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栾明明 邬建敏
溶胶凝胶膜,,溶胶凝胶，固定化胰蛋白酶，蛋白质酶解，肽谱分析,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References
摘要 采用溶胶凝胶包埋法在96孔板中固定胰蛋白酶，制备高通量的酶解反应器。考察了四乙氧基硅烷(TEOS)与甲基三甲氧基硅烷(MTMS)的不同比例对凝胶膜的成胶速度、机械强度、透明度、固定酶的活性及稳定性的影响。以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋白,比较了溶胶凝胶固定化酶与溶液态酶的稳定性和催化活性，用HPLC对BSA的酶解产物进行了肽谱分析，比较了二者的酶解效率。结果表明，TEOS与MTMS比例为1∶1时，凝胶膜有很好的成胶速度、机械强度、透明度；包埋态酶有很高的活性和稳定性。HPLC对肽段的分析结果表明，固定化酶的酶解效率优于溶液态酶。关键词 溶胶凝胶，固定化胰蛋白酶，蛋白质酶解，肽谱分析
1 引言
蛋白质的肽谱分析是快速鉴定蛋白一级结构的技术之一[1]。蛋白质可被特异性的酶，如胰蛋白酶(trypsin), LysC酶等切断后得到一系列的肽片断。通过HPLC或MALDITOF对肽片断进行分离与鉴定，可得到一套具有特征性的肽谱数据。蛋白质的肽谱鉴定技术被广泛应用于监测蛋白质的病理变化、筛选靶标药物、基因突变、翻译后修饰等[[2，3]。最常用的蛋白水解酶是胰蛋白酶，可以有两种方式进行酶切反应：(1)在溶液状态均相条件下进行酶解反应 ......
1 引言
蛋白质的肽谱分析是快速鉴定蛋白一级结构的技术之一[1]。蛋白质可被特异性的酶，如胰蛋白酶(trypsin), LysC酶等切断后得到一系列的肽片断。通过HPLC或MALDITOF对肽片断进行分离与鉴定，可得到一套具有特征性的肽谱数据。蛋白质的肽谱鉴定技术被广泛应用于监测蛋白质的病理变化、筛选靶标药物、基因突变、翻译后修饰等[[2，3]。最常用的蛋白水解酶是胰蛋白酶，可以有两种方式进行酶切反应：(1)在溶液状态均相条件下进行酶解反应 ......