新型单分散聚合物基质高效疏水作用色谱填料的合成及性能研究
单分散聚合物填料,,单分散聚合物填料，疏水作用色谱，色谱固定相,摘要,关键词,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References
摘要 以自行合成的8.0 μm大孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球为基质，采用化学改性方法合成了邻二醇配基新型高效疏水作用色谱填料。详细评价了该填料对蛋白质的分离性能、动力学吸附容量、质量回收率、硫酸铵起始浓度和流动相pH值对蛋白保留的影响。结果表明，这种高效疏水作用色谱填料的分离性能优良，分离了5种标准蛋白，对溶菌酶的活性回收率为96%±5%，吸附容量高达36.5 g/L。关键词 单分散聚合物填料，疏水作用色谱，色谱固定相
1 引言
自从Erel等首先应用高效疏水作用色谱法(hydrophobic interaction chromatography, HIC)纯化糖原磷酸化酶以来[1]，这一新的色谱分支已获得了迅速发展。由于它分离和纯化生物大分子具有很高的生物活性，且不用昂贵和有毒的有机溶剂作流动相，所以它是生物工程后处理，蛋白质药物的纯化和分析中不可缺少的一种手段。
为了克服硅胶在碱性条件下溶解的缺点，满足生物大分子分离的需要，人们开发了高分子聚合物填料。Johansoon等[2]研究了不同组成的丙烯酰胺和甲基丙烯酸酯合成的共聚物填料与醇脱氢酶的疏水作用对酶活性的影响。Strop等[3]用Spheron P300柱成功地分离了人血清白蛋白、胰凝乳蛋白酶原和溶菌酶混合物。结果表明，Spheron P300具有分离生物大分子所要求的诸多特点，该柱可用一年，柱效没有明显降低。Tennikova等[4，5]采用自由基悬浮共聚技术制得了缩水甘油基异丁烯酸酯与乙烯基二甲基丙烯酸酯的大孔共聚物G60，其疏水性通过醇(丁醇或辛醇)与共聚物中悬垂的环氧基反应实现。Kato等[6，7]在聚醚树脂TSKGEL排阻色谱(GFC)固定相表面键合了低密度丁基或苯基，制成了高效疏水作用固定相，现已成为国际上最好的商品填料。
本实验以自行合成的8.0 μm大孔交联单分散甲基丙烯酸环氧丙酯树脂[8]为基质，采用了新的化学改性方法，制备了性能优良的高效疏水作用色谱填料。详细研究了该填料对标准蛋白的分离性能、质量回收率和动态吸附容量等性能。结果表明，该HIC填料具有分离性能良好和吸附容量大等优点。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
LC10A高效液相色谱仪、SPD10AV可变波长紫外可见检测器(日本岛津公司)；PE683红外分光光度计(美国PerkinElmer公司)；2400 CHN元素分析仪(美国Perkin Elmer公司)；LD52A型低速离心机(北京医用离心机厂) ......
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