梯度洗脱高效液相色谱法快速检测厌氧菌代谢物中的有机酸
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摘要 提出了一种快速分析厌氧细菌代谢物中5种有机酸的高效液相色谱方法。该方法采用乙腈0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液(pH 2.8)作为流动相，流速和流动相中两种组分的比例均采用四元泵程序梯度洗脱方法控制，检测波长为215 nm，柱温30℃时，能够快速、准确地分离和测定细菌培养基中的甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸和丙酸等5种有机酸，总分析时间只需4 min。方法的相对标准偏差为0.26%～1.26%，回收率950%～100.8%，各种有机酸的线性相关系数r≥0.99981，具有较高的精密度和准确度，可以用于细菌代谢物中有机酸的分析。关键词 高效液相色谱，梯度洗脱，有机酸，细菌培养基
1 引言
厌氧细菌的培养基中一般以有机酸、糖类或醇类物质作为碳源，在细菌生长代谢过程中，会将培养基中的碳源物质分解成为甲酸、乙酸、丙酸、乳酸等有机酸。通过分析这些有机酸在培养基中的含量，可以间接地了解细菌的生长状况，对于改进培养条件具有重要的参考价值。
目前，混合有机酸的检测方法主要有气相色谱法、离子色谱法和液相色谱法。气相色谱法[1~3]不仅需要通过液液萃取把有机酸转移到有机相，还要使用醇类进行衍生化处理，以提高检测的灵敏度，操作比较繁琐。离子色谱法[4, 5]虽然对于样品预处理的要求比较简单，但高浓度的无机离子可能会干扰有机酸根离子的测定。相比之下，液相色谱法[6,7]操作简单，准确度较高，所以目前应用较多。
但是，由于细菌培养液中代谢产物的组分非常复杂，使用一般的液相色谱法进行分析时，虽然主要组分可以在相对比较短的时间内分离完毕，但有一些不需要检测的组分往往需要相对较长的时间才能被洗脱，这些组分的存在使得分析时间大大延长，这对于需要进行快速分析的实验，如动力学研究等非常不利。
为了克服上述不足，本研究采用优化的流速和流动相组成随时间变化的双梯度程序洗脱液相色谱法，大大提高了细菌代谢产物中甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸和丙酸等5种有机酸的分析速度 ......
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