文献
[1]林志云，王利胜，王思鸿癣立净涂膜剂的制备与临床应用[J]. 时珍国医国药，2000(7)：
[2]金莉霞，崔燕岩，章观德苦参生物碱的高效液相法测定[J]药学学报，1993，28(2)：136
[3]路玖，黄雪梅，谢东HPLC测定桂林西瓜霜喷剂中苦参碱的含量[J]华西药学杂志，2001，16(1)：76
(1广东药学院生药学教研室，广东 广州 510224；2广州中医药大学，广州 510405), 百拇医药(林志云 王利胜)
关键词 癣立净涂膜剂；苦参碱；高效液相色谱法
癣立净涂膜剂是由苦参、黄柏、土荆皮等药提取分离有效部位，与适宜的成膜材料配制而成的中药复方涂膜剂。具有清热燥湿、杀菌止痒之功效。该药经临床85例应用疗效可靠，总有效率达9383%，有关制备和临床应用情况另文发表[1]。方中苦参为君药，为确保制剂质量，建立了苦参碱的HPLC含量测定法，该法简便，准确，灵敏度高。
1 仪器与试药
11 仪器
HP-1100高效液相色谱议，DAD检测器(二极管阵列检测器)，四元梯度泵，HP-chemistation数据处理系统(美国惠普公司)，100Syringe滤过器(022μm，德国)。
12 药品与试剂
苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：0805-9908)，癣立净涂膜剂(自制)，乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
21 色谱条件
HP ODS Hypersil柱(4 cm×25 cm,5μm)；流动相：ψ(乙腈∶001mol/L磷酸水溶液∶无水乙醇)=8∶1∶1；柱温室温，流速08 mL/min，检测波长205 nm，理论塔板数按苦参碱峰计算不低于1500。在以上色谱条件下，苦参碱色谱峰保留时间约为85 min,空白在此无干扰。
22 标准曲线的制备
精密称取苦参碱对照品适量，加ψ(乙腈∶无水乙醇)=8∶1制成0395 mg/mL的溶液。精密称取此溶液2、4、6、8、10μL进样，得峰面积(y)与对照品进样量(x)回归方程为：y=53360.16+5508.45,r=0.9998。表明苦参碱在079～395μg之间呈良好的线性关系。
23 供试品溶液、阴性对照溶液的制备
精密吸取癣立净涂膜剂5 mL，水浴挥干，加蒸馏水适量混悬，加2 mL氨水，用氯仿萃取3次(10 mL,5 mL,5 mL)，合并氯仿液，通过氧化铝柱(1 cm×9 cm，填充中性氧化铝5 cm长)，先用10 mL氯仿洗脱，再用10 mLψ(氯仿∶甲醇)=7∶3洗脱。合并洗脱液，挥出溶剂，残留物用ψ(乙腈∶无水乙醇)8∶1溶解并定容至5 mL，作为供品溶液。另取缺苦参的阴性模拟制剂5 mL，同法制成阴性对照溶液。
24 精密度和重现性试验
准确吸取对照品溶液6μL，重复进样6次，RSD为085%；取同一批样品，分别于不同时间，由不同操作者测定，RSD为235%。
25 稳定性试验
精密吸取新配制的供试品溶液，每1d进样一次，依法测定，结果RSD为143%(n=6)，表明供试品溶液制备后6h内基本稳定。
26 回收率试验
在缺苦参阴性模拟制剂中，分别加入一定量的苦参碱对照品，照供试品溶液制备方法操作，得阴性加样液。吸取10μL进样，测定，计算回收率，结果见表1。
表1 回收率试验序号 (略)
27 样品含量测定
自动进样供试品溶液10μL，按上述条件测定样品中苦参碱的峰面积，计算含量，结果见表2。
表2 样品中苦参碱的含量测定编号 (略)
3 讨论
31 本品为中药复方制剂，药物成分复杂，根据文献[2，3]采用中性氧化铝柱层析，可除去大量杂质，结果色谱清晰，无杂质干扰。
32 根据以上样品含量测定结果，暂定本品每1 mL含苦参碱不得少于025 mg。
参考文献
[1]林志云，王利胜，王思鸿癣立净涂膜剂的制备与临床应用[J]. 时珍国医国药，2000(7)：
[2]金莉霞，崔燕岩，章观德苦参生物碱的高效液相法测定[J]药学学报，1993，28(2)：136
[3]路玖，黄雪梅，谢东HPLC测定桂林西瓜霜喷剂中苦参碱的含量[J]华西药学杂志，2001，16(1)：76
(1广东药学院生药学教研室，广东 广州 510224；2广州中医药大学，广州 510405), 百拇医药(林志云 王利胜)