cMet蛋白在大肠癌中的表达和意义
[摘要] 目的 探讨cMet蛋白与大肠癌临床病理和预后的关系。方法 选取经手术且经病理确诊的大肠癌患者60例,用免疫组化方法进行cMet蛋白染色，采用COX比例风险模型对相关预后因素进行分析。结果 cMet蛋白与临床病理有相关性，多因素COX模型分析发现是否有淋巴结转移是大肠癌预后的独立因子。结论 cMet蛋白不是大肠癌预后的主要独立因素。
[关键词] 大肠癌；免疫组化；cMet蛋白；预后
Significance of cMet protein expression in colorectal carcinoma
LIU Xinliang,DU Zhijian,ZHAO Qunen.
The First Central Hospital,Baoding 071000,China
[Abstract] Objective To investigate the correlation between the expression of cMet protein and pathologic feature and prognosis in colorectal carcinoma.Methods The expression of cMet protein were examined by immunohistochemical staining in 60 specimens of colorectal carcinoma and prognosis was assessed by cox model regression.Results The positive rate of cMet protein had relation with pathological features,and cox model regression showed that lymph node infiltration was the independent prognosis factor.Conclusion CMet protein was not an independent prognosis factor.
[Key words] colorectal carcinoma;immunohistochemistry;cMet protein;prognosis
大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，每年全世界约有100万人发病，50万人死于此病。在西方国家大肠癌死亡率仅次于肺癌和乳腺癌，居恶性肿瘤死亡率第三位[1]。据1990～1992年中国十分之一人口死因抽样调查结果显示，中国大肠癌的年死亡率为5.30/10万，居恶性肿瘤死因第五位[2]。近年来我国大肠癌发病率呈升高趋势。cMet原癌基因产物cMet蛋白是肝细胞生长因子受体，肝细胞生长因子和过度表达的cMet蛋白结合，在肿瘤的发生、进展和血管形成中都起着重要作用[3]。笔者采用免疫组织化学染色方法,观察60例大肠癌手术后标本cMet蛋白表达,结合临床病理特征进行综合分析,探讨cMet蛋白与大肠癌病理学特征相关性及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 60例大肠癌组织标本来自我院外科1995年1月～2003年12月住院手术患者,经病理证实，有完整随访资料。男36例,女24例;年龄39～65岁，平均60.2岁。所有患者术前均未经化疗或放疗。60例大肠癌患者中组织学分类为:高分化腺癌10例,中分化腺癌31例,低分化腺癌15例,未分化癌4例；Dukes分期为:Dukes A期5例,B期16例,C期39例,D期0例。
1.2 免疫组化染色 cMet检测使用兔抗人cMet多克隆
抗体浓缩液和SP试剂盒均为美国Santa Cruz产品，DAB显色试剂盒为北京中山生物技术公司产品，以上试剂均购自河北省渤海生物工程有限公司。抗体用PBS稀释,工作浓度为1∶100。以PBS代替cMet多克隆抗体作为阴性对照。染色采用SP方法。
1.3 结果判定 cMet以光镜下观片，结果以细胞膜出现棕黄色颗粒为cMet蛋白染色阳性细胞，可伴有细胞浆着色。以同一张切片出现cMet蛋白阳性细胞≥30%定为cMet蛋白染色阳性病例。
1.4 统计学方法 使用SPSS 13.0统计包。组间阳性率比较采用直接概率法和四格表χ2检验，生存分析先进行单因素分析(LogRank检验比较显著性水平,KaplanMeier法计算累积生存率),得出有统计学意义的预后因素,再进一步进行多因素COX比例风险模型分析,发现影响大肠癌患者预后的独立因素。
2 结果
2.1 cMet蛋白表达与临床病理关系 见表1。
2.2 单因素分析 将上述各指标按分组资料的KaplanMeier法计算总生存率,采用LogRank法检验各组间的显著性水平,结果见表2。
2.3 多因素分析 为消除各因素之间的交互作用及混杂因素的影响,本研究拟采用多因素COX风险比例函数模型分析,将单因素分析时有统计学显著性意义的变量加入COX模型分析,结果见表3。表1 cMet蛋白表达与临床病理关系(略)表2 临床病理指标生存率 (略)
3 讨论
在大肠癌临床治疗中,尽管手术技巧及各种辅助治疗近年来有许多改进,但国内大肠癌5年总生存率仍徘徊在50%左右。这样的状况促使临床及研究人员寻找一些能准确估价大肠癌预后状况的指标,来帮助临床医生确认具有不同程度局部复发和远处转移可能的高危组人群,指导治疗方案的正确选择,提高5年生存率。本研究试图探讨cMet蛋白与大肠癌的病理指标和预后的意义。cMet蛋白是由原癌基因cmet编码的一类蛋白质。cmet基因位于人类7号染色体长臂(7q31)[3]。其成熟的cMet蛋白位于细胞膜上，是一种细胞膜受体，有α亚基和β亚基。β亚基有胞外区、跨膜区和胞内区。α亚基只有胞外部分，借助于二硫键附于β亚基上。α亚基和β亚基的胞外区是配体识别部位，而胞内部分具有酪氨酸激酶活性[3]。cMet受体的配体是肝细胞生长因子(HGF)。HGF和cMet结合导致受体自身磷酸化，增强了cMet酪氨酸激酶的活性，导致多种底物蛋白的酪氨酸磷酸化。研究表明[4]，肝细胞生长因子和过度表达的cMet蛋白结合，在肿瘤的发生、进展、分化和血管形成中都起着重要作用。
本组病例研究发现，低分化大肠癌的cMet蛋白表达阳性率明显高于高分化大肠癌，有淋巴结转移大肠癌的cMet蛋白表达阳性率明显高于无淋巴结转移，说明cMet蛋白可能参与了大肠癌的浸润和转移。这与Ajisaka等[4]的研究结果一致。
单因素生存分析提示肿瘤大小、组织分化程度、cMet蛋白的阳性表达和淋巴结转移与否是影响生存率的重要因子。多因素分析显示只有淋巴结转移是影响预后的独立因子。虽然本研究发现cMet蛋白不是影响预后的独立因子，但是cMet蛋白高表达的大肠癌大多组织分化差，淋巴结转移发生率高。通过生物手段抑制或封闭cMet蛋白的过度表达可能成为大肠癌辅助治疗的一个好方法。
[参考文献]
1 Houlston RS. What could we do now: molecular pathology of colorectal cancer. J Clin Pathol Mol,2001,54:206-221.
2 李连第，鲁风珠，张思维,等.1990-1992中国恶性肿瘤死亡率流行分布情况分析.中华肿瘤杂志,1996,18(6):403-407.
3 Ajisaka H,Nishimura G,Tsuneda A,et al. The expression of cmet/hepatocyte growth factor receptor in colorectal cancer. Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi,1998,95(7):750-754.
4 Liu Y. The human hepatocyte growth factor receptor gene: complete structural organization and promoter characterization.Gene,1998,215(1):159-169.
作者单位： 071000 河北保定，保定市第一中心医院
(编辑：魏 冉), 百拇医药(刘新良，杜志坚，赵群恩)
[关键词] 大肠癌；免疫组化；cMet蛋白；预后
Significance of cMet protein expression in colorectal carcinoma
LIU Xinliang,DU Zhijian,ZHAO Qunen.
The First Central Hospital,Baoding 071000,China
[Abstract] Objective To investigate the correlation between the expression of cMet protein and pathologic feature and prognosis in colorectal carcinoma.Methods The expression of cMet protein were examined by immunohistochemical staining in 60 specimens of colorectal carcinoma and prognosis was assessed by cox model regression.Results The positive rate of cMet protein had relation with pathological features,and cox model regression showed that lymph node infiltration was the independent prognosis factor.Conclusion CMet protein was not an independent prognosis factor.
[Key words] colorectal carcinoma;immunohistochemistry;cMet protein;prognosis
大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，每年全世界约有100万人发病，50万人死于此病。在西方国家大肠癌死亡率仅次于肺癌和乳腺癌，居恶性肿瘤死亡率第三位[1]。据1990～1992年中国十分之一人口死因抽样调查结果显示，中国大肠癌的年死亡率为5.30/10万，居恶性肿瘤死因第五位[2]。近年来我国大肠癌发病率呈升高趋势。cMet原癌基因产物cMet蛋白是肝细胞生长因子受体，肝细胞生长因子和过度表达的cMet蛋白结合，在肿瘤的发生、进展和血管形成中都起着重要作用[3]。笔者采用免疫组织化学染色方法,观察60例大肠癌手术后标本cMet蛋白表达,结合临床病理特征进行综合分析,探讨cMet蛋白与大肠癌病理学特征相关性及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 60例大肠癌组织标本来自我院外科1995年1月～2003年12月住院手术患者,经病理证实，有完整随访资料。男36例,女24例;年龄39～65岁，平均60.2岁。所有患者术前均未经化疗或放疗。60例大肠癌患者中组织学分类为:高分化腺癌10例,中分化腺癌31例,低分化腺癌15例,未分化癌4例；Dukes分期为:Dukes A期5例,B期16例,C期39例,D期0例。
1.2 免疫组化染色 cMet检测使用兔抗人cMet多克隆
抗体浓缩液和SP试剂盒均为美国Santa Cruz产品，DAB显色试剂盒为北京中山生物技术公司产品，以上试剂均购自河北省渤海生物工程有限公司。抗体用PBS稀释,工作浓度为1∶100。以PBS代替cMet多克隆抗体作为阴性对照。染色采用SP方法。
1.3 结果判定 cMet以光镜下观片，结果以细胞膜出现棕黄色颗粒为cMet蛋白染色阳性细胞，可伴有细胞浆着色。以同一张切片出现cMet蛋白阳性细胞≥30%定为cMet蛋白染色阳性病例。
1.4 统计学方法 使用SPSS 13.0统计包。组间阳性率比较采用直接概率法和四格表χ2检验，生存分析先进行单因素分析(LogRank检验比较显著性水平,KaplanMeier法计算累积生存率),得出有统计学意义的预后因素,再进一步进行多因素COX比例风险模型分析,发现影响大肠癌患者预后的独立因素。
2 结果
2.1 cMet蛋白表达与临床病理关系 见表1。
2.2 单因素分析 将上述各指标按分组资料的KaplanMeier法计算总生存率,采用LogRank法检验各组间的显著性水平,结果见表2。
2.3 多因素分析 为消除各因素之间的交互作用及混杂因素的影响,本研究拟采用多因素COX风险比例函数模型分析,将单因素分析时有统计学显著性意义的变量加入COX模型分析,结果见表3。表1 cMet蛋白表达与临床病理关系(略)表2 临床病理指标生存率 (略)
3 讨论
在大肠癌临床治疗中,尽管手术技巧及各种辅助治疗近年来有许多改进,但国内大肠癌5年总生存率仍徘徊在50%左右。这样的状况促使临床及研究人员寻找一些能准确估价大肠癌预后状况的指标,来帮助临床医生确认具有不同程度局部复发和远处转移可能的高危组人群,指导治疗方案的正确选择,提高5年生存率。本研究试图探讨cMet蛋白与大肠癌的病理指标和预后的意义。cMet蛋白是由原癌基因cmet编码的一类蛋白质。cmet基因位于人类7号染色体长臂(7q31)[3]。其成熟的cMet蛋白位于细胞膜上，是一种细胞膜受体，有α亚基和β亚基。β亚基有胞外区、跨膜区和胞内区。α亚基只有胞外部分，借助于二硫键附于β亚基上。α亚基和β亚基的胞外区是配体识别部位，而胞内部分具有酪氨酸激酶活性[3]。cMet受体的配体是肝细胞生长因子(HGF)。HGF和cMet结合导致受体自身磷酸化，增强了cMet酪氨酸激酶的活性，导致多种底物蛋白的酪氨酸磷酸化。研究表明[4]，肝细胞生长因子和过度表达的cMet蛋白结合，在肿瘤的发生、进展、分化和血管形成中都起着重要作用。
本组病例研究发现，低分化大肠癌的cMet蛋白表达阳性率明显高于高分化大肠癌，有淋巴结转移大肠癌的cMet蛋白表达阳性率明显高于无淋巴结转移，说明cMet蛋白可能参与了大肠癌的浸润和转移。这与Ajisaka等[4]的研究结果一致。
单因素生存分析提示肿瘤大小、组织分化程度、cMet蛋白的阳性表达和淋巴结转移与否是影响生存率的重要因子。多因素分析显示只有淋巴结转移是影响预后的独立因子。虽然本研究发现cMet蛋白不是影响预后的独立因子，但是cMet蛋白高表达的大肠癌大多组织分化差，淋巴结转移发生率高。通过生物手段抑制或封闭cMet蛋白的过度表达可能成为大肠癌辅助治疗的一个好方法。
[参考文献]
1 Houlston RS. What could we do now: molecular pathology of colorectal cancer. J Clin Pathol Mol,2001,54:206-221.
2 李连第，鲁风珠，张思维,等.1990-1992中国恶性肿瘤死亡率流行分布情况分析.中华肿瘤杂志,1996,18(6):403-407.
3 Ajisaka H,Nishimura G,Tsuneda A,et al. The expression of cmet/hepatocyte growth factor receptor in colorectal cancer. Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi,1998,95(7):750-754.
4 Liu Y. The human hepatocyte growth factor receptor gene: complete structural organization and promoter characterization.Gene,1998,215(1):159-169.
作者单位： 071000 河北保定，保定市第一中心医院
(编辑：魏 冉), 百拇医药(刘新良，杜志坚，赵群恩)