实时荧光聚合酶链反应技术在病原体检测方面的应用
RT-PCR;微生物;检测,,RT-PCR;微生物;检测,1定性分析,2定量分析,3突变分析,参考文献:
Application of real-time PCR in the detection of pathogens.MIAO Han-qiang,CHEN Gong-xiang.
(Center of Microorganism of the Second Affiliated Hospital of Zhejiang University Medical College,Hangzhou310008,Zhejiang,P.R.China)
摘要:聚合酶链反应(PCR)已经成为分子生物学实验室的重要工具,实时荧光聚合酶链反应技术以其定量准确、敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一大步。本文对其目前在临床常见细菌或病毒检测中的主要应用进行综述。
关键词:RT-PCR;微生物;检测
传统意义上的病原体检测主要分为培养和血清学检测等。聚合酶链反应(PCR)技术将病原体的检测带入了分子生物学时代,并且得到广泛应用。实时荧光PCR反应技术是基于PCR反应技术平台的衍生物,在病原体检测方面,特别是医学微生物的检测具有重要意义。
1 定性分析
PCR技术目前在微生物实验室中主要被用于各种微生物的定性检测,特别是临床致病细菌。实时荧光PCR(Real time)减少了传统PCR技术在完成扩增后对产物的检测过程,缩短了检测时间,并且因为是在封闭管中进行检测,减少了PCR污染,因此越来越多地被用于代替带入了传统PCR反应来检测细菌。Jothikumar等 [1]运用一种复合式实时Sybr Green荧光PCR方法快速测定大肠杆菌O 157 :H 7 。他们用一对特异引物同时扩增大肠杆菌O 15 7:H 7 的类志贺毒素(stx1或stx2)基因。鉴于扩增后产生的两个PCR产物的Tm值不等,由此加以区别。此方法操作简便快速、特异性好。Kosters等 [2] 用实时荧光PCR检测临床标本中的百日咳鲍特菌和副百日鲍特菌 ......
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