大豆;_钙调素;_亚型;_单克隆抗体____

抗大豆Ⅱ号亚型钙调素单克隆抗体的制备与鉴定

http://www.100md.com 《细胞与分子免疫学杂志》 2007年第1期

大豆;,钙调素;,亚型;,单克隆抗体,,\]大豆;,钙调素;,亚型;,单克隆抗体,\[关键词\]大豆;钙调素;亚型;单克隆抗体,1材料和方法,2结果,3讨论,参考文献:

     \[摘要\] 目的: 制备抗大豆Ⅱ号亚型钙调素(SCaM2)单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法: 从含有pSCaM2的大肠杆菌BL21中, 提取并纯化SCaM2。以其作为抗原免疫BALB/c小鼠后, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞经细胞融合、筛选及克隆化, 建立稳定分泌SCaM2 mAb的杂交瘤细胞株, 并对抗SCaM2 mAb进行鉴定。结果: 经两次细胞融合, 共获得10株可稳定分泌抗SCaM2 mAb的杂交瘤细胞株。对其中3株杂交瘤细胞制备的腹水mAb(6F11F3、 7C5E9、 7E10E2), 用间接ELISA及免疫印迹实验表明, 在高稀释度时, mAb 6F11F3可识别SCaM1和SCaM2, 而mAb 7C5E9和7E10E2可分别识别SCaM4和SCaM5。Ig亚类鉴定结果表明, mAb 6F11F3和7C5E9均为IgG2a, mAb 7E10E2为IgG1。相加实验的结果显示, mAb 6F11F3和7C5E9可能识别SCaM2相同的抗原表位; 而mAb 7E10E2可能识别不同的抗原表位。mAb 6F11F3对SCaM2的亲和常数为(2.127±0.418)×106M-1, mAb 7C5E9对SCaM4的亲和常数为(9.69±2.406)×106M-1, mAb 7E10E2对SCaM5的亲和常数为(1.203±0.429)×107M-1。结论: 制备了可识别不同SCaM亚型的mAb 6F11F3、 7C5E9及7E10E2, 为研究SCaM的特性及功能提供了重要的制剂。

    \[关键词\]大豆; 钙调素; 亚型; 单克隆抗体

    植物钙调素(CaM)有多种亚型, 它们在生化特性、组织分布及生物学功能等方面具有各自的特性。通过对不同亚型CaM进行亚细胞定位, 可了解各个亚型CaM的意义, 并在此基础上研究不同亚型CaM在植物生长发育过程中的作用及调节机制。我们制备了抗大豆2号亚型CaM(SCaM2)的单克隆抗体(mAb)并对其特性进行了鉴定。

    1 材料和方法

    1.1 材料质粒pSCaM2和大肠杆菌BL21(DE3)由河北师大细胞学实验室惠赠。BALB/c纯系小白鼠, 由河北医科大学实验动物中心提供。Sp2/0Ag14小鼠骨髓瘤细胞, 由河北省科学院生物所提供。牛血清白蛋白、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG及HT、 HAT、胎牛血清, 均购自华美生物工程公司。IPTG为InaIC公司产品。标准低分子量蛋白、 Phenylsepharose 4B疏水亲和层析柱为Pharmacia公司产品 ......

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