铜离子选择性微电极用于银杏根尖离子流的时空监测
摘 要
通过在超细铜丝尖端(直径约为16μm)电沉积硒化铜薄膜的方法制备了全固型铜离子选择性微电极，研究了它对铜离子的能斯特响应，包括选择性、检出限和响应时间等参数；使用该电极检测到银杏(Gingko)根尖表面的铜离子时空流，并首次发现Gingko根细胞对Cu2+摄取具有振荡性。
关键词 微电极，硒化铜，离子流，银杏
Fabrication of Cu/CuSe Microelectrode for Detecting Temporal and Spatial Localization of Copper(Ⅱ) Fluxes along Gingko Roots
Fang Cheng1,Li Jianping1,Gu Haining2
(Department of Materials and Chemistry Engineering，Guilin University of Technology，Guilin 541004)
(Department ofChemistry, Zhejiang University,Hangzhou 310028)
Abstract A solidstated Cu/CuSe microelectrode was prepared by cathodic deposition of selenium in Na2SeO3 and subsequent formation of a thin layer of CuSe on a copper wire 16 μm in diameter. The microelectrode exhibited a good linear response of 29.8 mV/decade for Cu2+ within the concentration ranges of 10-3-10-6 mol/L; good selectivity, a short response time (<2 s) and a low detection limit (1×10-6 mol/L). The dimensions and response time allowed use of this electrode in the measuring influxes as well as effluxes of Cu2+ in Gingkoroots. Copper (Ⅱ) fluxes showed marked spatial and temporal features and exhibited an oscillatory pattern in time.
Keywords:Microelectrode，copperselenide，ion fluxes，Gingko
1 引 言
生物的生长和适应环境的能力受制于它们对营养物质摄取和代谢废物排放过程的控制能力。细胞膜传输系统是以上两个过程的中心环节，植物细胞表面离子流\[1\]是这种过程的一种具体体现。目前，研究细胞膜离子传输机理的几种方法各具特色：放射标记法方法简便，但时间分辨力差\[2\]，限制了其在细胞快速应答过程机制研究中的应用；膜片钳技术是研究离子传输过程的经典方法，但一般仅适用于巨型的球形细胞体\[3\]；近年来荧光显微成像技术日益普及，但是荧光染料的种类有限，目前能测定的离子仅限于H+和Ca2+\[4\]；液膜离子选择电极曾用于生物体系中离子\[5\]的测定，但由于其制备复杂，噪声大，响应慢，敏感膜易被毒化，且难于制成微电极的特点\[6\]，在细胞膜传输机理研究方面极少使用。
铜是公认的植物必需的7种微量元素之一，是多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶、漆酶和细胞色素氧化酶的组成成分；也是光合电子传递链中的电子传递体质蓝素的组成成分\[7\]。铜主要是以离子态通过交换吸附到根细胞表面，然后通过主动运输或被动运输进入细胞内。植物吸收离子的主要部位是位于根的成熟区\[8\]。监测根尖的Cu2+流轮廓将有助于了解根吸收Cu2+的生理过程。本实验用电沉积硒化铜薄膜的方法\[9\]，成功地研制了全固型Cu2+选择性微电极。该电极尺寸小，响应范围宽、响应时间短。使用该电极对银杏根尖Cu2+释放进行检测，首次观测到Cu2+的时空流量及其振荡现象。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
微电极定位和电位测量在CHI900A型扫描电化学显微镜(CH Instruments Inc.，Austin，TX)上进行；参比电极为Ag/AgCl电极；XS212103型生物显微镜，自配数码相机；JSM6460型电子显微镜(日本电子株式会社)；PHI 5500 ESCA系统(美国Perkin Elmer公司) 。Cu2+标准液：50μmol/L。实验中使用的其他试剂均用分析纯试剂配制，实验用水为去离子水。所有测定均在室温(24~26℃)下进行。
2.2 全固型Cu2+选择性微电极制作
如图1所示，将直径50 μm的细铜丝摆放在印制石墨电极的一端上，露出约1 cm，用掺杂碳粉的导电胶粘连上面的一端，然后覆盖透明胶带将铜丝与石墨层粘附在一起，露出的石墨部分用作电极接头。将细铜丝的露出端部分用2 V交流电进行刻蚀，然后涂覆绝缘漆，待漆干后在生物显微镜下用锋利刀片将细铜丝尖端切成整齐的端口，根据光学显微数码照片(×1600倍)估计微电极尖端直径约为16 μm，该尺寸与细胞直径相当。置入Na2SeO3H2SO4溶液中恒电位电解得到CuSe薄膜。
2.3 实验材料
从7年生的银杏树干部截取12～15 cm长的当年生新枝，将其插入3600 mg/L的3吲哚基丁酸钾盐(KIBA：3indolebutyric acid potassium salt) 5 cm深处，并保持5 s。然后插入珍珠岩土壤中，放入较高湿度(90%左右)，平均日间和夜间温度分别为22℃和15℃的温室中培育8星期使其生根。挑选2～3 cm长，1～2 mm粗的须根，洗净表面土壤。实验前将其全部浸入空气饱和的营养液中，营养液：KCl 1.0 mol/L, NaH2PO4 0.905 mol/L,Na2HPO4 0.048 mol/L, Ca(NO3)2 1.0 mol/L,MgSO4 0.25 mol/L。保持液温25±1℃，弱光照。
图1 粘连细铜丝的印制石墨电极图(略)
Fig.1Schematic representation of screenprinting graphite electrode with copper wire
2.4 实验方法
图2为用于测定Cu2+时空流的电极系统。取培养的银杏须根，用凡士林将其固定在盖玻片上，并使须根的上表面大致与底面水平，
图2 Cu2+流监测系统示意图(略)
Fig.2 Schematic representationof the system for the monitor of copper cation fluxes
将盖玻片水平放入测定池(d)中。小心滴加10 μmol/L Cu(NO3)250 μmol/L Ca(NO3)2混合液，并将其完全没入约0.5 cm。Cu2+选择微电极(a)垂直于根(c)固定于CHI900的微动控制器上。结合探针接近曲线(PAC)和扫描电化学显微镜(SECM)方法，测定银杏根的轴向和径向Cu2+的电位响应值。
3 结果与讨论
3.1微电极的表征
图3a是微电极表面的X射线光电子能谱。由图3可以看出含有Cu2p(932,953 eV)和Se3d(55 eV)峰； X射线衍射谱(图3b)与粉末衍射标准联合会(JCPDS)的JCPDS 6427相吻合，CuSe颗粒为立方晶系，三个峰分别对应于(111)、(220)和(311)面的衍射作用。沉积CuSe后电极的SEM(图3c)，可以发现CuSe晶体颗粒成片状分布。
图3 微电极表面的表征(略)
Fig.3 Characterizationof microelectrode surface
3.2 CuSe膜制备条件
微电极的直径影响SECM的分辨率及电位测量的精度和准确性。若电极直径大于细胞直径(几十μm)则定位不准确；而直径过小，电极响应的斜率降低，并且电位测量的误差增大，同时膜的稳定性变差。因此，实验中将电极直径控制在约15~20 μm。采用电化学氧化法制备硒化铜薄膜时，膜厚度由电沉积时间控制。一般地，膜越薄，所得电极的电位响应就越迅速，有利于Cu2+流产生过程的快速监测;但膜太薄电极响应的稳定性会变差。此外，溶液pH值在电沉积过程中有较大的影响，pH过高CuSe膜稳定性差，易脱落；过低则不易电沉积上。经多次实验，确定最优电沉积条件为：沉积液浓度0.1 mol/L Na2SeO3，用H2SO4调节pH到6；沉积时间50 s，沉积电位为-1.0 V。
3.3微电极对Cu2+的响应和响应时间
在pH 5～9范围内，电极响应值无变化。考虑到溶液条件尽可能与植物生理环境相接近，并减少加入缓冲溶液对银杏根的人为影响。因此，监测银杏根过程中选用50μmol/L Ca(NO3)2的背景溶液。
配制系列10-7～10-3 mol/L的Cu(NO3)2标准溶液，背景溶液为50μmol/L Ca(NO3)2，按下式组成测量电池： Ag，AgCl(s)|KCl(saturated)‖Cu2+|CuSe(s)，Cu。在25℃室温下进行测试，结果见图4，校正曲线为E=-29.8lgCCu2++62.4，线性相关系数r=0.9987，检出限为1.0×10-6 mol/L。曲线中每个点为平行3次测定所得到的平均值，计算每个浓度点的相对标准偏差，除lgCCu2+=6~7的点外，其余各点的相对标准偏差均<2%(如图4)。微电极连续使用4 h后，电极响应斜率变化约为5%～7%。因此，电极适合于一次性使用。
将Cu/CuSe电极插入10 μmol/L Ca(NO3)2溶液中并充分搅拌溶液，待电极电位达平衡后，滴加一定量的1×10-3 mol/L Cu(NO3)2溶液，电极电位随Cu2+浓度增加而改变的趋势如图5所示。从图可以看出微电极的响应时间约为1s。
图4 Cu/CuSe微电极的校正曲线(略)
Fig.4 Calibration curve for the Cu/CuSe microelectrode
图5 Cu/CuSe微电极的响应时间(略)
Fig.5 Response time for Cu/CuSe microelectrode
3.4 电极的选择性系数
固定干扰离子浓度为10-3mol/L，采用分别溶液法测定选择性系数，测试结果见表1。可以看出电极对一价阳离子的选择性普遍较好，对二价阳离子的选择性系数也在10-2～10-4之间。
图6银杏根尖的Cu2+流轮廓(略)
Fig.6 The Cu2+ fluxesprofile along the roots of Gingko.
表1 几种阳离子的选择性系数(略)
Table 1 Selectivitiy coefficient of various cations
3.5 银杏根尖Cu2+流时空监测
Cu2+流速的计算用Fick′s第一定理：J=D(C1-C2)/Δx，J是离子流速(单位：mol·cm-2s-1)，D是Cu2+的扩散系数，取7.2×10-6cm-2s-1，C1、C2是两个测定位置处的离子活度，Δx是两个测定点之间的距离(单位：cm)。测定得到的离子流速轮廓如图6所示,图中箭头指示Cu2+流动方向，箭头指向根表面表示Cu2+流入。从图可以看出距根尖1.5 ~ 2 mm处Cu2+浓度明显高于其他部位，同时距根尖0~100 μm处的Cu2+流极其微弱，2 mm后的末梢Cu2+流量迅速下降，Cu2+流入和流出量随空间交替变化。该Cu2+的离子流轮廓类似于Cd2+\[1\]。银杏根浸泡在10 μmol/L Cu(NO3)2和50 μmol/L Ca(NO3)2混合溶液中，静置10 min后根摄入Cu2+趋于平衡，图7显示了稳定Cu2+梯度下距根尖2 mm处根表面铜流量与根细胞距离的关系。银杏根细胞对Cu2+摄取具有振荡性，图8表明Cu2+流出过程至少有两个振荡周期：85 min和7 min，可以假定慢过程对应于Cu2+被动传输行为，快过程对应能量相关机制的正常涨落现象，Cu2+摄取的详细机制尚待进一步研究。这种现象与文献报道的H+、Ca2+和K+的离子流\[10, 11\]相类似。
图7 银杏根细胞垂直方向微区Cu2+浓度(略)
Fig.7 Local copper(Ⅱ) concentration as a function of the distance from a root cell of Gingko.
图8 距银杏根尖2 mm处Cu2+流的振荡行为(略)
Fig.8 Oscillatory behaviour of Cu2+ flux around the region 2 mm from the root apex of Gingko.
3.6 小结
本实验研制的全固型Cu2+选择性微电极尺寸小，响应快，适合于Cu2+的微区、在线和连续监测。使用该微电极首次获得的银杏根尖Cu2+流轮廓，并得到根尖表面Cu2+摄取过程存在两个振荡周期，慢过程对应于Cu2+被动传输行为，快过程对应能量依赖机制的正常涨落现象。但Cu2+摄取的详细机制尚待进一步研究。
References
1Pineros M A，Shaff J E，Kochian L V. Plant Physiol., 1998, 116:1393~1401
2Soupene E，He L，Yan D，Kustu S. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95:7030~7034
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6Lindner E，Buck R P. Anal. Chem., 2000, 72: 336A~345A
7Wang Jingguo(王敬国). Chemistry of Nutritional Elements in Soil(植物营养元素的土壤化学). Beijing(北京)：Beijing Agriculture University Press(北京农业大学出版社), 1995:3
8Brooks R R. Plants that Hyperaccumulate Heavy Metals. Wallingford: CAB, International, 1998:110
9Neshkova M. Cu2+ Electrode Function Dependence on the Membrane Composition for SelenideBased all SolidState Copper IonSelective Electrodes. In: Pungor E(ed) Proc Ionselective electrodes 5. Matrafured, Hungary, 1988: 503
10Tegg R S, Melian L, Wilson C R, Shabala S N. Plant Cell Physiol., 2005, 46(4): 638~648
11Demidchik V, Shabala S N, Coutts K B, Tester M A, Davies J M. J. Cell Sci., 2003, 116(1): 81~88
桂林工学院材料与化学工程系，桂林 541004
浙江大学化学系，杭州 310028
本文系广西教育厅科研基金资助项目(No.桂科教2004[2]02), http://www.100md.com(方成 李建平 顾海宁)
通过在超细铜丝尖端(直径约为16μm)电沉积硒化铜薄膜的方法制备了全固型铜离子选择性微电极，研究了它对铜离子的能斯特响应，包括选择性、检出限和响应时间等参数；使用该电极检测到银杏(Gingko)根尖表面的铜离子时空流，并首次发现Gingko根细胞对Cu2+摄取具有振荡性。
关键词 微电极，硒化铜，离子流，银杏
Fabrication of Cu/CuSe Microelectrode for Detecting Temporal and Spatial Localization of Copper(Ⅱ) Fluxes along Gingko Roots
Fang Cheng1,Li Jianping1,Gu Haining2
(Department of Materials and Chemistry Engineering，Guilin University of Technology，Guilin 541004)
(Department ofChemistry, Zhejiang University,Hangzhou 310028)
Abstract A solidstated Cu/CuSe microelectrode was prepared by cathodic deposition of selenium in Na2SeO3 and subsequent formation of a thin layer of CuSe on a copper wire 16 μm in diameter. The microelectrode exhibited a good linear response of 29.8 mV/decade for Cu2+ within the concentration ranges of 10-3-10-6 mol/L; good selectivity, a short response time (<2 s) and a low detection limit (1×10-6 mol/L). The dimensions and response time allowed use of this electrode in the measuring influxes as well as effluxes of Cu2+ in Gingkoroots. Copper (Ⅱ) fluxes showed marked spatial and temporal features and exhibited an oscillatory pattern in time.
Keywords:Microelectrode，copperselenide，ion fluxes，Gingko
1 引 言
生物的生长和适应环境的能力受制于它们对营养物质摄取和代谢废物排放过程的控制能力。细胞膜传输系统是以上两个过程的中心环节，植物细胞表面离子流\[1\]是这种过程的一种具体体现。目前，研究细胞膜离子传输机理的几种方法各具特色：放射标记法方法简便，但时间分辨力差\[2\]，限制了其在细胞快速应答过程机制研究中的应用；膜片钳技术是研究离子传输过程的经典方法，但一般仅适用于巨型的球形细胞体\[3\]；近年来荧光显微成像技术日益普及，但是荧光染料的种类有限，目前能测定的离子仅限于H+和Ca2+\[4\]；液膜离子选择电极曾用于生物体系中离子\[5\]的测定，但由于其制备复杂，噪声大，响应慢，敏感膜易被毒化，且难于制成微电极的特点\[6\]，在细胞膜传输机理研究方面极少使用。
铜是公认的植物必需的7种微量元素之一，是多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶、漆酶和细胞色素氧化酶的组成成分；也是光合电子传递链中的电子传递体质蓝素的组成成分\[7\]。铜主要是以离子态通过交换吸附到根细胞表面，然后通过主动运输或被动运输进入细胞内。植物吸收离子的主要部位是位于根的成熟区\[8\]。监测根尖的Cu2+流轮廓将有助于了解根吸收Cu2+的生理过程。本实验用电沉积硒化铜薄膜的方法\[9\]，成功地研制了全固型Cu2+选择性微电极。该电极尺寸小，响应范围宽、响应时间短。使用该电极对银杏根尖Cu2+释放进行检测，首次观测到Cu2+的时空流量及其振荡现象。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
微电极定位和电位测量在CHI900A型扫描电化学显微镜(CH Instruments Inc.，Austin，TX)上进行；参比电极为Ag/AgCl电极；XS212103型生物显微镜，自配数码相机；JSM6460型电子显微镜(日本电子株式会社)；PHI 5500 ESCA系统(美国Perkin Elmer公司) 。Cu2+标准液：50μmol/L。实验中使用的其他试剂均用分析纯试剂配制，实验用水为去离子水。所有测定均在室温(24~26℃)下进行。
2.2 全固型Cu2+选择性微电极制作
如图1所示，将直径50 μm的细铜丝摆放在印制石墨电极的一端上，露出约1 cm，用掺杂碳粉的导电胶粘连上面的一端，然后覆盖透明胶带将铜丝与石墨层粘附在一起，露出的石墨部分用作电极接头。将细铜丝的露出端部分用2 V交流电进行刻蚀，然后涂覆绝缘漆，待漆干后在生物显微镜下用锋利刀片将细铜丝尖端切成整齐的端口，根据光学显微数码照片(×1600倍)估计微电极尖端直径约为16 μm，该尺寸与细胞直径相当。置入Na2SeO3H2SO4溶液中恒电位电解得到CuSe薄膜。
2.3 实验材料
从7年生的银杏树干部截取12～15 cm长的当年生新枝，将其插入3600 mg/L的3吲哚基丁酸钾盐(KIBA：3indolebutyric acid potassium salt) 5 cm深处，并保持5 s。然后插入珍珠岩土壤中，放入较高湿度(90%左右)，平均日间和夜间温度分别为22℃和15℃的温室中培育8星期使其生根。挑选2～3 cm长，1～2 mm粗的须根，洗净表面土壤。实验前将其全部浸入空气饱和的营养液中，营养液：KCl 1.0 mol/L, NaH2PO4 0.905 mol/L,Na2HPO4 0.048 mol/L, Ca(NO3)2 1.0 mol/L,MgSO4 0.25 mol/L。保持液温25±1℃，弱光照。
图1 粘连细铜丝的印制石墨电极图(略)
Fig.1Schematic representation of screenprinting graphite electrode with copper wire
2.4 实验方法
图2为用于测定Cu2+时空流的电极系统。取培养的银杏须根，用凡士林将其固定在盖玻片上，并使须根的上表面大致与底面水平，
图2 Cu2+流监测系统示意图(略)
Fig.2 Schematic representationof the system for the monitor of copper cation fluxes
将盖玻片水平放入测定池(d)中。小心滴加10 μmol/L Cu(NO3)250 μmol/L Ca(NO3)2混合液，并将其完全没入约0.5 cm。Cu2+选择微电极(a)垂直于根(c)固定于CHI900的微动控制器上。结合探针接近曲线(PAC)和扫描电化学显微镜(SECM)方法，测定银杏根的轴向和径向Cu2+的电位响应值。
3 结果与讨论
3.1微电极的表征
图3a是微电极表面的X射线光电子能谱。由图3可以看出含有Cu2p(932,953 eV)和Se3d(55 eV)峰； X射线衍射谱(图3b)与粉末衍射标准联合会(JCPDS)的JCPDS 6427相吻合，CuSe颗粒为立方晶系，三个峰分别对应于(111)、(220)和(311)面的衍射作用。沉积CuSe后电极的SEM(图3c)，可以发现CuSe晶体颗粒成片状分布。
图3 微电极表面的表征(略)
Fig.3 Characterizationof microelectrode surface
3.2 CuSe膜制备条件
微电极的直径影响SECM的分辨率及电位测量的精度和准确性。若电极直径大于细胞直径(几十μm)则定位不准确；而直径过小，电极响应的斜率降低，并且电位测量的误差增大，同时膜的稳定性变差。因此，实验中将电极直径控制在约15~20 μm。采用电化学氧化法制备硒化铜薄膜时，膜厚度由电沉积时间控制。一般地，膜越薄，所得电极的电位响应就越迅速，有利于Cu2+流产生过程的快速监测;但膜太薄电极响应的稳定性会变差。此外，溶液pH值在电沉积过程中有较大的影响，pH过高CuSe膜稳定性差，易脱落；过低则不易电沉积上。经多次实验，确定最优电沉积条件为：沉积液浓度0.1 mol/L Na2SeO3，用H2SO4调节pH到6；沉积时间50 s，沉积电位为-1.0 V。
3.3微电极对Cu2+的响应和响应时间
在pH 5～9范围内，电极响应值无变化。考虑到溶液条件尽可能与植物生理环境相接近，并减少加入缓冲溶液对银杏根的人为影响。因此，监测银杏根过程中选用50μmol/L Ca(NO3)2的背景溶液。
配制系列10-7～10-3 mol/L的Cu(NO3)2标准溶液，背景溶液为50μmol/L Ca(NO3)2，按下式组成测量电池： Ag，AgCl(s)|KCl(saturated)‖Cu2+|CuSe(s)，Cu。在25℃室温下进行测试，结果见图4，校正曲线为E=-29.8lgCCu2++62.4，线性相关系数r=0.9987，检出限为1.0×10-6 mol/L。曲线中每个点为平行3次测定所得到的平均值，计算每个浓度点的相对标准偏差，除lgCCu2+=6~7的点外，其余各点的相对标准偏差均<2%(如图4)。微电极连续使用4 h后，电极响应斜率变化约为5%～7%。因此，电极适合于一次性使用。
将Cu/CuSe电极插入10 μmol/L Ca(NO3)2溶液中并充分搅拌溶液，待电极电位达平衡后，滴加一定量的1×10-3 mol/L Cu(NO3)2溶液，电极电位随Cu2+浓度增加而改变的趋势如图5所示。从图可以看出微电极的响应时间约为1s。
图4 Cu/CuSe微电极的校正曲线(略)
Fig.4 Calibration curve for the Cu/CuSe microelectrode
图5 Cu/CuSe微电极的响应时间(略)
Fig.5 Response time for Cu/CuSe microelectrode
3.4 电极的选择性系数
固定干扰离子浓度为10-3mol/L，采用分别溶液法测定选择性系数，测试结果见表1。可以看出电极对一价阳离子的选择性普遍较好，对二价阳离子的选择性系数也在10-2～10-4之间。
图6银杏根尖的Cu2+流轮廓(略)
Fig.6 The Cu2+ fluxesprofile along the roots of Gingko.
表1 几种阳离子的选择性系数(略)
Table 1 Selectivitiy coefficient of various cations
3.5 银杏根尖Cu2+流时空监测
Cu2+流速的计算用Fick′s第一定理：J=D(C1-C2)/Δx，J是离子流速(单位：mol·cm-2s-1)，D是Cu2+的扩散系数，取7.2×10-6cm-2s-1，C1、C2是两个测定位置处的离子活度，Δx是两个测定点之间的距离(单位：cm)。测定得到的离子流速轮廓如图6所示,图中箭头指示Cu2+流动方向，箭头指向根表面表示Cu2+流入。从图可以看出距根尖1.5 ~ 2 mm处Cu2+浓度明显高于其他部位，同时距根尖0~100 μm处的Cu2+流极其微弱，2 mm后的末梢Cu2+流量迅速下降，Cu2+流入和流出量随空间交替变化。该Cu2+的离子流轮廓类似于Cd2+\[1\]。银杏根浸泡在10 μmol/L Cu(NO3)2和50 μmol/L Ca(NO3)2混合溶液中，静置10 min后根摄入Cu2+趋于平衡，图7显示了稳定Cu2+梯度下距根尖2 mm处根表面铜流量与根细胞距离的关系。银杏根细胞对Cu2+摄取具有振荡性，图8表明Cu2+流出过程至少有两个振荡周期：85 min和7 min，可以假定慢过程对应于Cu2+被动传输行为，快过程对应能量相关机制的正常涨落现象，Cu2+摄取的详细机制尚待进一步研究。这种现象与文献报道的H+、Ca2+和K+的离子流\[10, 11\]相类似。
图7 银杏根细胞垂直方向微区Cu2+浓度(略)
Fig.7 Local copper(Ⅱ) concentration as a function of the distance from a root cell of Gingko.
图8 距银杏根尖2 mm处Cu2+流的振荡行为(略)
Fig.8 Oscillatory behaviour of Cu2+ flux around the region 2 mm from the root apex of Gingko.
3.6 小结
本实验研制的全固型Cu2+选择性微电极尺寸小，响应快，适合于Cu2+的微区、在线和连续监测。使用该微电极首次获得的银杏根尖Cu2+流轮廓，并得到根尖表面Cu2+摄取过程存在两个振荡周期，慢过程对应于Cu2+被动传输行为，快过程对应能量依赖机制的正常涨落现象。但Cu2+摄取的详细机制尚待进一步研究。
References
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9Neshkova M. Cu2+ Electrode Function Dependence on the Membrane Composition for SelenideBased all SolidState Copper IonSelective Electrodes. In: Pungor E(ed) Proc Ionselective electrodes 5. Matrafured, Hungary, 1988: 503
10Tegg R S, Melian L, Wilson C R, Shabala S N. Plant Cell Physiol., 2005, 46(4): 638~648
11Demidchik V, Shabala S N, Coutts K B, Tester M A, Davies J M. J. Cell Sci., 2003, 116(1): 81~88
桂林工学院材料与化学工程系，桂林 541004
浙江大学化学系，杭州 310028
本文系广西教育厅科研基金资助项目(No.桂科教2004[2]02), http://www.100md.com(方成 李建平 顾海宁)