摘 要 目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体，为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物，从HBV DNA阳性的血清中，PCR扩增得到HBV X基因全序列，将其连接到真核表达载体pCDNA3.1上后，酶切图谱分析PCR检测和扩增产物序列分析等，鉴定所构建的真核表达载体。结果:以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知HBV X基因大小相同，酶切也得到目的基因片段，测序结果也显示与已知X基因序列相同。结论:成功构建了HBV X基因的真核表达载体，为下一步研究HBV X基因及其产物的功能奠定了基础。

    关键词 HBV;真核表达载体;pCDNA3.1

    乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)与原发性肝细胞癌(Primary Hepatocellular Carcinoma，PHCC)密切相关，呈全球流行，严重威胁人类健康 [1，2] 。至今，HBV的致癌机制仍不清楚。近年来发现，HBV X基因的编码蛋白HBV X蛋白(HBx Ag)被认为在慢性HBV感染发展成HCC中起重要作用，可以在多个环节影响HCC形成和发展。我们构建了X基因的表达载体，为了深入系统地研究HBV X基因对原发性肝细胞癌发生的影响及其作用机制和发展针对该基因的抗HBV及抗肝癌技术奠定实验室基础。

     1 材料和方法

    1.1 材料

    HBV DNA阳性血清样本来自我院门诊和住院病人。

    1.2 主要试剂

    Trireagent液购自Promega公司;γTaqDNA polymerase ......