关键词 骨髓间充质干细胞；分化；软骨；组织工程

    130 年前,德国病理学家Cohnhein 在研究创口愈合过程中首次提出骨髓中存在充质干细胞(BMSCs)的观点。近年发现,BMSCs具有向多种细胞系转化的潜能,自体获取的骨髓MSCs回输后不会发生免疫排斥反应,体外基因转染率高,因此BMSCs已成为组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面的研究热点。随着组织干细胞研究的兴起，特别是对组织干细胞可塑性的深入研究使得间充质干细胞的发育潜能，体外诱导分化、分离、筛选方法等的研究有了突破性进展。同时由于间充质干细胞在体内分布广泛，易于获得，并能在体外大量扩增，因此成为一种特别的组织细胞越来越引起人们的关注。

    1 BMSCs的研究

    1.1 BMSCs的分布 骨髓中存在大量间充质干细胞，成为开展间充质干细胞研究最重要的来源。近2年，骨髓以外的间充质干细胞也不断被发现。首先,不同时期的造血器官、卵黄囊、主动脉-生殖嵴-中肾区、胎肝、脾等都有间充质干细胞的存在,发挥支持造血功能。2001年,赵春华的研究组从胎肝中分离到间充质干细胞，发现其与骨髓来源的间充质干细胞具有相同的分化潜能、表型以及生物学性状[1]。此后Baric等从骨滑膜组织，Young从胚胎、成人以及老年人的肌肉、真皮组织中分离到间充质干细胞[2]。因此人们认为这种成纤维细胞样的，具有多种分化潜能的间充质干细胞广泛存在于造血系统及结缔组织中。

    1.2 BMSCs的分离与培养 目前,BMSCs的分离纯化及体外培养方法,由于各实验室的条件不同,许多实验室仍是在Friedenstein等的方法基础上进行一定的改进,即根据BMSCs易于粘附塑料底物的特性来实现分离，称为贴壁筛选法;根据BMSCs与其他细胞密度不同,采用细胞分离液来分离,即密度梯度离心法;根据细胞大小或者细胞表面的一些特殊标志来进行分离,即流式细胞仪分选法。目前国内采用较多的是利用密度梯度离心法来分离纯化BMSCs。现在国外较为关注的一种方法是依椐BMSCs对生长因子的反应性不同,通过选择适当的因子刺激增殖而获得含有较高比例BMSCs。在国外还建立了另外一种简单经济高效的分离BMSCs的方法,即利用一种具有3μm孔径的塑料培养皿从骨髓中筛选BMSCs,这种方法筛选出来的BMSCs均质性>98%,也具有自我增殖和更新及分化为各种结缔组织的能力[3] 。

    1.3 BMSCs的主要生物学特性 骨髓中只含有少量间充质干细胞,仅占骨髓细胞的0.01/万～1.00/万,并随年龄的增加而减少 ......