紫外分光光度法测定复方银杏叶胶囊总黄酮含量
[关键词]复方银杏叶胶囊；紫外分光光度法；总黄酮；含量测定
复方银杏叶胶囊系解放军第85医院制剂室(本人在其药剂科进修1年)根据临床实践组方开发成功的银杏叶复方制剂，对冠心病、心绞痛、高血脂、血液流变性异常有显著疗效，其主要成分是银杏叶提取物(Egb)和醋柳黄酮。为了控制制剂质量，我们采用紫外分光光度法测定了复方银杏叶胶囊的总黄酮含量，结果令人满意。
1材料和方法
11仪器与试药TU1221型紫外可见分光光度计；无水芦丁对照品(由第二军医大学药学院天然药物化学教研室提供，纯度为99%)；复方银杏叶胶囊(第85医院制剂室自制，批号：20030301，20030427，20030510)；试剂均为分析纯。
1.2检测波长选择分别对醋柳黄酮、银杏叶提取物(Egb)和两者按处方比例的混合物于200～650nm处扫描图谱。醋柳黄酮于367nm、257nm处有紫外吸收峰；银杏叶提取物于267nm处有紫外吸收峰；混合物于367nm、257nm处有紫外吸收峰，266nm处有肩峰。银杏叶提取物只有267nm一处吸收峰，367nm处紫外吸收很少，所以混合物367nm处的吸收峰以醋柳黄酮紫外吸收为主，257nm处紫外吸收为银杏叶提取物和醋柳黄酮的共同紫外吸收。对芦丁对照品于200～450nm处扫描紫外图谱，于365nm和260nm有紫外吸收峰，因为260nm与本品的257nm处紫外吸收峰非常接近，所以确定260nm为检测波长。
1.3对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含无水芦丁0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
1.4供试品溶液的制备取本品20粒的内容物， 精密称定。精密称取120mg，置100ml容量瓶中，加甲醇70ml，于超声震荡30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，精密吸取滤液1ml，加甲醇定容于25ml容量瓶中作为供试品溶液。
1.5含量测定精密量取对照品溶液1.0ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白，在260nm的波长处测定吸收度，供试品溶液同样以甲醇为空白，在260nm的波长处测定吸收度，按外标法计算样品含量。
1.6方法学考察
1.6.1标准曲线精密量取对照品溶液0.5、10、15、20、2.5ml，分别置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白，在260nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程：Y=0.03308X-0.00996，r=0.9999，线性范围：2.040～12.240μg/ml。
1.6.2空白试验按处方制备不含主药的空白胶囊，按1.4的方法制备供试品溶液，于260nm测定紫外吸收，其紫外吸收在噪声范围内，说明胶囊的辅料对其无干扰。
1.6.3精密度试验同一供试品溶液连续测定6次，结果RSD=0.03%，说明仪器精密度较好。
1.6.4稳定性试验将同一供试品溶液每隔30分钟测定1次紫外吸收，6次测定结果RSD=0.13%，表明供试品溶液在3小时内稳定。
1.6.5重现性试验同一批样品取6份，按1.5的方法进行含量测定，RSD=1.72%，说明方法的重现性较好。
1.6.6加样回收率试验向已知含量的样品中加入不同量的芦丁对照品，按1.5的方法进行含量测定，计算回收率，结果见表1。回收率的平均值：96.68%，RSD=1.47%，表明方法的回收率较好。
回收率(%)=实测含量-已知样品含量 加入芦丁对照品量×100%
表1回收率测定结果(略)
2结果
按1.5的方法对3批样品进行含量测定，结果见表2。
表2复方银杏叶胶囊中总黄酮的含量(略)
3讨论
银杏叶提取物中黄酮类化合物包括黄酮、黄酮醇及其苷、双黄酮、儿茶素等几大类[1]，其中黄酮醇及其苷类是优势成分，主要为槲皮素、山萘酚、异鼠李素及其糖苷[2]；醋柳黄酮含有30多种黄酮成分，以槲皮素、山萘酚、异鼠李素及其苷类为优势成分[3～5]。两者优势成分十分相近，所以采用紫外分光光度法同时测定两者混合物的黄酮总量。
复方银杏叶胶囊总黄酮的提取方法我们比较了回流法和超声法，发现回流法提取时间较长，而且测定结果偏低，超声法提取时间短，提取液温度较低，含量测定结果高，可能是加热对复方银杏叶胶囊的总黄酮有破坏作用，所以采用超声法提取。提取溶剂的选择我们比较了甲醇和不同浓度的乙醇作为溶剂对复方银杏叶胶囊总黄酮的提取效果，发现甲醇提取效果优于无水乙醇，乙醇浓度越低提取效率越低，可能是乙醇溶液中的水分使胶囊中淀粉等辅料崩解、溶胀阻碍黄酮成分溶解，同时含水乙醇溶液比较粘稠，不易过滤，所以采用甲醇提取。
参考文献
[1]郑筱萸，张锦红，周廷森，等.中国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2000附录33.
[2]陈仲良.银杏提取物的化学成分和制剂的质量[J].中国药学杂志，1996，31(6):326～331.
[3]高锦明，缪时宣，周刚，等.沙棘黄酮化学研究的进展[J].沙棘，1998，11(2):34～40.
[4]赵玉珍，孙虹，陈小彤，等.沙棘中黄酮类化合物及其药用价值[J].沙棘，1997，10(1):9～11.
[5]戈升荣，朱国飞，甘世雄，等.醋柳黄酮的研究进展[J].中国药房，2000，11(3):134～135.
(本文编辑邵达泉)
(江苏省军区南通军分区干休所，江苏南通226007), 百拇医药(王严国，许勇，凌娟)
复方银杏叶胶囊系解放军第85医院制剂室(本人在其药剂科进修1年)根据临床实践组方开发成功的银杏叶复方制剂，对冠心病、心绞痛、高血脂、血液流变性异常有显著疗效，其主要成分是银杏叶提取物(Egb)和醋柳黄酮。为了控制制剂质量，我们采用紫外分光光度法测定了复方银杏叶胶囊的总黄酮含量，结果令人满意。
1材料和方法
11仪器与试药TU1221型紫外可见分光光度计；无水芦丁对照品(由第二军医大学药学院天然药物化学教研室提供，纯度为99%)；复方银杏叶胶囊(第85医院制剂室自制，批号：20030301，20030427，20030510)；试剂均为分析纯。
1.2检测波长选择分别对醋柳黄酮、银杏叶提取物(Egb)和两者按处方比例的混合物于200～650nm处扫描图谱。醋柳黄酮于367nm、257nm处有紫外吸收峰；银杏叶提取物于267nm处有紫外吸收峰；混合物于367nm、257nm处有紫外吸收峰，266nm处有肩峰。银杏叶提取物只有267nm一处吸收峰，367nm处紫外吸收很少，所以混合物367nm处的吸收峰以醋柳黄酮紫外吸收为主，257nm处紫外吸收为银杏叶提取物和醋柳黄酮的共同紫外吸收。对芦丁对照品于200～450nm处扫描紫外图谱，于365nm和260nm有紫外吸收峰，因为260nm与本品的257nm处紫外吸收峰非常接近，所以确定260nm为检测波长。
1.3对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含无水芦丁0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
1.4供试品溶液的制备取本品20粒的内容物， 精密称定。精密称取120mg，置100ml容量瓶中，加甲醇70ml，于超声震荡30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，精密吸取滤液1ml，加甲醇定容于25ml容量瓶中作为供试品溶液。
1.5含量测定精密量取对照品溶液1.0ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白，在260nm的波长处测定吸收度，供试品溶液同样以甲醇为空白，在260nm的波长处测定吸收度，按外标法计算样品含量。
1.6方法学考察
1.6.1标准曲线精密量取对照品溶液0.5、10、15、20、2.5ml，分别置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白，在260nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程：Y=0.03308X-0.00996，r=0.9999，线性范围：2.040～12.240μg/ml。
1.6.2空白试验按处方制备不含主药的空白胶囊，按1.4的方法制备供试品溶液，于260nm测定紫外吸收，其紫外吸收在噪声范围内，说明胶囊的辅料对其无干扰。
1.6.3精密度试验同一供试品溶液连续测定6次，结果RSD=0.03%，说明仪器精密度较好。
1.6.4稳定性试验将同一供试品溶液每隔30分钟测定1次紫外吸收，6次测定结果RSD=0.13%，表明供试品溶液在3小时内稳定。
1.6.5重现性试验同一批样品取6份，按1.5的方法进行含量测定，RSD=1.72%，说明方法的重现性较好。
1.6.6加样回收率试验向已知含量的样品中加入不同量的芦丁对照品，按1.5的方法进行含量测定，计算回收率，结果见表1。回收率的平均值：96.68%，RSD=1.47%，表明方法的回收率较好。
回收率(%)=实测含量-已知样品含量 加入芦丁对照品量×100%
表1回收率测定结果(略)
2结果
按1.5的方法对3批样品进行含量测定，结果见表2。
表2复方银杏叶胶囊中总黄酮的含量(略)
3讨论
银杏叶提取物中黄酮类化合物包括黄酮、黄酮醇及其苷、双黄酮、儿茶素等几大类[1]，其中黄酮醇及其苷类是优势成分，主要为槲皮素、山萘酚、异鼠李素及其糖苷[2]；醋柳黄酮含有30多种黄酮成分，以槲皮素、山萘酚、异鼠李素及其苷类为优势成分[3～5]。两者优势成分十分相近，所以采用紫外分光光度法同时测定两者混合物的黄酮总量。
复方银杏叶胶囊总黄酮的提取方法我们比较了回流法和超声法，发现回流法提取时间较长，而且测定结果偏低，超声法提取时间短，提取液温度较低，含量测定结果高，可能是加热对复方银杏叶胶囊的总黄酮有破坏作用，所以采用超声法提取。提取溶剂的选择我们比较了甲醇和不同浓度的乙醇作为溶剂对复方银杏叶胶囊总黄酮的提取效果，发现甲醇提取效果优于无水乙醇，乙醇浓度越低提取效率越低，可能是乙醇溶液中的水分使胶囊中淀粉等辅料崩解、溶胀阻碍黄酮成分溶解，同时含水乙醇溶液比较粘稠，不易过滤，所以采用甲醇提取。
参考文献
[1]郑筱萸，张锦红，周廷森，等.中国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2000附录33.
[2]陈仲良.银杏提取物的化学成分和制剂的质量[J].中国药学杂志，1996，31(6):326～331.
[3]高锦明，缪时宣，周刚，等.沙棘黄酮化学研究的进展[J].沙棘，1998，11(2):34～40.
[4]赵玉珍，孙虹，陈小彤，等.沙棘中黄酮类化合物及其药用价值[J].沙棘，1997，10(1):9～11.
[5]戈升荣，朱国飞，甘世雄，等.醋柳黄酮的研究进展[J].中国药房，2000，11(3):134～135.
(本文编辑邵达泉)
(江苏省军区南通军分区干休所，江苏南通226007), 百拇医药(王严国，许勇，凌娟)