中华医学会第九次全国心血管病学术会议(四)通络方剂抑制炎症、保护内皮、稳定斑块、抗心律失常机制研究进
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编者按 2006年6月1日至4日,厦门迎来了两年一届的全国心血管病学术盛会--第九次全国心血管病学术会议。1500多名心血管领域专家就高血压、冠心病(CHD)、心肌病、心力衰竭、心律失常及介入心脏病学等专题进行了深入研究与广泛探讨。大会汇编共收录了研究文摘1100余篇,大会和专题分会及卫星会议演讲180余篇,其中与以岭通络方剂研究相关文摘6篇、演讲5篇。我报正在中医版陆续刊登通心络胶囊和参松养心胶囊研究相关文摘和现场演讲。
血管内皮功能障碍是冠状动脉痉挛、心绞痛发生的主要原因,是冠心病、脑血栓发生的始动因素和中心环节。Rho 激酶可以上调炎症、氧化应激、血栓形成和纤维化的多种因子水平并加速其反应过程,其参与了内皮功能障碍、血管痉挛、动脉硬化(AS)、局部缺血/再灌注损伤、高血压、卒中和心衰等心脑血管事件的发生。Rho 激酶抑制剂对动脉痉挛等许多心血管疾病具有可靠的疗效,因此Rho 激酶成为心血管内科的重要治疗靶点。
通心络抑制IL-1β介导的小型家猪冠状动脉痉挛的作用及机制(1)
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中国医科大学 曾定尹 关启刚
中国医科大学附属第一医院曾定尹、关启刚等认为,冠状动脉粥样硬化斑块的不稳定性和冠状动脉痉挛是急性冠脉综合征(ACS)发病机制中的关键。有效防治冠脉痉挛,保护和改善内皮功能,可以起到改善冠脉微循环,改善心肌缺血状态的作用。为此,关教授等通过对Rho激酶在冠状动脉痉挛发病中的作用研究,探讨了通心络抑制小型家猪冠状动脉痉挛的作用机制。
摘要
目的 我们在体观察通心络抑制冠状动脉痉挛(CAS)的作用及机制。
方法 我们选取16只小型雄性家猪,予麻醉后进行左侧开胸手术;选择冠状动脉左前降支及回旋支近端管腔外径近似相同的两处节段进行仔细分离,在血管外膜包裹吸附白细胞介素-1β(IL-1β,2.5 μg)的纸巾,构建冠状动脉粥样硬化模型;2 周后,我们采用冠状动脉造影观察经导管冠脉内给予5-羟色胺(10 μg/kg)诱发冠状动脉痉挛情况。我们将成功诱发冠状动脉痉挛的12只小型猪随机分成2组,对照组(6只,12条血管段)予以单纯专用饲料喂养,通心络组(6只,12条血管段)予以专用饲料和通心络[1 g/(kg·d)]喂养,连续喂养4周后停药1周,进行第二次造影。造影结束后,我们处死动物,截取包裹IL-1β的血管段,进行病理学检查,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western Blot)等方法,测定各组手术处理血管段Rho激酶及其底物肌球蛋白结合亚基磷酸化(MBS-P)的表达水平。
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结果 冠状动脉造影显示,12只小型猪冠状动脉局部血管发生动脉粥样硬化性改变和不同程度的管腔狭窄(10%~30%),5-羟色胺能诱发其痉挛。对照组 11条(91%)血管段5-羟色胺诱发痉挛阳性,1条(9%)血管段5-羟色胺诱发痉挛阴性。通心络组2条(17%)血管段5-羟色胺诱发痉挛阳性,10条(83%)血管段5-羟色胺诱发痉挛阴性。病理学检查示,两组均见不同程度炎症细胞聚集,与对照组比较通心络组管腔狭窄程度及内膜增生明显减轻;对照组Rho激酶mRNA的表达及肌球蛋白磷酸酶(MLCP)的MBS-P表达水平明显上调,通心络组与对照组相比,Rho激酶mRNA的表达被抑制(63.7%±4.3%比98.2%±7.7%,P <0.05),MBS-P水平明显降低(6510±779比 25485±4745,P <0.05)。
结论 通心络具有明显抑制5-羟色胺诱发的冠状动脉痉挛作用,这可能是通过抑制细胞内Rho激酶mRNA的表达,减少MBS-P表达水平来实现的。
, 百拇医药 冠状动脉痉挛(CAS)在ACS发病中起重要作用。国内外治疗CAS的药物有硝酸盐类药、钙拮抗剂(地尔硫 、硝苯地平等)和蛋白磷酸化酶抑制剂[法舒地尔(fasudil) 等]。而中药治疗CAS,还没有国内外公认的、疗效确切的药物。通心络胶囊的研制是基于络脉绌急/血管痉挛的络病病机理论。研究者首次将搜风解痉虫类药用于冠心病的治疗,其对以血管痉挛为主的缺血性疾病显示出独特的疗效。本实验利用IL-1β介导的小型猪CAS模型,通过冠状动脉造影在体观察通心络对CAS的抑制作用,并从Rho激酶途径探讨其作用机制。
材料与方法
冠状动脉痉挛模型的建立
1. 16只雄性家猪被分圈适应性饲养1周,均喂以专用颗粒饲料。
2. 实验猪接受安定(1 mg/kg,im)、氯胺酮(1.5 mg/kg,im.)镇静,苯巴比妥钠(30 mg/kg,iv.)麻醉后,其耳缘静脉被建立静脉通路,接受气管插管和呼吸机辅助呼吸;在无菌条件下,接受左侧开胸手术。我们选择其冠状动脉左前降支及回旋支近端管腔外径近似相同的2个节段进行仔细分离,在其血管外膜包裹吸附白细胞介素-1(IL-1β,2.5 μg)的纸巾,然后关胸;术后,给予其抗生素(青霉素80万单位bid,im,共2天)。
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3. IL-1β微球的制备 我们将200 mg琼脂糖微粒[CNBr-激活的琼脂糖(凝胶)4B,45~165 μm直径能够结合蛋白质的氨基酸残基,包括细胞因子]加入10 ml(1 mM)HCL溶液中,离心4次(1200转/分,5分钟)使琼脂糖微粒重悬于生理盐水溶液中;在悬液中加入细胞因子IL-1β 200 μg,置于室温1小时,4℃过夜;再次离心(1200转/分,5分钟)后,弃上清液,微球重悬于Tris/HCL缓冲液,1小时,然后用生理盐水洗脱。最后微粒重悬于生理盐水溶液中,浓度为50 μg/ml。
4. 观察局部冠状动脉粥样硬化情况及诱发痉挛情况 手术后2周,我们用上述方法麻醉动物,在其肝素化(10000 U/只)后,选择其右颈动脉插入6F鞘管,在X光下插入6F Judkin导管至冠脉开口处。我们将动物取左前斜位(左前斜300+头位200),给予造影剂注入和冠状动脉造影,观察其局部冠状动脉粥样硬化及狭窄情况,然后经造影导管注入5-羟色胺(10 μg/kg)诱发其冠状动脉痉挛,并同时用电影血管造影系统连续记录造影图像。我们成功建立了小型家猪冠状动脉痉挛模型12只,在建模过程中,16只小猪中因麻醉意外、开胸剥离血管破裂和造影诱发痉挛共死亡4只。
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分组用药情况
我们将成功建立的冠状动脉痉挛动物模型随机分成2组(各6只),予以对照组单纯专用饲料喂养,通心络组专用饲料加通心络[1 g/(kg·d)]喂养,连续喂养4周后停药1周,予以第二次造影。
观察通心络对冠状动脉痉挛的作用
对照组及通心络组的12只动物全部存活。在进行第二次造影后,我们观察通心络对冠状动脉粥样硬化及痉挛的作用,并记录结果。麻醉方法同前,造影及诱发痉挛方式同前。
(未完待续)
图1 对照组两次诱发冠脉痉挛前后造影图(相关内容见8月31日第20版)
注:图1a 为对照组第一次诱发冠脉痉挛前造影,前降支、回旋支 10 %~30 % 狭窄;图1b 为对照组诱发冠脉痉挛后造影,5-羟色胺诱发冠脉痉挛阳性;图1c 为对照组第二次(1个月后)诱发冠脉痉挛前造影,前降支、回旋支轻度狭窄;图1d 为对照组第二次(1个月后)诱发冠脉痉挛后造影,5-羟色胺诱发冠脉痉挛两支血管均阳性。, 百拇医药