脱氧核糖核酸与对二甲氨基偶氮苯邻羧酸作用机理的荧光光谱研究
脱氧核糖核酸,对二甲氨基偶氮苯邻羧酸,荧光光谱,猝灭,热力学参数,,脱氧核糖核酸，对二甲氨基偶氮苯邻羧酸，荧光光谱，猝灭，热力学参数
摘要 通过实验，采用荧光光谱法研究了对二甲氨基偶氮苯邻羧酸(JJR)与脱氧核糖核酸(DNA)结合反应的特征。由SternVolmer方程和双倒数曲线LineweaverBurk方程获得了反应的猝灭常数Ksv=1×106～2×106 L/mol、结合常数KA≈05×106 mol/L以及对猝灭的类型做出了推断。通过热力学参数、离子强度实验讨论并得到它们以氢键、嵌插入、范德华力等几种方式作用。该反应的最佳实验条件为：pH值控制在61左右；加入顺序为JJR+DNA+(BR)适宜反应体系；线性范围在0～100 mg/L之间。关键词 脱氧核糖核酸，对二甲氨基偶氮苯邻羧酸，荧光光谱，猝灭，热力学参数
1 引言
核酸是重要的生命物质，是遗传信息的携带者和基因表达的物质基础。随着现代分子生物学和分子生物技术的发展，关于核酸的研究以及核酸与各类物质相互作用的化学机理研究已经成为研究核酸的一个重要领域。DNA的研究对于重组DNA的筛选、基因分析、染色体的基因定位和各种异常的遗传病、传染病、肿瘤、癌症等的诊断、治疗以及对生物工程、工业、农业等方面的发展有着十分重要的意义。
DNA探针已作为研究DNA的有力工具。特别是发光标记探针已经应用于DNA杂交研究、疾病诊断和食品微生物检测等[1~3]。核酸含量的测定方法有分光光度法、荧光光度法[4~8]以及近年来新兴的共振光散射法[9]等。研究开发新的、灵敏度高的DNA探针仍然是很有意义的工作。
本研究利用荧光光谱法，采用对二甲氨基偶氮苯邻羧酸在pH=61溶液中直接与DNA作用，致使其荧光被猝灭。由SternVolmer方程和双倒数LineweaverBurk方程获得了反应的猝灭常数Ksv=1×106～2×106 L/mol和结合常数KA≈05×106 mol/L。与同类方法比较,这两个常数均高出1～2个数量级。以实验数据对猝灭的类型做出了推断。通过热力学参数、离子强度实验,讨论了结合方式。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
RF5301荧光光谱仪(日本岛津公司)；酸度计(美国Thermo orion公司)。脱氧核糖核酸(DNA)(生化试剂Sigma公司):10120g/L水溶液；对二甲氧基偶氮苯邻羧酸(JJR,分析纯，上海崇明县裕安裕西试剂厂):1029 g/L碱溶液；腺嘌呤(生化试剂，北京欣经科技生物技术公司):02010 g/L；牛血清白蛋白(BSA)(生化试剂，上海丽珠东风生物技术有限公司):09880 g/L；胸腺嘧啶(生化试剂 ......
您现在查看是摘要页，全文长 10482 字符。