一种用于免疫测定的蛋白质微阵列的制备方法
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摘 要 利用SU8光刻胶光刻成型技术成功制备了具有进样孔、管道、贮液池和喷孔等结构的微喷阵列芯片，通过调节点样液中DMSO、硼酸盐和PBS溶液的混合比例，降低了点样液的蒸汽压，避免了微量溶液的快速蒸发，稳定了液体在管道中传输速度，提高了蛋白质传输到尼龙膜上的传输效率，避免了管道和喷孔之间的交叉污染，并解决了多次重复利用后残留样品影响等问题。人IgG经过该芯片喷点到尼龙膜形成5×5蛋白质微阵列，与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG进行抗原抗体反应，25个样品点信号的相对标准偏差能达到4.1%，直径相对标准偏差达到了3.0%。关键词 SU8，微阵列，微喷阵列芯片，微制作，免疫测定，抗原抗体反应
1 引 言
以DNA芯片和蛋白质芯片为代表的生物微阵列技术广泛应用于临床诊断、新基因发现、药物筛选和免疫学检测等现代医学领域\[1,2\]。蛋白质微阵列芯片由于其自身制作过程复杂和蛋白质本身对外界特敏感等原因，只能应用于基础药学研究和辅助诊断中\[3\]。传统制作蛋白质微阵列芯片的方法是将蛋白质分子以二维阵列形式印刻或捕获在生化反应膜上，或以光刻或“SPOT”技术在平面上合成肽链\[4\]。近年来，相继开发了许多能进行蛋白质输送和点样的装置，如蛋白印章\[5\]、直接滴落TopSpot系列\[6～8\]和样品分配池DWP系列\[9\]。这些技术有以下优势：每个样品通过各自的管道以连续流的形式传输到喷孔；这些装置能同时制作高密度的微阵列；样品点的体积或直径均一、稳定；整个点样步骤在常温下进行，避免了在高温或极端条件下破坏蛋白质活性。其实，低密度或中等密度的微阵列分析就能满足一般临床实验室的要求，如酶联免疫吸附实验(ELISA)\[10\]。本研究介绍了一种基于多层SU8结构的微喷阵列芯片和一种含有二甲亚砜(DMSO)、硼酸盐溶液和磷酸盐缓冲盐液(PBS)的点样液，并利用传统的免疫检测中常用的尼龙膜作为微阵列的载体，进行了蛋白质微阵列芯片的制作与抗原抗体反应测试。相对于以上制作蛋白质芯片的几种方法，本实验制作的微阵列的主要优势在于：尼龙膜表面多孔、柔软、吸附性强，提高了蛋白质的结合效率，并能保持蛋白质构象和暴露蛋白质的活性区域，代替了要进行复杂的表面修饰处理过程的玻璃片、硅片和聚合物；而且，直接在尼龙膜上进行显色反应大大加快了临床免疫测定的速度；另外，蛋白质可在芯片管道中自动传输，优化的点样液大大提高了管道中传输蛋白质的效率；气压驱动条件下在3.4 mm×3.4 mm 的尼龙膜上可快速、便捷、稳定、均一地制成5×5阵列样品点；多层SU8微喷阵列芯片与尼龙膜价格便宜 ......
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