【摘要】 目的 利用发酵含有重组质粒PET28a(+)PDC的BL21(DE3)plysS大肠杆菌，获得高效表达的M2蛋白。方法 通过用3.7L发酵罐，37℃培养2.5h，溶氧控制在30%以上,4h后加入IPTG诱导表达6h，并收集菌体。溶解破菌后用安玛西亚金属螯合层析系统纯化目的蛋白。结果 3.7L发酵罐工程菌，菌体收得量可达湿重15g/L。目的蛋白在上清中约占40%～50%，包涵体约占60%～50%。结论 用此方法发酵大肠杆菌，并表达的M2蛋白，为PBC今后的动物模型建立打下了一定的基础。

    【关键词】 人源丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位； 胆汁性；肝硬化； 发酵

    原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一类以肝内小胆管进行性、破坏性炎症为特征的自身免疫性肝病，主要累及中老年妇女。血清线粒体抗体M2(AMA-M2)诊断PBC的敏感性和特异性均超过90%～95%，为本病最突出的免疫学指标异常，也是重要的诊断手段[1]。该抗体是针对位于线粒体内膜上α-酮酸脱氢酶复合物(2-OADC)的自身抗体,并主要和丙酮酸脱氢酶复合物的E2亚单位(pyruvate dehydrogenase complex,PDC-E2)起反应[2]。将PDC表位基因克隆到表达载体PET28a(+)。笔者大量发酵了含有重组质粒PET28a(+)PDC的BL21(DE3)plysS大肠杆菌，对于其培养条件、营养要求、补料方式以及对于重组产物的诱导表达的

    基金项目：本课题受国家自然科学基金(30471616)、上海市重大科技攻关基金(04DZ19116)、上海市重点科研支撑条件项目(051409012)和上海市青年科技启明星计划(QMX01423)资助。规律等，都进行了详细的研究和优化。以期获得高效表达的M2蛋白，为今后进一步放大打下基础。1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株及质粒 工程菌BL21(DE3)plysS大肠杆菌及重组质粒PET28a(+)PDC由本科室构建并保存 ......