中药新药药理研究的技术要求
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2006年8月21日
一、基本要求
1.试验主要负责人应具有药理毒理专业高级技术职称、有较高的理论水平、工作经验与资历。确保试验设计合理，数据可靠，结果可信，结论判断准确。试验报告应有试验负责人签字及单位盖章。
2.受试药物应处方固定、制备工艺稳定、质量可控。
3. 从事新药安全性研究的试验室应符合国家药品监督管理局《药品非临床研究质量管理规范》(GLP)的要求，药理研究也可参照实行。
二、药理学研究
药理学研究主要包括主要药效学研究和一般药理学研究。
(一)主要药效学研究(2)(3)
中药新药主要药效学研究应遵循中医药理论，运用现代科学方法，制定具有中医药特色的试验计划，根据新药的功能主治，选用或建立与中医“证”或“病”相符或相近的动物模型和试验方法，对新药的有效性做出科学的评价。为此主要药效学研究应考虑下面几个方面的问题：
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1. 主要药效学研究设计依据和要求： 中药具有成分复杂，药理作用广泛的特点，在实验设计时应根据新药主治(病或证)，参考其功能，选择能够反映其疗效本质的主要药效进行重点研究；间接证实其药效的辅助试验可酌情选作，要分清主次。如主治风湿痹证(类风湿性关节炎)的新药，应以免疫性关节肿、细胞免疫和镇痛作用为主要试验，特别是免疫性关节炎为重中之重。如新药对二型胶原(国内常用不完全性佐剂代替)性关节炎的继发肿胀没有抑制作用，其他试验结果再明显也是没有用的。此外、主要药效试验应从多方面进行论证，至少应选用两种或两种以上模型加以证实，且以整体试验为主。要求实验方法可靠、技术先进、操作规范、结果可信。
2. 选择实验方法 药理实验方法主要分为在体试验和体外试验两大类。两者互相补充，可以从不同角度，不同深度研究中药新药药效。两种方法各有所长。体外试验 包括离体器官、组织、细胞、酶、受体、细胞内信息及基因等实验。其可以按要求严格控制实验条件，具有重复性好，用药量少、节省动物等优点，且可排出体内神经体液等各种复杂因素的干扰，可进行直接观察，获得准确结果。所得结果较易分析。在1、5、7类中药新药的研制中，因含杂质较少，可以配合一定的体外试验。但在进行体外试验时，应充分估计到中药粗制剂中杂质和理化性质对实验结果的影响，如药液的酸碱度、各种电解质和鞣质等的干扰，所得结果常常不能反映临床疗效。例如在试管内抗菌作用较强的中药，常常在体内不一定表现出强大的抗菌作用；某些中药含有大量钾离子、钙离子，其粗制剂在麦氏浴槽中表现出对离体平滑肌、心肌有明显的药理活性，但口服后不一定产生相应作用。
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体内试验也称在体试验，其比较接近于临床状态，适于综合性研究，所得结果较为可信，可以直接反映临床疗效。中医药学以整体思想体系为基础，重视宏观调控。中药具有多成分多靶点的特点,整体试验能较全面的反映药物的作用。特别是中药新药2类药材、6类复方制剂大多属粗制剂，更应强调以体内试验为主。要证实新药具有某种药理作用必须通过体内试验证明有效。体外试验仅起辅助作用。具体试验方法请参考相关方法学书籍(4)(5)(6)(7)。
近年来开展的中药血清药理试验方法是一种新的体外试验方法，其将受试药物经口给与动物后，取其血清作为药源加入体外反应系统中研究其药理作用。此种方法尽管目前仍存在很多问题，尚待解决，但对中药粗制剂的体外试验具有重要价值。严格说来，采用血清药理试验方法，给药方案需要进行大量的预试验，才能找出最佳给药方案。给药方案包括给药剂量，每天给药次数，连续给药时间，给药后采血时间以及血清中所含相关活性物质的灭活条件(7)(8)(9)。李氏根据近些年来所掌握中药有效成分大量药代动力学数据，提出通法如下：将受试药物每天给药两次，连续给药3天，末次给药后1小时采血；给药剂量为临床等效剂量。按此通法方案进行，理论上中药或其复方所含80%以上的成分于给药后1小时处于达到或接近峰值。血清中活性物质对所含药物作用有干扰，如何排出干扰是一项十分复杂的问题。一般排出酶活性及补体干扰，常采用56℃条件下放置30min,这是最简便的方法。但不能列为通法。因为干扰因素不同，排出干扰的条件差异会很大。
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3.选择动物模型和指标 研究药物的作用仅仅在正常动物身上进行还不够，还需要制备各种动物病理模型，因为病理模型模拟疾病状态，比正常机体更接近病人的机能状态，有些药理作用在正常动物身上观察不到，如抗胃粘膜损伤药，抗菌、抗病毒药,抗恶性肿瘤药，解热、镇痛、抗炎药等均必须在相应的病理模型上才能观察到相应的作用。因此，病理模型在新药研究中占有重要地位。病理模型的选择应首选符合中医临床证或病的动物模型。如研究补虚药对免疫功能的影响，应首选免疫功能低下的虚症模型，按照中医辩证施治原则“虚则补之”，凡是正气虚衰病人，才有免疫功能低下表现，用补益药可使其免疫功能增强。进一步根据药物类型，选择相应病理模型。如治疗脾虚症的新药，宜选用脾虚症的动物模型，治疗血虚证的新药，应选择血虚证的动物模型。但目前制造完全模拟中医病或证的病理模型尚有困难。现有模型与临床证候相距甚远，故研究中药新药也常常采用一般化学药物所常用的病理模型，如高血压、糖尿病、中风、冠心病、肝炎、肝硬化等病理模型。
观察指标应选用特异性强、敏感性高、重现性好、客观、定量或半定量的指标进行观察。如在治疗冠心病心绞痛的中药新药进行疗效研究时，制备心肌缺血模型时，可供选择的方法很多，其中以阻断小型猪或犬冠状动脉所致的局限性心肌缺血模型与临床更为相似，较为合理，且可定位、定量、定性、较准确地评价药效，可作为首选的实验模型。
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4. 对不同类别新药的药效学研究要求：中药新药第1~5类、6(3)类及7类的主要药效研究，应从多方面证实其主要药效，以及较重要的辅助治疗作用。其中1类和5类和7类新药，含杂质较少，应在更高的技术水平上，通过体内、体外多种试验方法论证其药效。6(1)传统中药复方及11类已有国家标准的中成药制剂，可免做主要药效学试验。
5. 实验动物 应根据各种试验的具体要求，合理选择实验动物，对其种属、品系、性别、年龄、体重、健康状态、饲养条件及动物来源，合格证号，均应按试验要求严格选择，并详细记录，要做到合理选择需注意下列问题：
(1) 选用与人体的结构、机能、代谢、疾病特点相近似的实验动物。如研究催吐药宜选用鸽子、犬、猫等动物，它们对呕吐反应敏感；不宜选用家兔和鼠类，因后者无呕吐中枢或无呕吐反应；再如进行降压药研究时，宜选用犬、猫和大鼠，它们对降压药反应较敏感，与人类接近；不宜选用家兔，因家兔血压不稳定，对有些药物不敏感。
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(2) 选用遗传背景明确，指标稳定且显著，解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物。
(3)宜选用2—3种动物进行药效试验，动物模型与临床有区别，特别是中医证的模型与临床差异更大，因此“动物点头”临床不一定疗效就好。人与动物既有共性又有差异。如在不同种属动物身上均作出与临床疗效相似的结果，可信度就大。故在进行药效研究时不要只选用一种动物，用2—3种动物的实验结果可信度更大。
此外，还应考虑实验动物品种、品系、质量,受试动物是否易得，是否经济、是否容易饲养和管理。
6. 受试药物 对受试药物的要求应注意下列问题：
(1) 受试中药药材应经过生药专家鉴定，确定品种、产地、药用部位和采收季节。饮片炮制方法要固定。
(2) 中药制剂生产工艺条件要经过严格的选择，选用最佳工艺条件，制剂应合格，稳定性好，质量可控，剂型和质量标准应与临床用药基本相同。药效试验可选用不含赋形剂的中药提取物。
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(3)6类中药复方制剂处方必须固定，处方组成药味必须符合法定标准，且组方符合中医药理论，对中西药合方或方中含天然药材者,应进行组方分析。
此外，中药新药制剂应符合卫生标准，制剂来源、批号最好一致。
7. 对照 随机、对照和重复是科学实验基本原则。主要药效学试验设计时必须时时考虑。其中对照尤其重要。主要药效常需设下列对照组：
(1) 正常对照组，又称“空白对照组”或“阴性对照组”，指在正常条件下进行观察和对照。正常对照组必须与给药组进行相同的处理，如常用溶剂灌胃，用生理盐水注射。正常对照组设置目的，可用来观察造模是否成功；在药物作用下观察给药组指标是否恢复正常。
(2) 阳性药对照组，阳性药对照组可选用药典收载的，正式批准生产的中药或西药，如.是中药则需注明批准文号，功能主治。西药可按试验的目的要求选用经典的，公认的药物，如抗炎试验常选用皮质激素类制剂或解热镇痛药;镇痛则选用颅痛定、阿斯匹林、吗啡等。中药应选用与受试新药主治、功效、给药途径基本一致的，每个实验可选用1~2个阳性对照药；每种阳性药可选用1~2个不同剂量。阳性对照药设置的目的，一是比较新药的作用特点，作用强度，起效快慢；二是验证所用方法和指标的可靠性，准确性，为此阳性药必须作出阳性结果，否则有理由怀疑所选方法和指标的可信度。
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(3)模型对照组 除不用药以外，其他处理与给药组相同。如前所述，为证实药物的作用常需建立病和证的动物模型；如，欲观察清热药、解表药的解热作用，必须制备大鼠或家兔的发热模型。欲观察活血药的作用必须制备各种血瘀证的模型。在相应的动物模型身上观察药物作用，才能真正反映临床疗效。
如上所述,通常一个药效实验需设5~6个实验组，每组通常含10~14只动物(指大鼠或小鼠)。在进行分组时必须注意动物体重、性别的随机性。在需要分批进行实验时要注意各组动物之间的平行操作。主要药效实验常常需要重复。如抗肿瘤药物，其祛邪作用要求重复三批，降血糖实验也要求重复。主要药效重复性差，则该药开发没有前途。
8. 给药剂量和给药途径 因为中药新药复方制剂有效成份含量低，口服生物利用度低，不易作出量效关系。根据技术要求各类新药主要药效试验至少应设三个剂量组。犬与猴等大动物可设2个剂量组，但每组动物数不少于6只，纯度比较高的1、5、7类中药新药应尽量作出量—效和时—效关系。
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剂量设计：合理的剂量设计在药效设计中占有重要的地位。在材料合格，模型和方法可靠的前提下，试验结果好坏在很大程度上取决于剂量设计是否合理。现简介几种估算剂量的方法如下：
(1) 按动物体重估算临床等效剂量：不同动物和人体对同一药物反应的敏感性差异很大，一般动物的敏感性比人小很多,其主要原因之一是动物个体小,单位重量下所占的体表面积大。所谓临床等效剂量,即指根据体表面积折算法换算的在同等体表面积(m2)单位时的剂量。但体表面积不易直接测得，通过公式计算比较复杂,根据人用剂量按体重折算比较容易，计算单位一般以公斤(kg)体重相当于生药量的克(g)数表示。不同实验动物和临床人用剂量，通常可采用下列简单公式计算：
式中dB是欲求算的B种动物(包括人)的公斤体重剂量;dA是已知A种动物(包括人)的公斤体重剂量;KA 和KB是折算系数。
表2 不同动物剂量折算系数
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动物种类 小鼠 大鼠 豚鼠 家兔 猫 猴 犬 人
K(折算系数) 1 0.71 0.62 0.37 0.30 0.31 0.21 0.11
简化倍数 9 7 6 4 3 3 2 1
根据表2,不同种类动物等效剂量分别相当于人临床剂量的2~9倍。据孙氏提出不同动物剂量换算应遵循其换算系数，其基本规律为：人—1，犬、猴—3，兔、猫—5，大鼠、豚鼠—7，小鼠—9的折算系数为依据，推算出等效剂量(10)。误差允许范围为0.5~1倍。
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中药新药一般来源于临床，已知其临床日用量可推算出人每公斤体重用量。如此，根据其体重折算系数不难求出每种动物的等效剂量。因为不同方法，不同指标，对药物反应敏感性不同，药效试验常需进行预试验。预试验应以等效剂量为标准进行预摸。正式实验时常常以等效剂量作为中剂量，大、中、小剂量差为2~3的等比级数为宜。
(2)根据预试验：一般不论用何种方法选择有效剂量均应通过预试验找出最小有效量，再做正式试验。
(3)根据急毒试验结果：凡能测出LD50,可用其1/20~1/10做为有效剂量的预摸。
(4)考虑长毒剂量设计：药效试验高剂量组应明显低于长期毒性试验的中剂量组,为此药效试验的高剂量组,不宜超过人用量的20倍(指大鼠试验)。
给药途径：比较纯的1、5、7类中药新药,一般采用两种给药途径，其中主要途径应与临床相同，6类中药复方新药因制剂粗，可仅用一种与临床一致的给药途径。溶解性好的可注射给药，注射给药能保证药物的吸收。口服给药，吸收不规则，生物利用度较低，量效关系常常不明显。
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特殊情况，给药途径难以保持与临床一致，如静脉注射剂，在进行大鼠长期毒性试验时，可采用腹腔注射(ip)或皮下注射(Sc)方法给药，但如制剂有刺激性，则不宜。
给药时间 主要参考临床用药疗程，镇痛药，退热药，治疗感冒的药物，有的疗程短，不超过3～5天，给药时间宜短，最好一次给药即见疗效。补益药，防治老年病的药物，给药时间宜长。因中药作用缓慢、温和，常在造模同时开始用药。如用D一半乳糖皮下注射制备模拟衰老的大鼠或小鼠模型，造模和给药常在42天~50天左右。
9.给药容量和给药方式：
(1) 给药容量：应适宜,容量过小容易产生误差;过大，动物难于耐受。一般最大给药容量参考如下：
小鼠禁食不禁水12~16h，一次灌胃不超过0.4ml/10g体重；皮下(Sc)、腹腔(ip)和静脉注射(iv)不超过0.5ml/只。大鼠禁食不禁水12~16h，一次用量一般为1~2ml/100g体重，最大不宜超过5ml/只;腹腔注射1.5ml/只;皮下和静脉注射不超过1ml/只；肌内注射0.4ml/只。兔和猫最大用量：灌胃20ml/次,皮下、肌内注射2ml/次，腹腔5ml/次，静脉10ml/次。
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(2) 给药方式：分预防给药、治疗给药,或防治结合性给药。预防给药常先给药几天,使药物在体内达到有效浓度后再进行试验,观察药物的预防作用;治疗给药先制作动物模型,然后给药，观察药物的治疗作用,这种方式更符合临床。但对起效缓慢、作用温和、持续时间短暂的中药新药，治疗给药,常难以获得预期结果,只能采用预防给药的方法。有些实验也常采用预防和治疗相结合的方式,如体内抗感染实验,即先给药几日后,接种感染原后,再继续给药几日，观察中药新药的抗感染作用。
10. 实验结果的表达和统计分析 无论定量或定性实验结果，均要求列表表达。此与研究论文有别，论文可以用图表达，不用表。但新药药效研究资料必须有表，用具体统计所得实验数据列表说明，如认为数据表不足以表达清楚，可以附加图进一步说明。常用统计方法如下：
(1) 定量资料：又称量反应资料,这种反应可用数量差异表示,如血压、尿量、体温、血液生化测定值等。组间比较多采用t检验方法统计分析。
(2) 定性资料：又称质反应资料,机体对药物的反应只有“有” 或“无” 两种,如死或不死,惊厥出现或不出现等,试验结果常用百分率表示。统计分析可采用“卡方”检验。
(3)分级资料：也称为有序的计量资料,例如,药效的持续时间,病理程度按等级划分的资料,临床疗效按等级分组资料(痊愈、显效、好转、无效等)这些资料不宜用上述方法进行统计分析。常采用秩和法及Ridit法等非参数统计分析方法。
统计结果列表说明。数据表内容通常包含实验分组、给药剂量、每组动物数、指标数据和统计结果显著性标示。最后要求试验负责人熟悉研究内容和结果，并按形式审查内容整理资料，在书写资料中注意避免文字和数据错误。, 百拇医药
1.试验主要负责人应具有药理毒理专业高级技术职称、有较高的理论水平、工作经验与资历。确保试验设计合理，数据可靠，结果可信，结论判断准确。试验报告应有试验负责人签字及单位盖章。
2.受试药物应处方固定、制备工艺稳定、质量可控。
3. 从事新药安全性研究的试验室应符合国家药品监督管理局《药品非临床研究质量管理规范》(GLP)的要求，药理研究也可参照实行。
二、药理学研究
药理学研究主要包括主要药效学研究和一般药理学研究。
(一)主要药效学研究(2)(3)
中药新药主要药效学研究应遵循中医药理论，运用现代科学方法，制定具有中医药特色的试验计划，根据新药的功能主治，选用或建立与中医“证”或“病”相符或相近的动物模型和试验方法，对新药的有效性做出科学的评价。为此主要药效学研究应考虑下面几个方面的问题：
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1. 主要药效学研究设计依据和要求： 中药具有成分复杂，药理作用广泛的特点，在实验设计时应根据新药主治(病或证)，参考其功能，选择能够反映其疗效本质的主要药效进行重点研究；间接证实其药效的辅助试验可酌情选作，要分清主次。如主治风湿痹证(类风湿性关节炎)的新药，应以免疫性关节肿、细胞免疫和镇痛作用为主要试验，特别是免疫性关节炎为重中之重。如新药对二型胶原(国内常用不完全性佐剂代替)性关节炎的继发肿胀没有抑制作用，其他试验结果再明显也是没有用的。此外、主要药效试验应从多方面进行论证，至少应选用两种或两种以上模型加以证实，且以整体试验为主。要求实验方法可靠、技术先进、操作规范、结果可信。
2. 选择实验方法 药理实验方法主要分为在体试验和体外试验两大类。两者互相补充，可以从不同角度，不同深度研究中药新药药效。两种方法各有所长。体外试验 包括离体器官、组织、细胞、酶、受体、细胞内信息及基因等实验。其可以按要求严格控制实验条件，具有重复性好，用药量少、节省动物等优点，且可排出体内神经体液等各种复杂因素的干扰，可进行直接观察，获得准确结果。所得结果较易分析。在1、5、7类中药新药的研制中，因含杂质较少，可以配合一定的体外试验。但在进行体外试验时，应充分估计到中药粗制剂中杂质和理化性质对实验结果的影响，如药液的酸碱度、各种电解质和鞣质等的干扰，所得结果常常不能反映临床疗效。例如在试管内抗菌作用较强的中药，常常在体内不一定表现出强大的抗菌作用；某些中药含有大量钾离子、钙离子，其粗制剂在麦氏浴槽中表现出对离体平滑肌、心肌有明显的药理活性，但口服后不一定产生相应作用。
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体内试验也称在体试验，其比较接近于临床状态，适于综合性研究，所得结果较为可信，可以直接反映临床疗效。中医药学以整体思想体系为基础，重视宏观调控。中药具有多成分多靶点的特点,整体试验能较全面的反映药物的作用。特别是中药新药2类药材、6类复方制剂大多属粗制剂，更应强调以体内试验为主。要证实新药具有某种药理作用必须通过体内试验证明有效。体外试验仅起辅助作用。具体试验方法请参考相关方法学书籍(4)(5)(6)(7)。
近年来开展的中药血清药理试验方法是一种新的体外试验方法，其将受试药物经口给与动物后，取其血清作为药源加入体外反应系统中研究其药理作用。此种方法尽管目前仍存在很多问题，尚待解决，但对中药粗制剂的体外试验具有重要价值。严格说来，采用血清药理试验方法，给药方案需要进行大量的预试验，才能找出最佳给药方案。给药方案包括给药剂量，每天给药次数，连续给药时间，给药后采血时间以及血清中所含相关活性物质的灭活条件(7)(8)(9)。李氏根据近些年来所掌握中药有效成分大量药代动力学数据，提出通法如下：将受试药物每天给药两次，连续给药3天，末次给药后1小时采血；给药剂量为临床等效剂量。按此通法方案进行，理论上中药或其复方所含80%以上的成分于给药后1小时处于达到或接近峰值。血清中活性物质对所含药物作用有干扰，如何排出干扰是一项十分复杂的问题。一般排出酶活性及补体干扰，常采用56℃条件下放置30min,这是最简便的方法。但不能列为通法。因为干扰因素不同，排出干扰的条件差异会很大。
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3.选择动物模型和指标 研究药物的作用仅仅在正常动物身上进行还不够，还需要制备各种动物病理模型，因为病理模型模拟疾病状态，比正常机体更接近病人的机能状态，有些药理作用在正常动物身上观察不到，如抗胃粘膜损伤药，抗菌、抗病毒药,抗恶性肿瘤药，解热、镇痛、抗炎药等均必须在相应的病理模型上才能观察到相应的作用。因此，病理模型在新药研究中占有重要地位。病理模型的选择应首选符合中医临床证或病的动物模型。如研究补虚药对免疫功能的影响，应首选免疫功能低下的虚症模型，按照中医辩证施治原则“虚则补之”，凡是正气虚衰病人，才有免疫功能低下表现，用补益药可使其免疫功能增强。进一步根据药物类型，选择相应病理模型。如治疗脾虚症的新药，宜选用脾虚症的动物模型，治疗血虚证的新药，应选择血虚证的动物模型。但目前制造完全模拟中医病或证的病理模型尚有困难。现有模型与临床证候相距甚远，故研究中药新药也常常采用一般化学药物所常用的病理模型，如高血压、糖尿病、中风、冠心病、肝炎、肝硬化等病理模型。
观察指标应选用特异性强、敏感性高、重现性好、客观、定量或半定量的指标进行观察。如在治疗冠心病心绞痛的中药新药进行疗效研究时，制备心肌缺血模型时，可供选择的方法很多，其中以阻断小型猪或犬冠状动脉所致的局限性心肌缺血模型与临床更为相似，较为合理，且可定位、定量、定性、较准确地评价药效，可作为首选的实验模型。
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4. 对不同类别新药的药效学研究要求：中药新药第1~5类、6(3)类及7类的主要药效研究，应从多方面证实其主要药效，以及较重要的辅助治疗作用。其中1类和5类和7类新药，含杂质较少，应在更高的技术水平上，通过体内、体外多种试验方法论证其药效。6(1)传统中药复方及11类已有国家标准的中成药制剂，可免做主要药效学试验。
5. 实验动物 应根据各种试验的具体要求，合理选择实验动物，对其种属、品系、性别、年龄、体重、健康状态、饲养条件及动物来源，合格证号，均应按试验要求严格选择，并详细记录，要做到合理选择需注意下列问题：
(1) 选用与人体的结构、机能、代谢、疾病特点相近似的实验动物。如研究催吐药宜选用鸽子、犬、猫等动物，它们对呕吐反应敏感；不宜选用家兔和鼠类，因后者无呕吐中枢或无呕吐反应；再如进行降压药研究时，宜选用犬、猫和大鼠，它们对降压药反应较敏感，与人类接近；不宜选用家兔，因家兔血压不稳定，对有些药物不敏感。
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(2) 选用遗传背景明确，指标稳定且显著，解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物。
(3)宜选用2—3种动物进行药效试验，动物模型与临床有区别，特别是中医证的模型与临床差异更大，因此“动物点头”临床不一定疗效就好。人与动物既有共性又有差异。如在不同种属动物身上均作出与临床疗效相似的结果，可信度就大。故在进行药效研究时不要只选用一种动物，用2—3种动物的实验结果可信度更大。
此外，还应考虑实验动物品种、品系、质量,受试动物是否易得，是否经济、是否容易饲养和管理。
6. 受试药物 对受试药物的要求应注意下列问题：
(1) 受试中药药材应经过生药专家鉴定，确定品种、产地、药用部位和采收季节。饮片炮制方法要固定。
(2) 中药制剂生产工艺条件要经过严格的选择，选用最佳工艺条件，制剂应合格，稳定性好，质量可控，剂型和质量标准应与临床用药基本相同。药效试验可选用不含赋形剂的中药提取物。
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(3)6类中药复方制剂处方必须固定，处方组成药味必须符合法定标准，且组方符合中医药理论，对中西药合方或方中含天然药材者,应进行组方分析。
此外，中药新药制剂应符合卫生标准，制剂来源、批号最好一致。
7. 对照 随机、对照和重复是科学实验基本原则。主要药效学试验设计时必须时时考虑。其中对照尤其重要。主要药效常需设下列对照组：
(1) 正常对照组，又称“空白对照组”或“阴性对照组”，指在正常条件下进行观察和对照。正常对照组必须与给药组进行相同的处理，如常用溶剂灌胃，用生理盐水注射。正常对照组设置目的，可用来观察造模是否成功；在药物作用下观察给药组指标是否恢复正常。
(2) 阳性药对照组，阳性药对照组可选用药典收载的，正式批准生产的中药或西药，如.是中药则需注明批准文号，功能主治。西药可按试验的目的要求选用经典的，公认的药物，如抗炎试验常选用皮质激素类制剂或解热镇痛药;镇痛则选用颅痛定、阿斯匹林、吗啡等。中药应选用与受试新药主治、功效、给药途径基本一致的，每个实验可选用1~2个阳性对照药；每种阳性药可选用1~2个不同剂量。阳性对照药设置的目的，一是比较新药的作用特点，作用强度，起效快慢；二是验证所用方法和指标的可靠性，准确性，为此阳性药必须作出阳性结果，否则有理由怀疑所选方法和指标的可信度。
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(3)模型对照组 除不用药以外，其他处理与给药组相同。如前所述，为证实药物的作用常需建立病和证的动物模型；如，欲观察清热药、解表药的解热作用，必须制备大鼠或家兔的发热模型。欲观察活血药的作用必须制备各种血瘀证的模型。在相应的动物模型身上观察药物作用，才能真正反映临床疗效。
如上所述,通常一个药效实验需设5~6个实验组，每组通常含10~14只动物(指大鼠或小鼠)。在进行分组时必须注意动物体重、性别的随机性。在需要分批进行实验时要注意各组动物之间的平行操作。主要药效实验常常需要重复。如抗肿瘤药物，其祛邪作用要求重复三批，降血糖实验也要求重复。主要药效重复性差，则该药开发没有前途。
8. 给药剂量和给药途径 因为中药新药复方制剂有效成份含量低，口服生物利用度低，不易作出量效关系。根据技术要求各类新药主要药效试验至少应设三个剂量组。犬与猴等大动物可设2个剂量组，但每组动物数不少于6只，纯度比较高的1、5、7类中药新药应尽量作出量—效和时—效关系。
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剂量设计：合理的剂量设计在药效设计中占有重要的地位。在材料合格，模型和方法可靠的前提下，试验结果好坏在很大程度上取决于剂量设计是否合理。现简介几种估算剂量的方法如下：
(1) 按动物体重估算临床等效剂量：不同动物和人体对同一药物反应的敏感性差异很大，一般动物的敏感性比人小很多,其主要原因之一是动物个体小,单位重量下所占的体表面积大。所谓临床等效剂量,即指根据体表面积折算法换算的在同等体表面积(m2)单位时的剂量。但体表面积不易直接测得，通过公式计算比较复杂,根据人用剂量按体重折算比较容易，计算单位一般以公斤(kg)体重相当于生药量的克(g)数表示。不同实验动物和临床人用剂量，通常可采用下列简单公式计算：
式中dB是欲求算的B种动物(包括人)的公斤体重剂量;dA是已知A种动物(包括人)的公斤体重剂量;KA 和KB是折算系数。
表2 不同动物剂量折算系数
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动物种类 小鼠 大鼠 豚鼠 家兔 猫 猴 犬 人
K(折算系数) 1 0.71 0.62 0.37 0.30 0.31 0.21 0.11
简化倍数 9 7 6 4 3 3 2 1
根据表2,不同种类动物等效剂量分别相当于人临床剂量的2~9倍。据孙氏提出不同动物剂量换算应遵循其换算系数，其基本规律为：人—1，犬、猴—3，兔、猫—5，大鼠、豚鼠—7，小鼠—9的折算系数为依据，推算出等效剂量(10)。误差允许范围为0.5~1倍。
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中药新药一般来源于临床，已知其临床日用量可推算出人每公斤体重用量。如此，根据其体重折算系数不难求出每种动物的等效剂量。因为不同方法，不同指标，对药物反应敏感性不同，药效试验常需进行预试验。预试验应以等效剂量为标准进行预摸。正式实验时常常以等效剂量作为中剂量，大、中、小剂量差为2~3的等比级数为宜。
(2)根据预试验：一般不论用何种方法选择有效剂量均应通过预试验找出最小有效量，再做正式试验。
(3)根据急毒试验结果：凡能测出LD50,可用其1/20~1/10做为有效剂量的预摸。
(4)考虑长毒剂量设计：药效试验高剂量组应明显低于长期毒性试验的中剂量组,为此药效试验的高剂量组,不宜超过人用量的20倍(指大鼠试验)。
给药途径：比较纯的1、5、7类中药新药,一般采用两种给药途径，其中主要途径应与临床相同，6类中药复方新药因制剂粗，可仅用一种与临床一致的给药途径。溶解性好的可注射给药，注射给药能保证药物的吸收。口服给药，吸收不规则，生物利用度较低，量效关系常常不明显。
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特殊情况，给药途径难以保持与临床一致，如静脉注射剂，在进行大鼠长期毒性试验时，可采用腹腔注射(ip)或皮下注射(Sc)方法给药，但如制剂有刺激性，则不宜。
给药时间 主要参考临床用药疗程，镇痛药，退热药，治疗感冒的药物，有的疗程短，不超过3～5天，给药时间宜短，最好一次给药即见疗效。补益药，防治老年病的药物，给药时间宜长。因中药作用缓慢、温和，常在造模同时开始用药。如用D一半乳糖皮下注射制备模拟衰老的大鼠或小鼠模型，造模和给药常在42天~50天左右。
9.给药容量和给药方式：
(1) 给药容量：应适宜,容量过小容易产生误差;过大，动物难于耐受。一般最大给药容量参考如下：
小鼠禁食不禁水12~16h，一次灌胃不超过0.4ml/10g体重；皮下(Sc)、腹腔(ip)和静脉注射(iv)不超过0.5ml/只。大鼠禁食不禁水12~16h，一次用量一般为1~2ml/100g体重，最大不宜超过5ml/只;腹腔注射1.5ml/只;皮下和静脉注射不超过1ml/只；肌内注射0.4ml/只。兔和猫最大用量：灌胃20ml/次,皮下、肌内注射2ml/次，腹腔5ml/次，静脉10ml/次。
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(2) 给药方式：分预防给药、治疗给药,或防治结合性给药。预防给药常先给药几天,使药物在体内达到有效浓度后再进行试验,观察药物的预防作用;治疗给药先制作动物模型,然后给药，观察药物的治疗作用,这种方式更符合临床。但对起效缓慢、作用温和、持续时间短暂的中药新药，治疗给药,常难以获得预期结果,只能采用预防给药的方法。有些实验也常采用预防和治疗相结合的方式,如体内抗感染实验,即先给药几日后,接种感染原后,再继续给药几日，观察中药新药的抗感染作用。
10. 实验结果的表达和统计分析 无论定量或定性实验结果，均要求列表表达。此与研究论文有别，论文可以用图表达，不用表。但新药药效研究资料必须有表，用具体统计所得实验数据列表说明，如认为数据表不足以表达清楚，可以附加图进一步说明。常用统计方法如下：
(1) 定量资料：又称量反应资料,这种反应可用数量差异表示,如血压、尿量、体温、血液生化测定值等。组间比较多采用t检验方法统计分析。
(2) 定性资料：又称质反应资料,机体对药物的反应只有“有” 或“无” 两种,如死或不死,惊厥出现或不出现等,试验结果常用百分率表示。统计分析可采用“卡方”检验。
(3)分级资料：也称为有序的计量资料,例如,药效的持续时间,病理程度按等级划分的资料,临床疗效按等级分组资料(痊愈、显效、好转、无效等)这些资料不宜用上述方法进行统计分析。常采用秩和法及Ridit法等非参数统计分析方法。
统计结果列表说明。数据表内容通常包含实验分组、给药剂量、每组动物数、指标数据和统计结果显著性标示。最后要求试验负责人熟悉研究内容和结果，并按形式审查内容整理资料，在书写资料中注意避免文字和数据错误。, 百拇医药