摘要 为了解决琼脂扩散法测定乳链菌肽效价时间长的问题，引进了分光光度测定法。确定的测定工艺为：藤黄微球菌接种接种龄为指数期的中后期、接种量为10%的，加入待检样品在温度33℃、转速150 r/min的摇床培养5 h，600 nm波长下测定吸光度值，通过乳酸菌肽浓度与检测菌吸光度之间的函数关系准确测量乳酸菌肽的效价。重复测定的最大相对误差在±5%以内。

    关键词 乳链菌肽，效价，快速测定，分光光度法

     1 引言

    乳酸链球菌素(nisin)，又称乳链菌肽，是由乳品发酵微生物Lactococcus lactisssplactis产生的一个多肽抗菌物质，能有效抑制引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌(G+)及病原菌的繁殖[1,2]，是一种纯天然食品防腐剂。目前，我国已批准乳链菌肽可以作为一种纯天然食品防腐剂使用，广泛用于乳制品、发酵饮品、罐藏食品，肉类及肉制品的防腐保鲜等[3]。

    乳酸链球菌素的生产方法为微生物发酵法。目前，用于检测乳酸链球菌素生物活性的最常用方法是琼脂扩散法[4]，其原理是在琼脂表面利用检测菌的生长显示出抑菌效果。为了提高测定的准确性，辛宇等[5]研究了二剂量法影响因素，确定了效价计算的C++运算程序。但运用该法检测所需时间超过20 h的培养才能观察到清晰的抑菌圈从而得到准确的结果，不能满足工业生产中快速反馈各生产环节产品生物活性的要求[6]。在乳酸链球菌素的发酵生产过程中，必须随时掌握发酵以及分离过程中乳酸链球菌素的变化情况，以便及时改变生产工艺条件，特别是只有确定分离后的乳酸链球菌素的效价，才能进行喷雾干燥操作。然而目前工业生产过程中主要根据经验进行操作，因此很有必要开发一种快速准确的效价检测方法。Flores等[7]利用试管培养法定量测定Nisin生物活性。Turcotte等[8]以厌氧菌片球菌为指示菌，运用96孔聚乙烯板法，并利用自制的微盘分光光度计对比浊度法测定了Nisin生物活性。本研究利用的指示剂为普遍应用于抗生素效价测定的藤黄微球菌，采用有氧摇床培养的方法，深入地研究了乳酸链球菌素活性的影响因素，建立了分光光度法快速测定乳酸链球菌素生物活性的方法。

    2 实验部分

    2.1 仪器及试剂

    752型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司); 检测指示菌藤黄微球菌的培养用摇床；200 μL及1000 μL微量加样器(SOCOREX.Swiss公司)；5 mL加样器及50 mL分装瓶(BRAND.Germany公司) ......